丙酮酸脱氢酶(PDH)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™

Name: 丙酮酸脱氢酶(PDH)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTB1270
Price: 626 CNY
Availability: InStock

CheKine™ Micro Pyruvate Dehydrogenase (PDH) Activity Assay Kit

产品货号

KTB1270

产品特点：

专为动植物组织、细胞及细菌样本优化，兼容血清（浆）等液体样本

微量法设计，节省样本与试剂，适合高通量筛选

提供完整样品制备指南与标准化计算模板，实验结果可直接用于后续分析

选择规格

48 T/48 S

¥626

现货（次日发货）

96 T/96 S

¥1016

现货（次日发货）

🎉 限时优惠

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

亚科因生物研发的CheKine™ 丙酮酸脱氢酶（PDH）活性检测试剂盒（微量法）是一款基于比色法的微量检测工具，可快速、便捷地测定动植物组织、细胞及细菌中PDH活性，为细胞代谢研究提供可靠数据支持。

背景与原理

丙酮酸脱氢酶（PDH）是丙酮酸脱氢酶复合体（PDHC）的限速酶，广泛分布于动物、植物、微生物及培养细胞中，负责催化丙酮酸氧化脱羧生成羟乙基-TPP，将糖酵解与三羧酸循环紧密衔接。本试剂盒利用PDH催化丙酮酸脱氢并还原2,6-二氯靛酚（2,6-DCPIP）的特性，通过检测605 nm处吸光度的下降速率，定量反映PDH活性。试剂盒内含全部必需组分，无需额外配制，操作步骤清晰，适用于微量样本的高通量分析。

应用领域：细胞代谢研究、线粒体功能评估、糖酵解与TCA循环机制探索、微生物代谢工程及药物靶点验证。

产品参数

中文名称	丙酮酸脱氢酶(PDH)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
英文名称	CheKine™ Micro Pyruvate Dehydrogenase (PDH) Activity Assay Kit
产品货号	KTB1270
检测方法	比色法
样本类型	动植物组织、细胞和细菌
试剂盒组分	•Extraction BufferⅠ •Extraction BufferⅡ •ReagentⅠ • ReagentⅡ •ReagentⅢ
分子	丙酮酸脱氢酶
检测指标	PDH
注意事项	•推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。
保存建议	-20℃，避光保存 6 个
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。

自备耗材

酶标仪或可见分光光度计（能测 605 nm处的吸光度）
制冰机，低温离心机
水浴锅
96孔板或微量玻璃比色皿
可调节式移液枪及枪头
去离子水
匀浆器（如果是组织样本）

试剂盒组分

组分	规格	储存条件
Extraction BufferⅠ	60 mL (48 T) 60 mL×2 (96 T)	4℃
Extraction BufferⅡ	0.75 mL (48 T) 1.5 mL (96 T)	-20℃，避光保存
ReagentⅠ	11.4 mL (48 T) 22.8 mL (96 T)	4℃
ReagentⅡ	Powder×1 vial (48 T) Powder×1 vial (96 T)	4℃，避光保存
ReagentⅢ	Powder×1 vial (48 T) Powder×1 vial (96 T)	-20℃，避光保存

试剂准备

Extraction BufferⅠ：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Extraction BufferⅡ：即用型；使用前，平衡到室温；-20℃避光保存。
ReagentⅠ：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
工作液：临用前配制，将 ReagentⅡ和 ReagentⅢ全部转移到 ReagentⅠ中，充分混匀溶解待用。用不完的工作液-20℃避光分装保存 1个月，避免反复冻融。

注意：Extraction BufferⅡ和 ReagentⅡ具有一定的毒性，请操作时做好防护措施。

样本制备

注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1个月。处理好的样本须当天检测。测定过程中样本和所有试剂在冰上放置，以免变性和失活。

1. 动植物组织

称取约 0.1 g组织，加入 1 mL Extraction BufferⅠ和 10 μL Extraction BufferⅡ，冰浴匀浆，11,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。

2. 细胞或细菌

收集 500万细胞或细菌到离心管内，用冷 PBS清洗细胞或细菌，离心后弃上清，加入 1 mL Extraction BufferⅠ和 10 μL Extraction BufferⅡ，冰浴超声波破碎细胞或细菌 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次），然后 11,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。

实验步骤

酶标仪或可见分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 605 nm，可见分光光度计用去离子水调零。
工作液于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）孵育 10 min。
在 96孔板或微量玻璃比色皿中依次加入 10 µL样本、190 µL工作液，充分混匀后，于 605 nm检测，记录 20 s和 5 min 20 s的吸光值，分别记为 A1和 A2，计算ΔA=A1-A2。

注意：实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。ΔA应在 0.01-0.3之间，如果ΔA小于 0.01可适当加大样本量或延长反应时间 10-15 min。如果ΔA大于 0.3，样本可用 Extraction BufferⅠ进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少样本量。因通过单位时间内吸光值变化计算酶活，不推荐同时测多个样本。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

A. 使用 96孔板测定的计算公式

1. 按样本鲜重计算：

单位的定义：每 g组织在反应体系中每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯靛酚定义为一个酶活性单位。

PDH活性(U/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V 样÷V 提取×W)÷T=384.76×ΔA÷W

2. 按细胞或细菌密度计算：

单位的定义：每 1万个细胞或细菌在反应体系中每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯靛酚定义为一个酶活性单位。

PDH活性(U/10⁴)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V 样÷V 提取×500)÷T=0.77×ΔA

V 反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：2,6-二氯靛酚摩尔消光系数，21×10³ mol/L/cm；d：96孔板光径，0.5 cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；T：反应时间，5 min；V 提取：加入提取液体积，1.01 mL；W：样品质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。

B. 使用微量玻璃比色皿进行测定的计算公式

将上述计算公式中光径 d: 0.5 cm调整为 d: 1 cm进行计算即可。

常见问题

Q: 该类试剂盒一般什么单位用的多？

A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。

Q: 该类试剂盒做过哪些实验材料的验证？

A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

Q: 该产品线检测可使用分光光度计替代酶标仪吗？

A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。

Q: 该类试剂盒使用量应如何计算？

A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

Q: 该系列试剂盒可以检测蓝藻等微生物样本吗？

A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

文献引用

Enteric coronavirus PDCoV evokes a non-Warburg effect by hijacking pyruvic acid as a metabolic hub.

杂志名称: Redox biology | 作者: Su, Guanning, et al.

IF: 11 | 发表时间: 2024

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