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活动截止时间：2024年1月31日
LinKine™ AP偶联试剂盒（LinKine™ AP Labeling Kit，货号 KTL0110）是一套专为将碱性磷酸酶（AP）高效偶联至抗体或其它蛋白质游离氨基而设计的即用型试剂组合，适用于需要高灵敏度酶标记的免疫检测体系。
碱性磷酸酶（ALP/AKP）是一组能水解磷酸单酯、释放磷酸根并生成自由羟基的同功酶。当 AP 与目标蛋白通过戊二醛交联后，形成的偶联物在加入相应底物时可产生颜色、荧光或化学发光信号，从而实现对靶分子的可视化检测与定量。该试剂盒利用戊二醛作为交联剂，将 AP 定向连接到抗体或其它含游离氨基的生物分子上，为 ELISA、Western blot、免疫组化等实验提供高信噪比的酶标记探针。
本试剂盒适用于蛋白偶联方向，广泛用于制备 AP-抗体、AP-蛋白复合物，服务于 ELISA、Western blot、免疫组化、流式细胞术等免疫检测平台，尤其适合需要高灵敏度酶放大信号的科研场景。
| 中文名称 | AP偶联试剂盒-LinKine™ |
| 英文名称 | LinKine™ AP Labeling Kit |
| 产品货号 | KTL0110 |
| 偶联物 | AP |
| 试剂盒组分 | • AP solution • AP labeling solution • cross-linking agent • AP quencher powder |
| 注意事项 | • 请注意，缓冲液中不允许含有氨基的组分，这会影响偶联效果。 • 如需稀释偶联物，避免使用含磷酸根丰富的PBS等缓冲液，可以使用TBS等不含磷酸根的缓冲液。 • 若需长期储存，请分装并于-20°C下避光保存，避免反复冻融，可加入同体积甘油。 |
| 保存建议 | 该试剂盒在4℃条件下可保存6个月。 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
待标记样本的缓冲液应满足如下要求：
| 条件 | 要求 |
|---|---|
| pH | 6.5-8.0 |
| 无胺缓冲液 | MES, TBS, HEPES ✓ |
| 螯合剂 (e.g. EDTA) | ✓ |
| 甘油（Glycerol） | < 50% |
| 牛血清白蛋白（BSA） | < 0.1% |
| 甘氨酸（Glycine） | ✗ |
| 明胶（Gelatin） | < 0.1% |
| 普罗克林（Proclin） | ✗ |
| 磷酸盐缓冲液 | ✗ |
| 含氨基成分 | ✗ |
待标记样本与AP最佳摩尔比为1:1至1:2。我们建议以约1:1的比例进行偶联实验。您可以通过预实验确定最佳摩尔比。以标记抗体为例，从1:1到1:2推荐用量如下。
| 规格 | AP量 | 抗体量 | 抗体(AP:Ab) | 最佳标记体系 |
|---|---|---|---|---|
| 3×100 µg/Kit | 300 µg | 300 µg | 1:1 | 150 µL |
| 300 µg | 150 µg | 1:2 | ||
| 1 mg/Kit | 1 mg | 1 mg | 1:1 | 0.5 mL |
| 1 mg | 0.5 mg | 1:2 |
考虑到AP分子量（160,000:160,000），对于1 mg AP，需要添加0.5-1 mg抗体。
标记样本用AP labeling solution置换缓冲液。建议用超滤的方法，添加AP labeling solution 500 µL至样本，4℃，12,000 g离心10 min，再次添加AP labeling solution 500 µL，4℃，12,000 g离心50 µL到样本体积不超过50 µL。超滤完成以后将超滤管的内管取出倒置放入一支新的超滤管中，4℃，4,000 g离心2 min收集待标记样本。
以3×100 µg/Kit 1:1试剂盒为例，待标记样本与AP推荐摩尔比为1:1。其它规格，试剂用量依据说明书进行等比调整。如果需要调整摩尔比，请保持AP量不变，更改待标记样本用量和AP labeling solution用量。
(1)
向待标记样本中加入30 µL AP solution，用移液器温和混匀。
(2)
加入150 µL cross-linking agent至步骤(1)反应液中，加至500 µL A Labeling Solution P，温和混匀，垂直混匀仪上室温避光反应2 h。
(3)
向A Labeling Solution P中加入1 mL AP quencher powder制作AP quencher solution。可置于室温保存，但须当天使用。
注意：为了防止气体在管内聚集，瞬间膨胀，导致安全隐患，请开盖配制AP quencher solution；不同规格的试剂盒，配制AP quencher solution的用量保持不变（1 mL）。
(4)
向步骤(2)反应液中加入60 µL AP quencher solution，温和混匀，4℃避光放置1 h。
(5)
用超滤的方式除去小分子杂质，添加AP labeling solution 500 µL至样本，4℃，12,000 g离心10 min，再次添加AP labeling solution 500 µL，4℃，12,000 g离心10 min，可适当延长时间使体积缩小，偶联物浓度高。超滤完成以后将超滤管的内管倒置放入一支新的超滤管中，4℃，4,000 g离心2 min收集偶联物。
(6)
除去小分子杂质以后的偶联物可直接用于下游实验。
偶联物4℃避光条件下可稳定保存一个月。若需长期储存，请分装并于-20℃下避光保存，避免反复冻融，可加入同体积甘油。如需稀释偶联物，避免使用含磷酸根丰富的PBS等缓冲液，可以使用TBS等不含磷酸根的缓冲液。
问1：由于样本浓度低，反应体积超过了最佳标记体系？
答：如果浓缩后样本浓度仍小于1-2 mg/mL，可适当调整反应体积，但最终浓度应大于1 mg/mL。AP solution和AP quencher solution的比例需保持不变。
问2：待标记样本与AP摩尔比只能在1:1和1:2之间吗？
答：不同样本，最佳摩尔比不同。对于抗体，建议不要超过1:2。其它样本，可以尝试不同比例。
A: 是通用型的。
A: 推荐1mg的规格，选用超滤管3K的超滤管的型号。
A: 如按照说明书的操作进行实验，可保证超过90%的偶联效率。
A: 做吸光度检测和免疫实验检测。
A: 如果是普通蛋白分子的话，查询蛋白的氨基酸一级结构就可以知道是否有游离氨基。
请等待最新文献信息更新。
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