Annexin V-AbFluor™ 488/PI双染细胞凋亡检测试剂盒

Name: Annexin V-AbFluor™ 488/PI双染细胞凋亡检测试剂盒
Brand: Abbkine
SKU: KTA0002
Price: 598 CNY
Availability: InStock

Annexin V-AbFluor™ 488/PI Apoptosis Detection kit

产品货号

KTA0002

产品特点：

AbFluor™ 488荧光基团较FITC亮度更高、光稳定性更强，且不受pH波动影响，信号更可靠。

双波长检测：Annexin V-AbFluor™ 488（绿色）与PI（红色）光谱分离良好，避免串色干扰。

兼容流式细胞术与荧光显微镜两种平台，满足不同实验通量需求。

试剂盒内置Apoptosis Inducer A/B阳性对照，帮助快速建立凋亡模型并验证实验体系。

–20 °C避光保存12个月，冰袋运输，确保组分活性。

选择规格

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

亚科因生物研发的Annexin V-AbFluor™ 488/PI双染细胞凋亡检测试剂盒 (Annexin V-AbFluor™ 488/PI Apoptosis Detection kit) 是一种基于Annexin V与磷脂酰丝氨酸（PS）高亲和力结合、辅以PI核酸染色的双荧光标记体系，可通过流式细胞术或荧光显微镜快速区分早期凋亡、晚期凋亡及坏死细胞的检测工具。

细胞凋亡（apoptosis）是基因调控下的程序性细胞死亡，对维持多细胞生物内环境稳态至关重要。在正常活细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）位于细胞膜内侧；当细胞进入凋亡早期，PS会外翻至细胞膜外侧。Annexin V是一种35–36 kDa的钙依赖性磷脂结合蛋白，可特异性识别并高亲和力结合外翻的PS。AbFluor™ 488标记的Annexin V（Ex/Em = 491/517 nm）替代传统FITC，具有更强的荧光强度、光稳定性及pH不敏感优势。碘化丙啶（PI）为核酸染料，不能穿透完整细胞膜，仅对膜完整性受损的晚期凋亡或坏死细胞核染色（Ex/Em = 535/617 nm）。通过Annexin V-AbFluor™ 488与PI联合使用，可精准区分：

Annexin V^–/PI^–：活细胞
Annexin V⁺/PI^–：早期凋亡细胞
Annexin V⁺/PI⁺：晚期凋亡或坏死细胞

应用领域

本试剂盒专为细胞状态分析设计，广泛应用于：

药物筛选与毒理学研究：评估候选药物诱导或抑制凋亡的效能。
肿瘤学研究：分析化疗、放疗或靶向治疗对肿瘤细胞的凋亡影响。
免疫学实验：监测免疫细胞活化或耗竭过程中的凋亡水平。
干细胞与再生医学：鉴定培养体系中异常凋亡细胞，优化培养条件。

产品参数

中文名称	Annexin V-AbFluor™ 488/PI双染细胞凋亡检测试剂盒
英文名称	Annexin V-AbFluor™ 488/PI Apoptosis Detection kit
产品货号	KTA0002
试剂盒组分	• Annexin V Binding Buffer (5×) • Annexin V-AbFluor™ 488 • Propidium Iodide (PI) • Apoptosis Inducer A •Apoptosis Inducer B
保存建议	于-20℃，避光保存 12 个月
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

离心机、荧光显微镜或流式细胞仪
可调节式移液枪及枪头、去离子水、载玻片
细胞培养孔板

试剂准备

注意：各组分开盖前，请先低速离心。

1×Annexin V Binding Buffer：临用前配置，用去离子水把 Annexin V Binding Buffer (5×)稀释成 1×Annexin V Binding Buffer；未用完的试剂 4℃可保存 6个月。
Annexin V-AbFluor™ 488：即用型；使用前，平衡到室温；未用完的试剂分装后-20℃避光保存，避免反复冻融。
Propidium Iodide (PI)：即用型；使用前，平衡到室温；未用完的试剂分装后-20℃避光保存，避免反复冻融。
Apoptosis Inducer A：即用型；使用前，平衡到室温；-20℃保存。
Apoptosis Inducer B：即用型；使用前，平衡到室温；-20℃保存。

实验步骤

一、细胞凋亡阳性诱导

1. 对于待诱导凋亡的培养细胞，分别按照与细胞培养液的体积比 1:1,000-1:3,000 的比例把 Apoptosis Inducer A 或 Apoptosis Inducer B加入到培养液中（也可将 Apoptosis Inducer A和 Apoptosis Inducer B同时加入培养液中）。

2. 在 4、8、12、16或 24 h后观察细胞凋亡的情况。通常 16-24 h后，在光学显微镜下可以看到明显的细胞形态的变化，此时可以用于细胞凋亡染色观察（不同细胞可按实际情况调整诱导浓度及诱导时间）。

二、Annexin V-AbFluor™ 488/PI细胞凋亡检测

A. 流式细胞仪分析

1. 通过所需方法诱导细胞凋亡，同时培养无诱导的对照培养物。

2. 4℃，300 g离心 5 min收集 1-2×10⁵细胞，用冰预冷的 PBS洗涤 2次。

注意：贴壁细胞使用胰酶（不含 EDTA）消化后离心收集细胞，消化时间如果过长，易造成细胞膜结构损伤而出现细胞坏死的假阳性，所以需控制胰酶消化时间。

3. 用 500 µL 1×Annexin V Binding Buffer重悬细胞。

4. 每 500 µL细胞悬液中加入 5 µL Annexin V-AbFluor™ 488和 2 µL PI，轻柔混匀。

5. 室温避光孵育 15 min。

6. 孵育结束后后置于冰上。染色后 30 min内通过流式细胞仪分析细胞。使用 491 nm和 535 nm激发，517 nm（FITC 通道）和 617 nm（PE或 PI通道）附近测量荧光。

