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活动截止时间：2024年1月31日
ExKine™ 总蛋白提取试剂盒 (ExKine™ Total Protein Extraction Kit, 货号 KTP3006) 是一套专为细胞器提取与染色实验设计的蛋白类核心产品，可在低温条件下高效完成细胞裂解与总蛋白释放，为下游细胞分析提供高完整度的蛋白样本。
细胞蛋白的提取需要有效的细胞裂解和蛋白质溶解，同时避免蛋白质降解和/或干扰蛋白质免疫反应性和生物活性。ExKine™ 总蛋白提取试剂盒通过预配制的蛋白提取试剂 (5×)与蛋白酶抑制剂 (100×)协同作用，在2-8 °C低温体系中迅速破坏细胞膜结构并抑制内源性蛋白酶活性，最大限度保持蛋白的原始构象与功能，适用于后续细胞器染色、免疫印迹、质谱分析等多种细胞分析需求。
应用领域
该试剂盒专为细胞器提取和染色实验场景开发，可广泛应用于细胞生物学研究中的线粒体、内质网、高尔基体等细胞器蛋白富集，以及免疫荧光、流式细胞术、Western blot 等细胞分析下游实验。
| 中文名称 | 总蛋白提取试剂盒-ExKine™ |
| 英文名称 | ExKine™ Total Protein Extraction Kit |
| 产品货号 | KTP3006 |
| 试剂盒组分 | • Protein Extraction Reagent (2×) • Protease Inhibitor (100×) |
| 注意事项 | 在2-8°C下执行所有步骤。 使用预冷的缓冲液和设备。 确保所有解决方案都是解冻和均匀的。 |
| 保存建议 | 建议收到货后保存于-20°C，有效期最少为12个月。 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
Working Protein Extraction Reagent (1×)：使用前，用去离子水稀释至 1×Protein Extraction Reagent，立即加入 10 µL protease inhibitors 1 mL 1×Protein Extraction Reagent - 到 中，置于冰上；20℃保存。
Protease Inhibitor (100 )×：即用型；使用前，置于冰上；–20℃保存。用不完的试剂 分装保存，避免反复冻融。
注意：如果持续使用1. Protein Extraction Reagent (2×)，建议将 Protein Extraction Reagent (2×) 在 4℃下保持 1-2 周。若进行长期存储，建议分装并存储在 –20℃；2. 如果需要，在使用前立即将磷酸酶抑制剂添加到缓冲液中。
| 规格 | 50 T | 200 T |
|---|---|---|
| Protein Extraction Reagent (2×) | 25 mL | 100 mL |
| Protease Inhibitor (100×) | 0.5 mL | 2 mL |
| 储存条件 | -20℃ | |
注意：所有的实验步骤需在 2-8℃进行。使用预冷的缓冲液和设备。确保所有的溶液是解冻和均匀的。
从细胞中移除生长培养基，并用 PBS 洗涤细胞 2 次。
在 10 cm 的培养皿中加入 1 mL 1× Working Protein Extraction Reagent。
注意：在 10 cm 的培养皿中生长的细胞通常包含 10^7 个细胞（50 mg）。
将平板在冰上孵育 5 min，间隔旋转以均匀铺展。
刮取裂解物并将其收集到离心管中。
注意：请用简单超声波处理裂解物以提高蛋白质产量。
离心 14,000 g 15 min，以沉淀细胞碎片，并将上清液转移至新管中用于进一步分析。
离心 700 g 10 min 来沉淀细胞。
弃去上清液，并用冰冷的 PBS 洗涤 2 次。
向 0.5-1×10^7 个细胞中加入 1 mL 1× Working Protein Extraction Reagent，上下吹打以混悬细胞。
在冰上轻摇混合物 15 min。简单用超声波处理裂解物以增加蛋白质产量。
离心 14,000 g 15 min，以沉淀细胞碎片，并将上清液转移至新管中用于进一步分析。
将 5-20 mg 的组织切成小块，置于离心管中。
用 PBS 清洗组织，离心 500 g 5 min，弃去 PBS。
在冰冷的 1×1 mL 1 Working Protein Extraction Reagent 中轻轻重悬组织。
使用匀浆器或组织研磨器匀浆组织，直至细胞完全裂解。
离心 14,000 g 15 min，以沉淀细胞碎片，并将上清液转移至新管中用于进一步分析。
A: 如果在样本量较少的时候，为了提高蛋白浓度可适当缩小体系；如果样本量增加时，建议增加提取体系，防止因提取液被稀释，造成提取不充分。
A: 小分子杂蛋白是在纯化过程中的靶蛋白降解产物，建议客户纯化过程低温下进行，同时样本采用新鲜样本，同时纯化过程尽量在4度进行，去除保护液和洗杂的流速可适当加快。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 本公司的纯化填料中含有微量内毒素，如果客户样品对内毒素有要求，建议用曲拉通将内毒素萃取出来，。
A: 如果低分子量条带在原液中不存在，说明是在纯化过程中，靶蛋白出现降解，建议在低温下进行。去除保护液和洗杂的流速可以快一些，但是上样和洗脱的速度尽量不加快。
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