还原型谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒(微量法)-CheKine™

Name: 还原型谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒(微量法)-CheKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTB1600
Price: 178 CNY
Availability: InStock

CheKine™ Micro Reduced Glutathione (GSH) Assay Kit

产品货号

KTB1600

产品特点：

样本兼容广：血清、血浆、动植物组织、细胞裂解物等均可直接检测。

检测范围宽：2–400 µg/mL，满足高、低丰度样本需求。

灵敏度高：最低可检测 2 µg/mL GSH，微量样本亦可获得可信结果。

标准曲线优化：附带预验证标准品，实验当天现配现用，确保数据一致。

操作指南详尽：提供完整的样品制备流程与结果计算公式，实验更省心。

选择规格

48 T/48 S

¥178

现货（次日发货）

96 T/96 S

¥298

现货（当天发货）

🎉 限时优惠

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

CheKine™ 还原型谷胱甘肽（GSH）检测试剂盒（微量法）是一款基于比色法的微量检测工具，可在 96 孔板内快速定量血清、血浆、动植物组织、细胞裂解物等多种生物样本中的还原型谷胱甘肽含量，为细胞代谢与氧化还原状态研究提供可靠数据。

背景知识

还原型谷胱甘肽（GSH）是由甘氨酸、谷氨酸和半胱氨酸构成的天然三肽，是细胞内含量最丰富的巯基抗氧化剂。在红细胞中，GSH 通过维持血红蛋白的还原态，保护细胞免受氧化损伤；在更广泛的研究场景中，GSH 参与蛋白质巯基保护、氨基酸跨膜转运及解毒反应。细胞内 GSH 与氧化型谷胱甘肽（GSSG）的比值（GSH/GSSG）被视为细胞氧化还原状态的动态指标，准确测定 GSH 含量及 GSH/GSSG 比值，可直观反映细胞所处的氧化应激或还原环境。

应用领域

该试剂盒专为细胞代谢研究设计，可广泛应用于：
• 肿瘤细胞、干细胞、原代细胞等体外模型的氧化应激评估；
• 药物、毒物或营养素干预后细胞内 GSH 水平变化监测；
• 动植物组织样本的抗氧化能力比较；
• 血清/血浆等体液样本的氧化还原状态临床前研究。

产品参数

中文名称	还原型谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒(微量法)-CheKine™
英文名称	CheKine™ Micro Reduced Glutathione (GSH) Assay Kit
产品货号	KTB1600
检测类型	谷胱甘肽
检测方法	比色法
试剂盒组分	• Extraction Buffer • Assay Buffer • Chromogen •Standard
分子	GSH
检测指标	GSH
注意事项	• 如果不立即进行实验，样本可在-80°C保存1个月。 • 正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。 • 每次实验，请使用新配制的标准品；配制好的标准品需要在4 h之内使用。
保存建议	收到货后，请避光保存于4℃。请参阅说明书中各个组件的存储条件，自发货之日起，按照推荐的保存条件，有效期为12个月。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

酶标仪或可见光分光光度计（能测 412 nm处的吸光度）
水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿，可调节式移液枪及枪头
低温离心机
去离子水
匀浆器（如果是组织样本）

试剂盒组分

试剂盒组分	规格	储存条件
Extraction Buffer	70 mL (48 T) 70 mL×2 (96 T)	4℃
Assay Buffer	10 mL (48 T) 20 mL (96 T)	4℃
Chromogen	4 mL (48 T) 8 mL (96 T)	4℃，避光保存
Standard Powder	×1 vial (10 mg) (48 T) ×2 vials (10 mg) (96 T)	4℃，避光保存

试剂准备

Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Assay Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Chromogen：即用型；4℃避光保存。

标准品制备：

Diluted Extraction Buffer：Extraction Buffer用去离子水稀释 10倍。取 200 µL Extraction Buffer 加入 1,800 µL去离子水，Diluted Extraction Buffer用于稀释标准品。

10 mg/mL GSH标准品：每管用 1 mL去离子水溶解得 10 mg/mL GSH标准品，分装后-20℃，避光保存 1个月。

标准品制备：

使用 10 mg/mL GSH标准品，按照下表所示，进一步稀释标准品：

序号	Standard (µL)	Diluted Extraction Buffer (µL)	Concentration (µg/mL)
Std.1	40 µL of 10 mg/mL GSH	960	400
Std.2	100 µL of Std.1 (400 µg/mL)	100	200
Std.3	100 µL of Std.2 (200 µg/mL)	100	100
Std.4	100 µL of Std.3 (100 µg/mL)	100	50
Std.5	100 µL of Std.4 (50 µg/mL)	100	25
Std.6	100 µL of Std.5 (25 µg/mL)	100	12.5
Std.7	100 µL of Std.6 (12.5 µg/mL)	100	6.25

注意：每次实验，请使用新配制的标准品；配制好的标准品需要在 4 h之内使用。

样本制备

注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1个月。处理好的样本须当天检测。测定过程中样本在冰上放置，以免变性和失活。

