Pro 过氧化氢(H2O2)含量检测试剂盒(荧光法)-CheKine™

Name: Pro 过氧化氢(H2O2)含量检测试剂盒(荧光法)-CheKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTB9041
Price: 598 CNY
Availability: InStock

CheKine™ Pro Hydrogen Peroxide (H2O2) Fluorometric Assay Kit

产品货号

KTB9041

产品特点：

荧光法检测，灵敏度高，信号稳定，适合微量样本

验证的样本类型齐全，覆盖细胞、组织、血清/血浆及多种液体

操作简便，一步加样即可读板，兼容高通量筛选

-20 ℃避光保存 6 个月，冰袋运输，到货即用

选择规格

48 T/48 S

¥598

现货（次日发货）

96 T/96 S

¥998

现货（次日发货）

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

CheKine™ Pro 过氧化氢（H₂O₂）含量检测试剂盒（荧光法）是一款专为细胞代谢研究设计的荧光检测工具，可在 96 孔板或 384 孔板中快速、灵敏地定量细胞培养液、组织匀浆、血清/血浆等样本中的 H₂O₂ 水平，为氧化应激、信号转导及代谢通路研究提供可靠数据。

过氧化氢（H₂O₂）是细胞代谢过程中活性氧（ROS）的重要成员，既是氧化应激的关键指标，也是多种信号通路的第二信使。CheKine™ Pro 过氧化氢（H₂O₂）含量检测试剂盒（荧光法）基于酶促-荧光偶联反应：样本中的 H₂O₂ 在特异性酶作用下与荧光探针反应，生成可在 Ex/Em = 535 nm / 587 nm 处检测的荧光产物，荧光强度与 H₂O₂ 浓度呈正比。该体系对动物或植物组织、细胞、血清（浆）及其他液体样本均适用，可在同一批次实验中实现多样本类型并行检测。

应用领域

广泛应用于细胞代谢、氧化应激、药物毒性评价、信号转导机制研究及植物逆境生理等方向，特别适合 96/384 孔板高通量检测需求。

产品参数

中文名称	Pro 过氧化氢(H2O2)含量检测试剂盒(荧光法)-CheKine™
英文名称	CheKine™ Pro Hydrogen Peroxide (H2O2) Fluorometric Assay Kit
产品货号	KTB9041
检测方法	荧光法
试剂盒组分	• Assay Buffer •Reagent I •Reagent Ⅱ •SOD •Standard
分子	H2O2
检测指标	H2O2
注意事项	• 推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。
保存建议	-20℃，避光保存 6 个月
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。

自备耗材

荧光酶标仪（激发波长为 535 nm，发射波长为 587 nm）
全黑 96孔板、可调节式移液枪及枪头
低温离心机、恒温箱、制冰机
去离子水，PBS (pH 7.0)
匀浆器（如果是组织样本）

试剂准备

试剂盒组分

试剂盒组分	规格	储存条件
Assay Buffer	75 mL (48 T) 75×2 mL (96 T)	4℃
ReagentⅠ	35 µL (48 T) 70 µL (96 T)	-20℃，避光保存
ReagentⅡ	14 µL (48 T) 28 µL (96 T)	-20℃，避光保存
SOD	30 µL (48 T) 60 µL (96 T)	-20℃，避光保存
Standard (8.8 M)	100 µL (48 T) 100 µL (96 T)	-20℃，避光保存

Assay Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

ReagentⅠ：即用型；使用前，平衡到室温；用不完的试剂在-20℃避光分装保存，避免反复冻融。

注意：ReagentⅠ有毒，建议在通风橱进行实验。

ReagentⅡ：即用型；-20℃避光保存。

SOD：即用型；-20℃避光保存。

Working Reagent：临用前避光配制；取 50 μL ReagentⅠ和 20 μL ReagentⅡ，加入 4.93 mL Assay Buffer，充分混匀，该体积可用 100次，按需配制，当天内使用，使用时须避光。

Standard (8.8 M)：使用前，用去离子水稀释 1,000倍得到 8.8 mM标准品，充分溶解，用不完的 Standard (8.8 M) -20℃避光分装保存，避免反复冻融。

Standard设置

取 11.5 µL 8.8 mM标准品，加入 988.5 µL Assay Buffer配制成 100 µM标准品，按下表所示，配制标准品溶液。

序号	Standard体积	Assay Buffer体积（µL）	标准品浓度（µM）
Std.1	250 µL 100 µM Standard	750	25
Std.2	500 µL of Std.1 (25 μM)	500	12.5
Std.3	500 µL of Std.2 (12.5 μM)	500	6.25
Std.4	500 µL of Std.3 (6.25 μM)	500	3.12
Std.5	500 µL of Std.4 (3.12 μM)	500	1.56
Std.6	500 µL of Std.5 (1.56 μM)	500	0.78
Std.7	500 µL of Std.6 (0.78 μM)	500	0.39
0（空白孔）	0	500	0

注意：稀释的标准品溶液现配现用，尽快检测，不宜长久放置。

样本制备

注意：样本以新鲜为宜，若不能立刻检测，应储存在-80℃保存。

动植物组织：称取 0.1 g样本，加入 1 mL冷的 Assay Buffer，冰浴匀浆，10,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
细胞：收集 500万细胞或细菌到离心管内，用冷 PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入 1 mL冷的 Assay Buffer，冰浴超声波破碎 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次），10,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
血清或其他液体样本：10,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。

注意：1. 实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本用 Assay Buffer稀释成不同浓度进行预实验，根据预试验的结果，结合本试剂盒的线性范围：0.02-10 μmol/L，请参考下表稀释（仅供参考），若检测值为负或样品中 NADH浓度超过 10 μM和谷胱甘肽浓度超过 50 μM时，可向反应体系中添加 SOD，每孔 0.4 μL。

样本	稀释倍数	样本	稀释倍数
10%小鼠脑	1-3	10%小鼠肺	1-3
胎牛血清	1-2	10%烟草叶	1-2

注意：2. 避免使用含有 DTT或β-巯基乙醇的样品，因为 Resorufin在存在超过 10 μM硫醇的情况下不稳定。

注意：3. 如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。

实验步骤

荧光酶标仪预热 30 min以上，调节激发波长为 535 nm，发射波长为 587 nm。
操作表（下述操作在全黑 96孔板中操作）：

试剂	测定孔（μL）	标准孔（μL）
样本	50	0
Standard	0	50
Working Reagent	50	50

混匀，室温避光静置 20 min，荧光酶标仪上设置激发波长 535 nm，发射波长 587 nm，测定各孔荧光值，分别记为 RFU 测定、RFU 标准和 RFU 空白，计算ΔRFU 测定=RFU 测定-RFU 空白，ΔRFU 标准=RFU 标准-RFU 空白。

结果计算

标准曲线的绘制
以标准溶液浓度为 x轴，ΔRFU 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔRFU 测定带入方程得到 x (μM)。
H2O2含量的计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
H2O2(nmol/mg prot)=x×f÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
H2O2(nmol/g 鲜重)=x×f÷W
（3）按照细胞数量计算
H2O2(nmol/104 cell)=x×f÷N
（4）按液体体积计算：
H2O2(nmol/mL)=x×f
1 μM=1 nmol/mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；f：样本稀释倍数；W：样品质量，g；N：细胞总数，以 104计。

常见问题

Q: 该类试剂盒一般什么单位用的多？

A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。

Q: 该类试剂盒做过哪些实验材料的验证？

A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。