一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光)

Name: 一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光)
Brand: Abbkine
SKU: KTA2010
Price: 1898 CNY
Availability: InStock

One-step TUNEL Apoptosis Assay Kit (Green Fluorescence)

产品货号

KTA2010

产品特点：

内置阳性对照品，帮助建立标准化凋亡模型，减少实验偏差。

独家优化的“一步法”实验方案，兼容荧光显微镜、荧光酶标仪、流式细胞仪三大平台，无需额外转管。

采用FITC通道（Ex/Em = 490 nm / 520 nm），与常规绿色荧光设备完美匹配，检测灵敏且背景低。

选择规格

50 T

¥1898

现货（当天发货）

100 T

¥3198

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🎉 限时优惠

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

亚科因生物推出的一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒（绿色荧光）（One-step TUNEL Apoptosis Assay Kit, Green Fluorescence）是一款专为细胞凋亡/周期分析设计的即用型荧光检测工具。该试剂盒利用脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）在凋亡细胞DNA断裂处标记绿色荧光探针，可在荧光显微镜、荧光酶标仪或流式细胞仪上直接观察并定量凋亡细胞，实现“一步加样、多重检测”的便捷体验。

背景原理

在细胞凋亡/周期过程中，染色体DNA发生双链或单链断裂，暴露出大量3'-OH粘性末端。TdT酶可催化荧光标记的脱氧核糖核苷酸掺入这些末端，形成绿色荧光信号。正常或增殖期细胞因DNA完整，几乎无标记，从而实现凋亡细胞的特异性识别。该方法（TUNEL）已成为检测DNA片段化、评估细胞凋亡的金标准。

应用领域

适用于细胞状态评估、药物筛选、肿瘤研究、神经退行性疾病模型及任何需要定量检测细胞凋亡/周期的细胞类实验。

产品参数

中文名称	一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光)
英文名称	One-step TUNEL Apoptosis Assay Kit (Green Fluorescence)
产品货号	KTA2010
试剂盒组分	• TdT Enzyme • Equilibration Buffer (5×) •Label Mix Green •Probe Diulen •DAPI (500×) •BSA Working Solution •TritonX-100 (100%) •DNase I (5 U/µL) •10×DNase I Buffer •Proteinase K (20mg/mL)
注意事项	反应缓冲液含有二甲胂酸盐和氯化钴，剧毒化学品。皮肤接触后，立即用大量清水冲洗。如果发生意外或感觉不适，请立即就医。使用时请勿饮食或吸烟。
保存建议	建议收到货后保存于-20°C，有效期最少为6个月。一旦开封，请参考说明书中各个组分的最佳保存条件进行储存。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

离心机，荧光显微镜
96孔细胞板，可调节式移液枪及枪头，10mM Tris pH7.5，磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4）
4%多聚甲醛，去离子水，组织自发荧光淬灭剂

试剂准备

Working Label Mix Green：根据实际用量，用 Probe Diluent将 Label Mix Green稀释 15倍得到Working Label Mix Green，未用完的Working Label Mix Green于-20℃避光分装保存 3个月，避免反复冻融。

DAPI (1×)：根据实际用量，用 PBS将 DAPI (500×)稀释成 DAPI (1×)。

TritonX-100 (0.3%)：根据实际用量，用 PBS将 100% TritonX-100稀释成 0.3% TritonX-100。

1×Equilibration Buffer：流式细胞仪分析需制备 1×Equilibration Buffer，根据实际用量，用去离子水将 5×Equilibration Buffer稀释成 1×Equilibration Buffer。

1×DNase I Buffer：根据实际用量，用去离子水将 10×DNase I Buffer稀释成 1×DNase I Buffer。

实验步骤

A. 样本制备

1. 对于贴壁细胞（通过荧光显微镜分析）

在 96孔板进行细胞培养，至少 24 h。通过所需方法诱导细胞凋亡，同时培养无诱导的对照组细胞。
除去培养基，在室温下用 50 µL 4%多聚甲醛固定细胞 30 min。
除去固定液并用 200 µL PBS浸洗 3次，每次 5 min。
固定后，每孔添加 50 µL 0.3%Triton X-100，并在室温下孵育 30 min。
除去通透剂，用 50 µL BSA Working Solution洗涤细胞 2-3次。进行荧光显微镜分析（继续进行步骤 B.1）。

注意：对于细胞爬片及其他孔板细胞，可依据实际情况调整固定液和通透剂体积。

2. 对于非贴壁细胞（通过流式细胞仪分析）

培养细胞至最佳密度（约 1-2×10⁶细胞/mL），通过所需方法诱导细胞凋亡，同时培养无诱导的对照培养物。
以 300 g离心并收集细胞（1-5×10⁶），用 PBS洗涤 2次。
加入 1 mL 4%多聚甲醛，在室温下孵育 30 min。
以 300 g离心细胞，除去上清液，重悬于 1 mL PBS中，重复洗涤 2次。
以 300 g离心细胞，除去上清液，在室温下，用 500 µL 0.3% Triton-X 100重悬细胞 5 min使其通透（或者将细胞在 100 µg/mL蛋白酶 K的 PBS中重悬 5 min使其通透）。
以 300 g离心细胞，除去上清液，重悬于 1 mL PBS中。重复洗涤 2次，然后进行流式细胞仪分析（继续进行步骤 B.2）。

