488偶联试剂盒-LinKine™-AbFluor™

Name: 488偶联试剂盒-LinKine™-AbFluor™
Brand: Abbkine
SKU: KTL0520
Price: 1689 CNY
Availability: InStock

LinKine™ AbFluor™ 488 Labeling Kit

产品货号

KTL0520

产品特点：

活化的 AbFluor™ 488 – 无需额外活化步骤，开盒即可直接偶联抗体或蛋白。

优化方案 – 专利缓冲体系与最佳染料/蛋白比例，确保高荧光强度与蛋白活性。

高效纯化 – 配套 0.5 mL 50 KD 纯化柱，快速去除游离染料，蛋白回收率高。

选择规格

3×100 μg

¥1689

现货（次日发货）

1 mg

¥2716

现货（次日发货）

🎉 限时优惠

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

LinKine™ AbFluor™ 488 Labeling Kit（LinKine™ AbFluor™ 488偶联试剂盒）是一套专为抗体或蛋白快速、高效标记而设计的即用型试剂盒，可在标准实验流程下将活化的AbFluor™ 488荧光染料共价偶联至目标蛋白，实现高亮度、低背景的绿色荧光标记。

AbFluor™ 染料是一系列高度水溶性的荧光染料，覆盖可见光到近红外光谱，特别适合蛋白与核酸的生物标记。AbFluor™ 488 作为其中的绿色荧光成员，最佳激发波长为 488 nm（氩激光线），发射峰位于 520 nm 左右，背景低、仪器兼容性好，是 FITC 与 Alexa Fluor 488 的理想替代。试剂盒中染料已预先活化，可直接与抗体或蛋白的游离氨基反应，形成稳定共价键；随后通过 50 KD 纯化柱快速去除游离染料，获得高纯度、高回收率的标记蛋白。

应用领域

适用于蛋白偶联相关的免疫荧光、流式细胞术、共聚焦成像、Western blot、ELISA 等实验场景，尤其适合需要将抗体或其他蛋白标记为绿色荧光的科研与工业应用。

产品参数

中文名称	488偶联试剂盒-LinKine™-AbFluor™
英文名称	LinKine™ AbFluor™ 488 Labeling Kit
产品货号	KTL0520
偶联物	AbFluor™ 488
试剂盒组分	• 活化的 AbFluor™ 488 偶联物溶液 • AbFluor™ 488 偶联缓冲溶液 • 纯化柱（0.5 mL，50KD）
注意事项	• 待标记样本的初始浓度不应低于2 mg/ml。 • 请注意，缓冲液中不允许含有氨基的组分，这会影响偶联效果。 • 少量的BSA不会影响结果，建议使用PBS作为所需的缓冲液。
保存建议	该试剂盒在-20℃条件下可保存6个月。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

注意：该试剂盒所配纯化柱适用于分子量在 100 KD 到 200 KD 的样本；如有未使用完的试剂，请及时密封保存于-20℃。

自备耗材

待标记样本
移液器和吸头
去离子水
PBS (PH 7.4)

样本制备

待标记样本的初始浓度应高于 2 mg/mL，建议蛋白浓度达到 2.5 mg/mL 以上效果最佳，否则实验前需进行浓缩以提高浓度。待标记样本的组分（或储存缓冲液）应符合如下要求：

不含有氨基成分，否则会影响偶联效果。
少量 BSA 不会影响偶联效果，但建议使用 PBS 作为缓冲液。
若样本中含有可能干扰标记的物质，建议用 PBS 置换缓冲液，具体方法为：将样本加入超滤管中，加入 200-150 µL PBS，12,000 g、4℃，离心 10 min，弃掉滤液；再次补齐 PBS，12,000 g、4℃、离心 10 min；离心后取出超滤管内芯，倒置于干净外管中，4,000 g，4℃，离心 2 min，收集置换缓冲液后的样本。

待标记样本的缓冲液应满足如下要求：

条件	要求
pH	6.5-8.0
无胺缓冲液	MES, PBS, HEPES
Chelating agents (e. g. EDTA)	✓
甘油	< 50%
BSA	< 0.1%
甘氨酸	✗
含氨基成分	✗

