线粒体分离提取试剂盒(细胞样品)-ExKine™

Name: 线粒体分离提取试剂盒(细胞样品)-ExKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTP4003
Price: 298 CNY
Availability: InStock

ExKine™ Mitochondrion Extraction Kit (Cultured Cells)

产品货号

KTP4003

产品特点：

全流程<60 min，从2×10⁷个细胞即可收获完整线粒体，节省宝贵实验时间。

提供“试剂法”与“Dounce匀浆法”双模式，既可高通量处理多样本，也能追求极限产率。

所得线粒体兼容Western blot、呼吸链复合体活性测定、氧耗率(OCR)检测、蛋白质组学等几乎所有下游应用。

选择规格

50 T

¥298

现货（当天发货）

200 T

¥758

现货（当天发货）

🎉 限时优惠

买2送1活动进行中！购买任意2个规格产品，免费赠送100μL装一支。

活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

ExKine™ 线粒体分离提取试剂盒（细胞样品） (ExKine™ Mitochondrion Extraction Kit for Cultured Cells) 是一套专为贴壁或悬浮培养细胞设计的快速分离工具，可在温和条件下完整释放并富集线粒体，为后续功能研究、蛋白组学或代谢分析提供高纯度样本。

线粒体是真核细胞中双层膜包被的细胞器，被誉为细胞的“能量工厂”，通过氧化磷酸化产生ATP，并深度参与信号转导、细胞凋亡、分化及周期调控。其功能异常与线粒体疾病、心肌病变、心力衰竭及孤独症谱系障碍等多种病理过程密切相关。本试剂盒采用梯度裂解-差速离心策略：先用裂解缓冲液A、B、C依次破坏细胞膜并保留线粒体膜完整性，随后通过密度差异将线粒体与其他细胞组分分离，最后用保存缓冲液重悬，即可获得结构完整、活性良好的线粒体。

应用领域

适用于基础研究中的线粒体功能解析、疾病机制探索、药物毒性评价及能量代谢相关信号通路研究，尤其适合培养细胞模型的线粒体提取与染色前处理。

产品参数

中文名称	线粒体分离提取试剂盒(细胞样品)-ExKine™
英文名称	ExKine™ Mitochondrion Extraction Kit (Cultured Cells)
产品货号	KTP4003
试剂盒组分	• 裂解缓冲液 A (5×) • 裂解缓冲液 B • 裂解缓冲液 C • 保存缓冲液
注意事项	所有实验步骤请在2-8°C下执行。使用预冷的缓冲液和设备，并确保所有溶液都是解冻和均匀的。
保存建议	请参阅说明书中各个组分的存储条件。自发货之日起，在推荐温度下至少稳定12个月。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

Lysis Buffer C：即用型；使用前，置于冰上；4℃保存。

Storage Buffer: 即用型；分装并在-20℃下存储，以避免反复冷冻和解冻。使用前，置于冰上。

实验步骤

注意：所有的实验步骤需在 2-8℃进行。使用预冷的缓冲液和设备。确保所有的溶液是解冻和均匀的。

I 细胞培养物的制备

1. 对于贴壁细胞，用细胞刮刀收获 2×10⁷个细胞，500 g离心 5 min。对于悬浮细胞，通过 500 g离心 5 min进行收集。直径为 100 mm的培养皿内含有的典型新鲜融合贴壁细胞约为 0.5-3×10⁷个。

