膜蛋白与胞浆蛋白提取试剂盒-ExKine™

Name: 膜蛋白与胞浆蛋白提取试剂盒-ExKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTP3005
Price: 539 CNY
Availability: InStock

ExKine™ Membrane and Cytoplasmic Protein Extraction kit

产品货号

KTP3005

产品特点：

多用途：兼容新鲜哺乳动物细胞或组织，膜蛋白与胞浆蛋白分离彻底，交叉污染极低。

方便快捷：全程不到 2 小时即可完成非变性提取，获得具生物活性的蛋白。

兼容性好：所得蛋白可直接用于 Western Blot、质谱、蛋白互作及酶活力测定等下游实验。

选择规格

50 T

¥539

现货（当天发货）

200 T

¥1098

现货（次日发货）

🎉 限时优惠

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

ExKine™ 膜蛋白与胞浆蛋白提取试剂盒 (ExKine™ Membrane and Cytoplasmic Protein Extraction Kit) 是一套专为哺乳动物细胞或组织设计的双组分提取体系，可在非变性条件下将膜蛋白与胞浆蛋白快速、低交叉污染地分离开来，为后续 Western Blot、蛋白功能分析及酶活测定等实验提供高纯度、高活性的样本。

哺乳动物跨膜蛋白在信号转导、物质运输及细胞识别等生命活动中发挥关键作用，其异常表达常与肿瘤、代谢及神经退行性疾病密切相关。然而，膜蛋白的疏水特性使其在传统去污剂或表面活性剂增溶过程中极易丧失天然构象，进而影响功能研究及质谱鉴定。ExKine™ 试剂盒采用温和、非离子型缓冲体系，先以高渗 细胞浆蛋白提取缓冲液 (CEB) 选择性裂解细胞膜并释放胞浆组分，再以含有轻度增溶剂的 膜蛋白提取缓冲液 (MEB) 溶解膜组分；全程添加广谱 蛋白酶抑制剂，最大限度减少蛋白降解，保留膜蛋白活性与天然结构。

应用领域

本试剂盒适用于细胞器提取与染色研究，可广泛应用于：

膜蛋白功能及相互作用分析
信号通路关键蛋白定位研究
疾病相关膜蛋白表达谱鉴定
药物靶点筛选与验证

产品参数

中文名称	膜蛋白与胞浆蛋白提取试剂盒-ExKine™
英文名称	ExKine™ Membrane and Cytoplasmic Protein Extraction kit
产品货号	KTP3005
试剂盒组分	• 细胞浆蛋白提取缓冲液 (CEB) (5×) • 膜蛋白提取缓冲液 (MEB) • 蛋白酶抑制剂 (100×)
注意事项	所有实验步骤请在2-8°C下执行。使用预冷的缓冲液和设备，并确保所有溶液都是解冻和均匀的。
保存建议	请参考说明书中提及的各个试剂的保存条件。自发货之日起，根据推荐的保存温度，最少稳定1年。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

实验步骤

注意：所有的实验步骤需在 2-8℃ 进行。使用预冷的缓冲液和设备。确保所有的溶液是解冻和均匀的。

I 细胞培养物的制备

1. 对于贴壁细胞，用细胞刮刀收获 1-3×10⁷ 个细胞，然后 500 g 离心 5 min。对于悬浮细胞，500 g 离心 5 min。

2. 用预冷的 PBS 重悬细胞沉淀，500 g 离心 2-3 min，弃上清。

注意：使用移液器小心吸取上清，使细胞沉淀尽可能干燥。

3. 向细胞沉淀中加入 1 mL 预冷的 1×Working CEB 后，将试管在最高设置下剧烈涡旋 15 s，以完全悬浮细胞。

4. 在冰上使用匀浆器匀浆细胞 30-50 次，直到超过 90％的细胞破裂，细胞核在显微镜下可见。继续步骤 III。

II 组织制备

1. 将 50-100 mg 组织切成小块，放入离心管中。

2. 用预冷的 PBS 清洗组织，500 g 离心 5 min，弃上清。

注意：使用移液器小心吸取上清，使细胞组织尽可能干燥。

3. 用 1 mL 预冷的 1×Working CEB 重悬组织。

4. 使用匀浆器或组织研磨机匀浆组织，直至超过 90% 的细胞被破坏，细胞核在显微镜下可见，继续步骤 III。

III 胞浆蛋白和膜蛋白提取

1. 800 g 4℃离心 5 min。然后将上清液转移到干净的预冷的离心管中。沉淀含有细胞核和未破裂的细胞。

2. 16,000 g 4℃离心 45 min。

3. 将上清液转移到干净的预冷的离心管中（胞质提取物）。沉淀含有膜蛋白。冰上保存的胞质组分应立即使用或将样品等份分装存储在 -80℃保存。

可选步骤：为了从膜上去除残留的胞浆蛋白，请用其他冰冷的 Working CEB 或 PBS 冲洗沉淀。然后重复步骤 III 中的 2 和 3。

4. 将沉淀物悬浮在 200 µL 冰冷的 Working MEB 中，置于冰上，每 10 min 涡旋 15 s，持续 30 min。避免泡沫形成。

5. 16,000 g 4℃离心 5 min。

6. 分装上清液（膜提取物）到预冷的离心管，取出一小份用于蛋白定量检测。将其它装有膜提取物的离心管保存在 -80℃。避免反复冻融。

注意事项

问题	可能原因	解决方法
膜部分的蛋白浓度低	细胞未裂解	添加 CEB 或匀浆后增加孵育时间
膜蛋白分离不完全	不正确的体积或者添加用于提取的缓冲液时出错	仔细地制作缓冲液
蛋白质未分隔	细胞质提取物去除不完全	膜裂解前仔细除去所有细胞质提取物用另外的 Working CEB 或 PBS 冲洗膜沉淀
总蛋白产量低	细胞组织不足	增加细胞数量或起始组织数量（50-100 mg）