Pro动物细胞/组织总蛋白提取试剂盒(柱式法)-ExKine™

Name: Pro动物细胞/组织总蛋白提取试剂盒(柱式法)-ExKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTP3007
Price: 198 CNY
Availability: InStock

ExKine™ Pro Total Protein Extraction Kit for Animal Cultured Cells/Tissues

产品货号

KTP3007

产品特点：

多用途：兼容新鲜哺乳动物细胞及多种组织，几乎无交叉污染。

方便快捷：非变性提取，活性蛋白可在7分钟内完成分离。

兼容性好：所得蛋白可直接用于Western Blot、蛋白分析、IP、ELISA等下游实验。

选择规格

5 T

¥198

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50T

¥448

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🎉 限时优惠

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

ExKine™ Pro动物细胞/组织总蛋白提取试剂盒（柱式法）(ExKine™ Pro Total Protein Extraction Kit for Animal Cultured Cells/Tissues) 是一款专为哺乳动物细胞与组织样品设计的柱式蛋白提取系统，可在7分钟内完成非变性、高活性总蛋白的快速分离，广泛服务于下游Western Blot、IP、ELISA等多种实验需求。

背景知识
从动物细胞或组织中高效、低污染地制备蛋白提取物，是进行SDS-PAGE、免疫印迹、免疫沉淀、ELISA、酶活性测定及小规模蛋白层析纯化等研究的前提。传统超声或反复冻融法耗时较长且易引入交叉污染。ExKine™ Pro试剂盒采用专利的柱式过滤技术，通过专用裂解缓冲液与蛋白提取滤筒的协同作用，在2–8 °C低温条件下即可温和裂解细胞，快速截留细胞碎片，使目标蛋白直接流入收集管，既保证了蛋白活性，又显著降低杂质干扰。

应用领域

细胞信号转导研究、肿瘤机制探索、药物靶点验证、蛋白相互作用分析、酶学检测、蛋白质组学前期样品制备等以哺乳动物细胞或组织为起始材料的科研场景。

产品参数

中文名称	Pro动物细胞/组织总蛋白提取试剂盒(柱式法)-ExKine™
英文名称	ExKine™ Pro Total Protein Extraction Kit for Animal Cultured Cells/Tissues
产品货号	KTP3007
试剂盒组分	•Denaturing cell lysis buffer • Native cell lysis buffer • Protein extraction filter cartridges • Collection tubes with cap • Plastic rods
注意事项	所有实验步骤请在2-8°C下执行。使用预冷的缓冲液和设备，并确保所有溶液都是解冻和均匀的。
保存建议	常温保存12个月。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

试剂准备

Denaturing cell lysis buffer：即用型；常温保存。

Native cell lysis buffer：即用型；常温保存。

实验步骤

I 变性总蛋白提取

A. 非贴壁细胞

离心管柱套管准备：将 Protein extraction filter cartridge套在 Collection tube with cap上，放在冰上预冷；
低速离心收集细胞，在 1.5 mL离心管中加入预冷的 PBS，涡旋震荡，500 g离心 2-3 min清洗细胞。吸去上清，剩余与细胞体积相同体积的 PBS，涡旋震荡重悬细胞。
加入表 1中相应体积的 Denaturing cell lysis buffer，涡旋震荡裂解细胞。（细胞数量和 Denaturing cell lysis buffer须保证对应关系，以达到最佳提取效率；部分未完全裂解的细胞不会影响样品质量）
将裂解的细胞转移到预冷的离心管柱套管中，14,000 g离心 30 s取出。
立刻将 Collection tubes with cap放置于冰上，弃去 Protein extraction filter cartridges，Collection tube with cap里的上清即是抽提的总蛋白，可应用于下游实验。

表 1 不同细胞体积应加入相应体积 Denaturing cell lysis buffer

细胞体积（μL）	Denaturing cell lysis buffer（μL）	细胞数量（×10⁶个）
3	20	0.3
5	50	0.5
10	100	1
20	200	2
40	500	3

B. 贴壁细胞

离心管柱套管准备：将 Protein extraction filter cartridge套在 Collection tube with cap上，放在冰上预冷。
将预冷的 PBS直接加入培养板，培养皿或培养瓶中清洗贴壁细胞，吸去上清。
按照表 2中将相应体积的 Denaturing cell lysis buffer均匀的加入整个器皿表面，用移液器吹打几次，将裂解的细胞转移到预冷的离心管柱套管中，14,000 g离心 30 s取出。（如提取浓度不佳，可减少 Denaturing cell lysis buffer使用量）
立刻将 Collection tube with cap放置于冰上，弃去 Protein extraction filter cartridge，Collection tube with cap里的上清即是抽提的总蛋白，可应用于下游实验。

表 2 不同贴壁细胞量应加入相应体积 Denaturing cell lysis buffer

器皿	Denaturing cell lysis buffer（μL）	细胞数量（×10⁶个）
24孔板	50	0.1-0.2
6孔板	200	0.6-0.8
25 cm²培养瓶	500	1.5-2