2. 通过用冰冷的 PBS悬浮细胞沉淀来洗涤细胞。500 g离心 2-3 min，弃去 PBS。

注意：使用移液器小心地移除 PBS，使细胞沉淀尽可能干燥。

3. 将 0.75 mL冰冷的 Lysis Buffer A(1×)添加到细胞沉淀中。以最大速度的一半速度将细胞涡旋 10 s。

4. 冰上孵育 2 min，继续步骤 II 或 III。

注意：孵育不要超过 2 min。

II 基于试剂的方法分离线粒体

1. 向细胞裂解液中加入 10 µL Lysis Buffer B。以最大速度涡旋 5 s。

2. 将试管在冰上孵育 5 min，每分钟以最大速度涡旋。

3. 加入 250 µL Lysis Buffer C，将试管倒置几次以进行混合。（注意：请勿涡旋）

4. 在 4℃下，600 g离心 10 min。

5. 将上清液收集在新管中，并在 4℃下，11,000 g离心 10 min。

注意：要获得更加纯化的线粒体，并减少 50%以上的溶酶体和过氧化物酶污染，可将该步骤更改为 3,000 g离心 15 min。上清液是细胞质部分。

6. 小心移除上清液，然后将沉淀物悬浮在 200 µL Storage Buffer，并在-80℃下冷冻直至使用，或使用适合研究应用的缓冲液。

III 使用匀浆器分离线粒体

1. 将细胞悬浮液转移至匀浆器中。在冰上匀浆细胞。进行足够的研磨以有效裂解细胞。每种细胞类型都需要优化的研磨次数。

注意：最佳细胞裂解所需的冲程数将根据细胞系不同而有所不同，通常为 10-30次。

2. 将细胞悬液转移至原始试管中，并加入 250 µL Lysis Buffer C。将试管倒置几次以进行混合。（注意：请勿涡旋）

3. 在 4℃下，600 g离心 10 min。

4. 将上清液收集在新管中，并在 4℃下，11,000 g离心 10 min。

注意：要获得更加纯化的线粒体，并减少 50％以上的溶酶体和过氧化物酶体污染物，可将该步骤更改为 3,000 g离心 15 min。上清液是细胞质部分。

5. 小心移除上清液，然后将沉淀物悬浮在 200 µL Storage Buffer，并在-80℃下冷冻直至使用，或使用适合研究应用的缓冲液。

免责声明

本产品仅供科学研究使用，不适用于临床诊断。

常见问题

Q: 提取之后可以直接做WB吗

A: 提取的是完整的线粒体，需使用线粒体裂解液提取线粒体蛋白用于后续WB

Q: 纯化试剂盒纯化之后出现低分子量杂带在Input样本中不存在，可能是什么原因？应如何避免？

A: 小分子杂蛋白是在纯化过程中的靶蛋白降解产物，建议客户纯化过程低温下进行，同时样本采用新鲜样本，同时纯化过程尽量在4度进行，去除保护液和洗杂的流速可适当加快。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

Q: 预装柱填料中是否含内毒素？

A: 本公司的纯化填料中含有微量内毒素，如果客户样品对内毒素有要求，建议用曲拉通将内毒素萃取出来，。

Q: 纯化之后的样本中如果存在少量低分子量杂带，是什么原因？应如何解决？

A: 如果低分子量条带在原液中不存在，说明是在纯化过程中，靶蛋白出现降解，建议在低温下进行。去除保护液和洗杂的流速可以快一些，但是上样和洗脱的速度尽量不加快。

文献引用

HMOX1-LDHB interaction promotes ferroptosis by inducing mitochondrial dysfunction in foamy macrophages during advanced atherosclerosis.

杂志名称: Developmental Cell | 作者: Peng, Xiang, et al.

IF: 11 | 发表时间: 2024

Aldehyde dehydrogenase 2 serves as a key cardiometabolic adaptation regulator in response to plateau hypoxia in mice.

杂志名称: Translational Research | 作者: Gao, Rifeng, et al.

IF: 6 | 发表时间: 2024

MST1, a novel therapeutic target for Alzheimer's disease, regulates mitochondrial homeostasis by mediating mitochondrial DNA transcription and the PI3K-Akt-ROS pathway.

杂志名称: Journal of Translational Medicine | 作者: Cui, Dongqing, et al.

IF: 6 | 发表时间: 2024

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Catalog No.	Product Name
KTP4002	ExKineTM 细胞核分离提取试剂盒（高纯度）
KTP4001	ExKineTM 细胞核分离提取试剂盒
KTP4004	ExKineTM 线粒体分离提取试剂盒（组织样品）

线粒体分离提取试剂盒(细胞样品)-ExKine™

ExKine™ Mitochondrion Extraction Kit (Cultured Cells)

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使用说明

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常见问题

Q: 提取之后可以直接做WB吗

Q: 纯化试剂盒纯化之后出现低分子量杂带在Input样本中不存在，可能是什么原因？应如何避免？

Q: 预装柱填料中是否含内毒素？

Q: 纯化之后的样本中如果存在少量低分子量杂带，是什么原因？应如何解决？

文献引用

HMOX1-LDHB interaction promotes ferroptosis by inducing mitochondrial dysfunction in foamy macrophages during advanced atherosclerosis.

Aldehyde dehydrogenase 2 serves as a key cardiometabolic adaptation regulator in response to plateau hypoxia in mice.

MST1, a novel therapeutic target for Alzheimer's disease, regulates mitochondrial homeostasis by mediating mitochondrial DNA transcription and the PI3K-Akt-ROS pathway.

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Q: 提取之后可以直接做WB吗

Q: 纯化试剂盒纯化之后出现低分子量杂带在Input样本中不存在，可能是什么原因？应如何避免？

Q: 预装柱填料中是否含内毒素？

Q: 纯化之后的样本中如果存在少量低分子量杂带，是什么原因？应如何解决？

文献引用

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