3. 对于石蜡包埋的组织切片（通过荧光显微镜分析）

将组织在二甲苯浸泡 2次，每次 10-20 min进行脱蜡。
通过以下步骤（按给定顺序）为组织复性：在 100%乙醇中 2次洗涤 5 min，然后依次在 95%，70%和 50%乙醇中洗涤 3 min。
用适量的 PBS浸洗样品 2次，每次 5 min。
排出组织中多余的 PBS，并在 20 µg/mL蛋白酶 K（在 10mM Tris pH7.5中，现配现用）溶液中室温孵育 15 min。

注意：必须针对特定组织类型和厚度优化蛋白酶消化时间。蛋白酶过度消化将导致细胞结构丧失，组织切片可能会从玻片上脱落。消化不充分会导致 TdT标记不彻底。

用适量的 PBS浸洗样品 3次，每次 5 min来终止蛋白酶消化作用，进行荧光显微镜分析（继续进行步骤 B.1）。

4. 对于冰冻组织切片（通过荧光显微镜分析）

将切片在玻片上干燥后，在室温下用 200 µL 4%多聚甲醛固定 30 min。
用适量的 PBS浸洗 2次，每次 5 min。
去除组织中多余的 PBS，并在 20 µg/mL蛋白酶 K（在 10mM Tris pH7.5中，现配现用）溶液中室温孵育 15 min。
用适量的 PBS浸洗样品 3次，每次 5 min来终止蛋白酶消化作用，进行荧光显微镜分析（继续进行步骤 B.1）。

注意：1. 组织切片会产生自发荧光，可使用组织自发荧光淬灭剂进行处理。2. 阳性对照的设置（可选），A步骤完成后，在室温条件下可用 10 U/mL的 DNase I（用 1×DNase I Buffer将 5 U/µL的 DNase I稀释成 10 U/mL）消化细胞或组织 10-20 min后，样本用 PBS洗涤 3次，每次 5min，然后再进行荧光显微镜分析，如果是组织切片样本，建议阳性对照后续操作在单独的染色缸中染色和洗涤。

B. TUNEL分析

1. 荧光显微镜分析

根据要分析的样品数量，在使用前准备 TdT 标记反应缓冲液：

反应组分	每孔体积（µL）
TdT Enzyme	2
Equilibration Buffer (5×)	10
Working Label Mix Green	5
去离子水	33
总体积	50

注意：配制 TdT标记反应缓冲液之前，将各组分平衡至室温，Equilibration Buffer (5×)母液因低温保存，会出现少量成分析出的现象，请颠倒混匀后使用。Equilibration Buffer (5×)中含有高毒性化学物质二甲胂酸钠和氯化钴，皮肤接触后，立即用大量水冲洗。万一发生事故或感到不适，请立即就医。使用时请勿饮酒，饮食或吸烟。

向每个样品中加入 50 µL（96孔板推荐 50 µL，24孔板推荐 200 µL，切片建议添加 100-200 µL盖住组织即可）反应混合物，并在湿盒中 37℃下避光孵育 2 h (不同的样本，可视情况调整孵育时间)。
用 PBS 将样品浸洗 3次，每次 5 min。
用 1×DAPI孵育 10 min对样品进行复染。

注意：如需计算凋亡细胞比例，建议复染，根据染色组织的不同，复染浓度可能需要调整。DAPI过度染色可能导致难以观察荧光素标记。

用适量的 PBS 浸洗样品 3次，每次 5 min。
对于细胞爬片、石蜡切片和冰冻切片等样本，可加入水性封固剂或抗荧光淬灭剂，封住盖玻片，用荧光显微镜进行观察。对于孔板、培养皿内细胞样本，加入适量 PBS浸没细胞，再进行荧光显微镜拍照观察。FITC 通道（Ex/Em=490 nm/520 nm）。

显微镜拍照技巧：1）使用 DAPI通道查找细胞位置；2）阴性对照组优先拍照，阴性对照显示荧光为非特异性染色荧光，需要通过黑白平衡进行扣除至无荧光；3）实验组或阳性组拍照，扣除与对照相同的黑白平衡，得到实验组或阳性组有效荧光。

2. 流式细胞仪分析

将细胞重悬于 100 µL 1×Equilibration Buffer中，在室温下避光孵育 10 min。
300 g离心细胞，除去上清液，重悬于 50 µL TdT标记反应缓冲液中，在 37℃下孵育 2 h (不同的样本，可视情况调整孵育时间)，孵育期间可定时轻轻地晃动以混匀细胞。
300 g离心细胞。除去上清液，重悬于 1 mL PBS中。重复洗涤 2次。
重悬于 200 µL 1×DAPI中，孵育 10 min。
通过流式细胞仪分析细胞。

草莓时刻：除了基于细胞核变化检测细胞凋亡，细胞质和线粒体的变化也能反映细胞凋亡情况。细胞质的变化包括 Caspase（KTA3020，KTA3022）、Bax（ABM0074）的表达差异；线粒体膜电位下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件（KTA4001）。扫描右侧二维码，关注 Abbkine公众号，了解更多 Abbkine产品信息。