C. 动物组织

离心管柱套管准备：将 Protein extraction filter cartridge套在 Collection tube with cap上，放在冰上预冷。
将 15-20 mg 新鲜/冷冻组织放置于离心管柱上，用 Plastic rod扭转研磨 50-60次，加入 200 μL Denaturing cell lysis buffer，继续研磨 30-60次。（组织用量不要过量，无需过度研磨，Denaturing cell lysis buffer可分两次加入以得到最佳效果，如果起始量较大或较小，需按比例调整相应 Denaturing cell lysis buffer的用量）
盖上盖子室温孵育 1-2 min，14,000 g离心 1-2 min取出，Collection tube with cap里的上清即是抽提的总蛋白，可应用于下游实验。

II 天然总蛋白提取

A. 非贴壁细胞

离心管柱套管准备：将 Protein extraction filter cartridge套在 Collection tube with cap上，放在冰上预冷；
低速离心收集细胞，在 1.5 mL离心管中加入预冷的 PBS，涡旋震荡，500 g离心 2-3 min清洗细胞。吸去上清，剩余与细胞体积相同体积的 PBS，涡旋震荡重悬细胞。
加入表 3中相应体积的 Native cell lysis buffer，涡旋震荡裂解细胞。将离心管放置于冰上 3-5 min然后涡旋震荡 10 s。（细胞数量和 Native cell lysis buffer须保证对应关系，以达到最佳提取效率；部分未完全裂解的细胞不会影响样品质量）
将裂解的细胞转移到预冷的离心管柱套管中，4℃，14,000 g离心 30 s取出。
立刻将 Collection tube with cap放置于冰上，弃去 Protein extraction filter cartridge，Collection tube with cap里的上清即是抽提的总蛋白，可应用于下游实验。

表 3 不同细胞体积应加入相应体积 Native cell lysis buffer

细胞体积（μL）	Native cell lysis buffer（μL）	细胞数量（×10⁶个）
3	20	0.3
5	50	0.5
10	100	1
20	200	2
40	500	3

B. 贴壁细胞

离心管柱套管准备：将 Protein extraction filter cartridge套在 Collection tube with cap上，放在冰上预冷。
将预冷的 PBS直接加入培养板，培养皿或培养瓶中清洗贴壁细胞，吸去上清。
按照表 4中将相应体积的 Native cell lysis buffer均匀的加入整个器皿表面，放置于冰上孵育 5 min，用移液器吹打几次，将裂解的细胞转移到预冷的离心管柱套管中，4℃，14,000 g离心 30 s取出。（如提取浓度不佳，可减少 Native cell lysis buffer使用量）
立刻将 Collection tube with cap放置于冰上，弃去 Protein extraction filter cartridge，Collection tube with cap里的上清即是抽提的总蛋白，可应用于下游实验。

表 4 不同贴壁细胞量应加入相应体积 Native cell lysis buffer

器皿	Native cell lysis buffer（μL）	细胞数量（×10⁶个）
24孔板	50	0.1-0.2
6孔板	200	0.6-0.8
25 cm²培养瓶	500	1.5-2

C. 动物组织

离心管柱套管准备：将 Protein extraction filter cartridge套在 Collection tube with cap上，放在冰上预冷。
将 15-20 mg 新鲜/冷冻组织放置于离心管柱上，用 Plastic rod扭转研磨 50-60次，加入 200 μL Native cell lysis buffer，继续研磨 30-60次。（组织用量不要过量，无需过度研磨，Native cell lysis buffer可分两次加入以得到最佳效果，如果起始量较大或较小，需按比例调整相应 Native cell lysis buffer的用量）；
开盖冰上孵育 5 min，盖上盖子，4℃，14,000 g离心 1-2 min取出。Collection tube with cap里的上清即是抽提的总蛋白，可应用于下游实验。

注意事项

蛋白酶抑制剂不是必须加入，但是如果下游实验需要较长时间或者蛋白提取后保存较长时间，建议添加蛋白酶抑制剂。推荐使用 BCA 试剂盒用于蛋白浓度测定。研究蛋白磷酸化，磷酸酶抑制剂应在使用前加入裂解缓冲液。
WB上样前，仍需和 loading buffer混匀煮制样品。
Plastic rod可以重复使用，用蒸馏水彻底冲洗干净，用纸巾擦干。
若裂解物太粘稠，无法用 200-1,000 µL吸头吹打，可将细胞裂解物倒入离心管柱中或将吸头剪掉尖端。
若离心 30 s后离心管中还存留细胞 cell lysis buffer，可减少起始细胞/组织的数量或增加 cell lysis buffer的体积。
若蛋白浓度较低，可增加起始细胞/组织的数量或减少 cell lysis buffer的体积。
若高分子量范围（100-300 kDa）蛋白条带弱，可增加 cell lysis buffer的体积，确保细胞/组织裂解充分。

FAQ

1. 使用试剂盒提取总蛋白可以使用匀浆器处理组织吗？: A: 推荐使用提供的研磨棒直接在离心管柱中研磨样本，操作简单，省时省力。对于不易研磨的组织样本也可以使用匀浆器处理，注意操作过程中保持低温。
2. 试剂盒是否可以提取骨组织及脂肪组织总蛋白？: A: 可适用于软骨组织的提取，硬骨和牙齿等质地坚硬的组织及脂肪组织未做过验证，客户可自行进行尝试。
3. 提取离心后的收集管中为什么偶尔会有少量絮状物？: A: 因为动物组织或细胞样本经过裂解之后，有少量油脂物质透过滤芯进入收集管中，在低温条件下凝结成固态油脂，形成白色絮状物，建议吸取管内澄清液进行下游实验。