1. 动物组织：

称取 0.1 g组织样本，加入 1 mL预冷的 Extraction Buffer，快速冰上匀浆。匀浆后的样本，8,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。

2. 植物组织：

称取 0.1 g植物组织，加入 1 mL预冷的 Extraction Buffer，冰浴超声波破碎 5 min（功率 20%或 200W，超声 3 s，间隔 7s，重复 30次）。超声后的样本，8,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。

3. 血清或血浆：

将收集的抗凝血于 600 g，4℃离心 10 min，30 min内吸取上层血浆到另一支试管中，加入等体积的Extraction Buffer，8,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。

4. 血细胞：

将收集的抗凝血于 600 g，4℃离心 10 min，弃去上层血浆用 3倍体积的 PBS清洗 3次（用 PBS重悬血细胞，600 g，4℃离心 10 min），加入等体积 Extraction Buffer，混匀后 4℃放置 10 min，8,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。

5. 细胞或细菌：

收集 2×106个细胞（菌），首先用冷 PBS清洗细胞（菌）2次（用 PBS重悬，600 g，4℃离心 10 min），加入 3倍细胞（菌）沉淀体积的 Extraction Buffer重悬，冰浴超声波破碎 5 min（功率 20%或 200W，超声 3 s，间隔 7s，重复 30次），8,000 g，4℃离心 10 min，取上清液做进一步分析。

注意：该试剂盒提取的样本也适用于氧化型谷胱甘肽（KTB1610）的检测。因 Extraction Buffer中含有蛋白质沉淀剂，因此上清液不能用于蛋白浓度测定。如需测定蛋白含量，需另取相同样本，把 Extraction Buffer换成去离子水提取制备。如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。

实验步骤

1.

酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上，调节波长至 412 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。

2.

在 96孔板或微量玻璃比色皿中按照如下方式加样：

试剂	空白孔（µL）	标准孔（µL）	测定孔（µL）
Sample	0	0	20
去离子水	20	0	0
Std.	0	20	0
Assay Buffer	140	140	140
Chromogen	40	40	40

充分混匀，室温避光孵育 2 min，记录 412 nm处吸光度值 A 空、A 标、A 测。所有孔测定的吸光度 A值减去空白孔的吸光度 A 空，即ΔA 标=A 标-A 空，ΔA 测=A 测-A 空。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本的ΔA 测高于 400 µg/mL标准品的ΔA 标，将样本用去离子水进一步稀释，乘以最终的稀释倍数，如果ΔA 测低于 0.01，可增加样本量。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

1. 标准曲线的绘制

以标准品浓度为 y轴，ΔA 标为 x轴，绘制标准曲线。将ΔA 测代入方程得到 y值（µg/mL），还原型谷胱甘肽含量 (µg/mL)=y。

2. 含量计算

(1) 按样本质量计算

GSH含量(µg/g 质量)=y×V 样÷(V 样÷V 提取×W)×n=y÷W×n

(2) 按蛋白浓度计算

GSH含量(µg/mg prot)=y×V 样÷(V 样×Cpr)×n=y÷Cpr×n

(3) 按细菌或细胞数量计算

GSH含量(nmol/104)=y÷(数量÷V 提取)×n=y÷500×n=0.002×y×n

(4) 按液体体积计算

GSH含量(nmol/mL)=y×2×n

W：样本质量，g；V 样：加入样本的体积，20 μL； V 提取：加入 Extraction Buffer体积，1 mL；n：样本的稀释倍数；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；500：细菌或细胞总数，500万个；2：提取液体时稀释一倍。

常见问题

Q: 请问动物组织加了蛋白去除试剂匀浆后可以测蛋白浓度吗？如果不可以该怎么测蛋白浓度呢

A: 加了蛋白去除试剂匀浆后的样本是不能做蛋白定量的，不准确的，如果要检测蛋白浓度要么平行准备两份样本一份加PBS或者其他合适的溶液匀浆，一份加蛋白去除试剂处理后进行GSH、GSSG的检测。

Q: 细胞用反复冻融法处理的具体步骤是什么？

A: 放在-80冻15min，迅速37度水浴5-10min，短暂涡旋，裂解细胞，提醒使用耐冻的离心管；如果样本量较少，5min即可完成冻/融（实际操作1mL细胞悬液）；核心是速冻速融，缓慢冷冻会形成大冰晶，主要存在于细胞外，导致细胞脱水但不易破碎；缓慢融化会重结晶，进一步破坏细胞结构，但速冻速融总体效率更高。

Q: 你好，请问测定动物组织的GSH，需要灌流去除血液吗，血液会不会对GSH有影响。另外，组织一般用多少g呢

A: 灌流去除血液较好，血液有影响，尽量去除。先按10毫克制备样品

Q: 该类试剂盒一般什么单位用的多？

A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。

Q: 该类试剂盒做过哪些实验材料的验证？

A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。