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活动截止时间：2024年1月31日
EliKine™ 人细胞间黏附因子1/CD54 ELISA定量试剂盒是一款基于双抗体夹心法的ELISA检测工具，专为定量检测人源样本中可溶性CD54（ICAM-1）蛋白而设计，可兼容细胞培养上清、血清、血浆及其他生物液体，为炎症、免疫及细胞黏附研究提供精准数据支持。
CD54（ICAM-1）是一种广泛表达的跨膜糖蛋白，在静息状态下呈低水平，而在炎症因子、细胞因子等刺激下迅速上调，并以可溶形式（sICAM-1）释放至胞外。该蛋白通过与β2整合素家族成员结合，介导白细胞与血管内皮细胞的黏附及跨内皮迁移，是炎症反应、肿瘤转移及自身免疫疾病进程中的关键分子。EliKine™ 人CD54 ELISA试剂盒利用高亲和力捕获抗体与生物素标记检测抗体构建“三明治”结构，经Streptavidin-HRP放大信号，在450 nm处读取吸光度，吸光度值与样本中CD54浓度成正比，实现7.81–500 pg/mL范围内的准确定量。
应用领域：适用于炎症机制研究、肿瘤微环境分析、自身免疫疾病模型评估、药物筛选及细胞-细胞相互作用研究等细胞生物学与免疫学方向。
| 中文名称 | 人细胞间黏附因子1/CD54 ELISA定量试剂盒-EliKine™ |
| 英文名称 | EliKine™ Human CD54 ELISA Kit |
| 产品货号 | KTE6003 |
| 反应性 | 人 |
| 检测类型 | ELISA |
| 检测方法 | 夹心法 |
| 样本类型 | 细胞培养上清#血清#血浆#其它生物液体 |
| 试剂盒组分 | • 人源 CD54 抗体预包被微孔板 • 人源 CD54蛋白标准品 • 人源 CD54检测抗体 • EliKine™ Streptavidin-HRP •标准品稀释液 • 实验缓冲液 • HRP底物 • 反应终止液 • 洗涤缓冲液 • 封板膜. |
| 检测范围 | 7.8 pg/mL- 500 pg/mL |
| 灵敏度 | 7.8 pg/mL |
| 基因ID | 3383 |
| 蛋白质ID | P05362 |
| 蛋白序列链接 | http://www.uniprot.org/uniprot/P05362 |
| 检测指标 | CD54 |
| 注意事项 | • 试剂盒的试剂不能与其它批号的试剂或超出有效期的试剂混合使用。 • 试剂应按瓶上标签说明储存，使用前室温平衡30 分钟。 • 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。 • 实验中未用的板条立即放回包装中，密闭封口，4℃保存。 • 充分混匀对反应结果尤为重要，推荐使用低速频率振荡器或者每10分钟手动摇匀。 • 对于样品和标准品，建议做双孔或者三孔检测（复孔）。. |
| 保存建议 | 请将未开封使用的试剂盒保存于2-8℃；启用后的试剂盒，请参考说明书保存各个组分。 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
1× Sample Diluent：使用前，平衡到室温，用去离子水按 5 Sample Diluent (5×) : 1 去离子水的比例稀释得到 1× Sample Diluent，轻轻混合以避免起泡。4℃ 保存，此溶液可稳定保存 30 天。1× Sample Diluent 用于稀释标准品，血清和血浆样品。
1× Sample Diluent：使用前，平衡到室温，用去离子水按 5 Sample Diluent (5×) : 1 去离子水的比例稀释得到 1× Sample Diluent，轻轻混合以避免起泡。4℃ 保存，此溶液可稳定保存 30 天。1× Sample Diluent 用于稀释标准品，血清和血浆样品。
1× Sample Diluent：1× Assay Buffer：使用前，平衡到室温，用去离子水按 5 Assay Buffer (5×) : 1 去离子水的比例稀释得到 1× Assay buffer，轻轻混合以避免起泡。4℃ 保存，此溶液可稳定保存 30 天。1× Assay buffer 用于稀释 HRP-conjugated Human CD54 Detect Antibody (100×)。
1× Assay Buffer：使用前，平衡到室温，用去离子水按 5 Assay Buffer (5×) : 1 去离子水的比例稀释得到 1× Assay buffer，轻轻混合以避免起泡。4℃ 保存，此溶液可稳定保存 30 天。1× Assay buffer 用于稀释 HRP-conjugated Human CD54 Detect Antibody (100×)。
1× Assay Buffer：Human CD54 Standard：加入 1 mL 1× Sample Diluent 复溶得到 500 pg/mL 的标准品。在进行稀释之前，将标准品至少放置 15 min 并轻轻晃动。
Human CD54 Standard：加入 1 mL 1× Sample Diluent 复溶得到 500 pg/mL 的标准品。在进行稀释之前，将标准品至少放置 15 min 并轻轻晃动。
Human CD54 Standard：1× HRP-conjugated Human CD54 Detect Antibody：稀释前充分混合。根据标准品和样品所需要的量，在干净的塑料管中用 1× Assay buffer 对 HRP-conjugated Human CD54 Detect Antibody (100×) 进行 1:100 稀释。稀释后的抗体应在稀释后 30 min 内使用。