B. 荧光显微镜分析

对于悬浮细胞：

1) 按照步骤 A.1到步骤 A.6的流式细胞分析步骤。

2) 将步骤 A.6的细胞悬浮置于玻片上，用盖玻片盖住细胞。尽快使用适当的滤镜通过荧光显微镜分析细胞（Annexin V- AbFluor™ 488可以使用 FITC设置拍照，PI可以使用 Cy®3或 Texas Red®设置拍照）。

对于贴壁细胞，按照以下操作步骤：

1) 细胞接种于爬片或腔室载玻片上，培养细胞。

2) 通过所需方法诱导细胞凋亡，同时培养无诱导的对照培养物。

3) 除去培养基，用预热或者室温的 PBS洗涤细胞 2次。

4) 准备工作液：每 100 µL 1×Annexin V Binding Buffer添加 5 µL Annexin V- AbFluor™ 488和 2 µL PI，轻柔混匀。

5) 在细胞中加入适量的工作液（确保工作液完全覆盖细胞），室温避光孵育 15 min（可以在冰上孵育，以减缓凋亡过程，但孵育时间需延长到至少 30 min）。

6) 用 1×Annexin V Binding Buffer洗涤细胞 2次。

注意：此步不要使用 PBS洗涤细胞。

7) 载玻片上添加一滴 1×Annexin V Binding Buffer，然后将细胞爬片置于玻片上。对于细胞腔室载玻片上的细胞，添加足够的 1×Annexin V Binding Buffer覆盖细胞。

注意：也可使用抗荧光淬灭封片剂封片。

8) 使用适当的滤光片在荧光显微镜下分析细胞。

常见问题

Q: 该试剂盒是标记细胞凋亡哪个时期的试剂盒？

A: 标记细胞凋亡早期。

Q: 细胞样本较少时，为了防止细胞损失，不用PBS洗涤，可以吗？

A: 建议至少洗涤2-3次，因为培养基里面的杂质很多，会粘在细胞膜上。洗涤之后充分离心再去除上清液，小心操作，不会有细胞损失的，细胞个数在一个数量级之内都没什么影响。

Q: 该试剂盒做流式细胞术是否要用细胞上清?

A: 染好之后用细胞混悬液上机即可，不需要用细胞上清。

Q: 在加入100ul Annexin V结合缓冲液后，可不可以等到60分钟左右再去做下一步呢?

A: 因为这个实验是活染，细胞先染完第一种染料，如果间隔时间太长，细胞活力就会受影响。

Q: Annexin V-FITC细胞凋亡试剂盒是否可以单染？

A: 可以，只要不使用PI染料就可以了。

Q: 该试剂盒可以用来检测细胞周期吗？

A: 可以取出其中的PI组分对酒精固定后的细胞进行染色，并用流式细胞仪进行检测和定量。

文献引用

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杂志名称: Autophagy | 作者: Tian, Zhangyu, et al.

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杂志名称: Advanced Science | 作者: Guo, Weina, et al.

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Oral administration of Sophora Flavescens-derived exosomes-like nanovesicles carrying CX5461 ameliorates DSS-induced colitis in mice.

杂志名称: Journal of Nanobiotechnology | 作者: Zhang, Manqi, et al.

IF: 11 | 发表时间: 2024

Dextran‐Based Antibacterial Hydrogel Dressings for Accelerating Infected Wound Healing by Reducing Inflammation Levels.

杂志名称: Advanced Healthcare Materials | 作者: Liang, Jianhao, et al.

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The microglial state transition as a novel mechanism by which fresh Baihe Dihuang decoction prevents depression by regulating SIRT1/HMGB1 signaling.

杂志名称: Phytomedicine | 作者: Cao, Li-Hua, et al.

IF: 8.300 | 发表时间: 2025

Inhibition of HTR2B-mediated serotonin signaling in colorectal cancer suppresses tumor growth through ERK signaling.

杂志名称: Biomedicine & Pharmacotherapy | 作者: Lee, Jeong-Yun, et al.

IF: 7 | 发表时间: 2024

PA1b-like peptides alleviate mitochondrial dysfunction induced by glucose toxicity through interaction with VDAC1 in β-cells.

杂志名称: Food & Function | 作者: Huang, Huizhong, et al.

IF: 5.3999 | 发表时间: 2025

Camellia Tea Saponin Ameliorates 5–Fluorouracil-Induced Damage of HaCaT Cells by Regulating Ferroptosis and Inflammation.

杂志名称: Nutrients | 作者: Likitsatian, Tanrada, et al.

IF: 5.000 | 发表时间: 2025

Folate-Mediated Targeting and Controlled Release: PLGA-Encapsulated Mesoporous Silica Nanoparticles Delivering Capecitabine to Pancreatic Tumor.

杂志名称: ACS Applied Bio Materials | 作者: Tripathi, Abhay Dev, et al.

IF: 5 | 发表时间: 2024

Synergistic and mechanistic effects of neogambogic acid in enhancing almonertinib sensitivity in non-small cell lung cancer.

杂志名称: International Immunopharmacology | 作者: Yang, Qiqi, et al.

IF: 4.7003 | 发表时间: 2025

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