实验步骤

注意：请根据实际样品量，相应放大或缩小试剂盒各组分在反应体系中的体积。

规格	最适标记的样本量	最适的标记体系
3×100 µg	3×100 µg	3×50-3×75 µL
1 mg	1 mg	500-750 µL

以下操作步骤是以 3×100 µg 规格为例，其它规格的试剂用量请进行等比调整。如果需要调整体积，请保持样本量不变更改标记体系中 AbFluorTM 488 labeling solution、Activated AbFluorTM 488 solution 和去离子水的体积。

向待标记样本溶液中加入 15 µL AbFluorTM 488 labeling solution，用移液器温和混匀。
吸取 7.5 µL Activated AbFluorTM 488 solution 至步骤 1 反应液中，加去离子水至 150 µL（注：此体积为标记体系），温和混匀，37℃避光静置 1 h。

注意：步骤 1/2 属于标记步骤。

向步骤 2 反应液中加入适量 PBS（定容至约 500 µL），温和混匀，将溶液移至纯化柱，12,000 g、4℃、离心 10 min。
弃滤液，加适量 PBS（定容至约 500 µL）到纯化柱，4℃、12,000 g、离心 10 min。
取出纯化柱倒置于干净离心管中，4℃、4,000 g、离心 2 min，离心管收集到的溶液即为偶联产物。

注意：步骤 3/4/5 属于纯化步骤；偶联物 4℃避光条件下可稳定保存一个月。若需长期储存，请分装并于-20℃下避光保存，避免反复冻融，可加入同体积甘油。

结果计算

1. 偶联物浓度的计算：

C (mg/mL) = {[A280-(Amax×CF)]/1.4}×稀释因子

其中：C 是指实验收集的偶联物浓度；稀释因子是指在光度测量时的稀释倍数（详见备注）； A280和 Amax分别是指在 280 nm 处的吸光度以及在最大吸收波长（AbFluorTM 488 的最大吸收波长为 490 nm）处的吸光度；CF 是校正因子，AbFluorTM 488 的 CF 值为 0.1；1.4 则是指 IgG（mL/mg）的消光系数，AbFluorTM 488 的消光系数为 70,000。

2. 偶联物标记程度（degree of labeling, DOL）的计算:

DOL = (Amax × Mwt × 稀释因子)/(ε × C)

其中：Amax 指在最大吸收波长处的吸光度（AbFluorTM 488 的最大吸收波长为 490 nm）；稀释因子是指在光度测量时的稀释倍数； C 是指实验收集的偶联物浓度；Mwt 是指待标记样本的分子量；ε 是荧光染料的消光系数，AbFluorTM 488 的消光系数为 70,000。

注意：过柱洗脱的偶联物直接用于吸光度检测可能浓度过大，因此需要稀释到适当浓度（蛋白测定仪的浓度范围）。稀释倍数（即稀释因子）需要从起始样本质量以及洗脱得到的偶联物的总体积来进行预估，如未经稀释则稀释因子为 1。

常见问题

问 1：浓缩后样本浓度仍低于 2 mg/mL？

答 1：如果浓缩后样本浓度仍小于 2 mg/mL 可适当调整标记体系的体积，但最终浓度应大于 1 mg/mL。步骤 1 中 AbFluorTM 488 labeling solution 的体积应为标记体系体积的 10%，步骤 2 中可不添加去离子水，Activated AbFluorTM 488 solution 的体积保持不变，您也可以根据自己实验进行适当调整。

问 2：待标记样本分子量大小不同，如何选择合适的纯化柱？

答 2：本产品配备的超滤管适用于分子量为 100 KD-200 KD 的样本。若您需要偶联的样本分子量大于 200 KD 或小于 100 KD，为保证偶联最佳效果，需另行配备大小合适的超滤管。

问 3：待标记样本分子量与 AbFluorTM 488 相近？

答 3：如果样本分子量与 AbFluorTM 488 相近，可在进行完此说明书对应的标记步骤后加入 30 µL 0.5 µM NH4Cl，37℃下孵育 10 min，以淬灭游离的 AbFluorTM 488，无须进行此说明书对应的纯化步骤。

问 4：AbFluorTM系列荧光染料的相关参数？

答 4：详见如下表格：

名称	最大激发光/发射光 (nm)	消光系数 (ε)	校正因子 (Cf)	分子量 (Da)
AbFluor™ 488	490/515	70,000	0.1	~834
AbFluor™ 555	555/565	150,000	0.08	~1077
AbFluor™ 594	593/614	115,000	0.08	~927
AbFluor™ 647	650/665	240,000	0.03	~1258
AbFluor™ 680	680/701	140,000	0.32	~1111