1× HRP-conjugated Human CD54 Detect Antibody：稀释前充分混合。根据标准品和样品所需要的量，在干净的塑料管中用 1× Assay buffer 对 HRP-conjugated Human CD54 Detect Antibody (100×) 进行 1:100 稀释。稀释后的抗体应在稀释后 30 min 内使用。
1× HRP-conjugated Human CD54 Detect Antibody：HRP Substrate TMB（ ）：即用型；使用前，平衡到室温；4℃ 避光保存。
HRP Substrate TMB（ ）：即用型；使用前，平衡到室温；4℃ 避光保存。
HRP Substrate TMB（ ）：Stop Solution：即用型；使用前，平衡到室温；4℃ 保存。
Stop Solution：即用型；使用前，平衡到室温；4℃ 保存。
Stop Solution：1× Wash Buffer：使用前平衡到室温，用去离子水进行 1:20 稀释得到 1× Wash buffer。轻轻混合以避免起泡，室温保存，此溶液可稳定保存 30 天。
1× Wash Buffer：使用前平衡到室温，用去离子水进行 1:20 稀释得到 1× Wash buffer。轻轻混合以避免起泡，室温保存，此溶液可稳定保存 30 天。
1× Wash Buffer：| 序号 | 标准品体积 | 1× Sample Diluent (× 体积 μL) | 标准品浓度（pg/mL） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 1,000 µL of 500 pg/mL | 0 | 500 |
| Std.2 | 500 µL of Std.1 (500 pg/mL) | 500 | 250 |
| Std.3 | 500 µL of Std.2 (250 pg/mL) | 500 | 125 |
| Std.4 | 500 µL of Std.3 (125 pg/mL) | 500 | 62.5 |
| Std.5 | 500 µL of Std.4 (62.5 pg/mL) | 500 | 31.25 |
| Std.6 | 500 µL of Std.5 (31.25 pg/mL) | 500 | 15.625 |
| Std.7 | 500 µL of Std.6 (15.625 pg/mL) | 500 | 7.8 |
| Std.8 | 0 | 500 | 0 |
| 序号 | 标准品体积 | 1× Sample Diluent (× 体积 μL) | 标准品浓度（pg/mL） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 1,000 µL of 500 pg/mL | 0 | 500 |
| Std.2 | 500 µL of Std.1 (500 pg/mL) | 500 | 250 |
| Std.3 | 500 µL of Std.2 (250 pg/mL) | 500 | 125 |
| Std.4 | 500 µL of Std.3 (125 pg/mL) | 500 | 62.5 |
| Std.5 | 500 µL of Std.4 (62.5 pg/mL) | 500 | 31.25 |
| Std.6 | 500 µL of Std.5 (31.25 pg/mL) | 500 | 15.625 |
| Std.7 | 500 µL of Std.6 (15.625 pg/mL) | 500 | 7.8 |
| Std.8 | 0 | 500 | 0 |
注意：每次实验都需要新配制标准品。
1. 细胞培养上清：离心除去颗粒，立即测定或分装 -20℃ 保存，避免反复冻融。
1. 细胞培养上清：离心除去颗粒，立即测定或分装 -20℃ 保存，避免反复冻融。
1. 细胞培养上清：2. 血清：使用血清分离管，让样品在室温下凝结 30 min，然后 1,000 g 离心 15 min。取上层血清立即测定或分装 -20℃ 保存，避免反复冻融。
2. 血清：使用血清分离管，让样品在室温下凝结 30 min，然后 1,000 g 离心 15 min。取上层血清立即测定或分装 -20℃ 保存，避免反复冻融。
2. 血清：3. 血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后 30 min 内 1,000 g 离心 15 min。立即测定或分装 -20℃ 保存，避免反复冻融。
3. 血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后 30 min 内 1,000 g 离心 15 min。立即测定或分装 -20℃ 保存，避免反复冻融。
3. 血浆：注意：不要使用严重溶血或脂血的标本。如果样品要在 24 h 内使用，则可以将其储存在 2-8℃，避免反复冻融。测定前，应将冷冻样品缓慢升至室温并轻轻混合。
1. 从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。
1. 从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。
1.2. 每孔加入 100 μL稀释的标准品或样品。建议所有标准品和样品做复孔。给酶标板覆膜，在室温下孵育 2 h。
2. 每孔加入 100 μL稀释的标准品或样品。建议所有标准品和样品做复孔。给酶标板覆膜，在室温下孵育 2 h。
2.3. 除去每孔中的液体并洗涤，重复该过程总共洗涤三次。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 250 μL 1×Wash buffer 进行洗涤，然后静置 1-2 min。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1× Wash buffer。
3. 除去每孔中的液体并洗涤，重复该过程总共洗涤三次。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 250 μL 1×Wash buffer 进行洗涤，然后静置 1-2 min。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1× Wash buffer。
3.4. 每孔加入 100 μL 1:100 稀释的 HRP-conjugated Human CD54 Detect Antibody。给酶标板覆膜，在室温下孵育 1 h。
4. 每孔加入 100 μL 1:100 稀释的 HRP-conjugated Human CD54 Detect Antibody。给酶标板覆膜，在室温下孵育 1 h。
4.5. 重复步骤 3 中的洗涤 3-5 次。
5. 重复步骤 3 中的洗涤 3-5 次。
5.6. 每孔加入 100 μL HRP Substrate TMB（ ）。给酶标板覆膜，并在室温下避光孵育 15 min。
6. 每孔加入 100 μL HRP Substrate TMB（ ）。给酶标板覆膜，并在室温下避光孵育 15 min。
6.7. 每孔加入 50 μL Stop Solution，Stop Solution 应按照与 TMB 相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。
7. 每孔加入 50 μL Stop Solution，Stop Solution 应按照与 TMB 相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。
7.8. 在 30 min 内，测定每孔 450 nm 处的吸光值。
8. 在 30 min 内，测定每孔 450 nm 处的吸光值。
8.1. 计算每个标准品和样品的复孔平均 OD 值，并减去零浓度（Std.8）平均 OD 值。
1. 计算每个标准品和样品的复孔平均 OD 值，并减去零浓度（Std.8）平均 OD 值。
1.2. 标准曲线的绘制：以标准品浓度为 x 轴，各标准品的平均吸光度为 y 轴，绘制标准曲线。可以使用作图软件来创建标准曲线。
2. 标准曲线的绘制：以标准品浓度为 x 轴，各标准品的平均吸光度为 y 轴，绘制标准曲线。可以使用作图软件来创建标准曲线。
2.注意：如果样品被稀释，从标准曲线读取的浓度必须乘以稀释系数。
A: 双抗体夹心法是检测大分子抗原最常用的方法。双抗夹心法ELISA是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检样本中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体— 抗原—固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量；
A: 稀释好的液体样本100 μL，细胞样本1-2×106个cells，组织样本1 g左右。
A: 因为TMB显色染料经过硫酸终止之后在450nm处有最大吸收峰，所以用酶标仪检测450nm处的OD值。
A: 开封的酶标板应密封后在-20度保存，能保存一个月。
A: 无影响，只是计算的时候需注意，样本的OD值应代入计算式的X值中。
A: 血浆。
A: 可以满足，连续取的样本如果1周内检测，需保存于4℃；如1个月内检测，按一次使用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融；如6个月内检测，分装保存于-80℃，避免反复冻融。
A: 1. 加样本及试剂量不准，孔间不一致----重复测定时保持与上次操作条件一致； 2. 加样过快，孔间发生污染----加样不能过快； 3. 加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区----加样时枪头不要贴壁； 4. 不同批号试剂盒中组分混用----不同批号试剂盒中组分不可混用； 5. 温育时间、洗板、显色时间不一致----操作时间保持一致； 6. 试剂/样品没有混匀----充分混匀样品和试剂。
A: 建议在Abbkine官网搜索“KET”，客户可以了解到相关指标。如有疑问，请联系support@abbkine.com进行详细咨询。
A: 为了避免基质效应，ELISA 试剂盒针对不同的样本都会配备不同的稀释液。一些稀释液，特别是血清稀释液的配方中，会含有一些动物蛋白成分（比如 BSA）和溶解度较低的盐。这些成分在低温或是稀释液微量蒸发的情况下，会出现结晶或浑浊的现象。在试剂盒开发的过程中，我们研发人员开展的大量验证实验表明，稀释液的沉淀不会影响试剂的使用性能。
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