土壤全钛含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™

注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。

自备耗材

• 酶标仪或可见光分光光度计（能测 390 nm处的吸光度）
• 96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头、15 mL离心管
• 马弗炉、低温离心机、分析天平
• 去离子水、浓盐酸
• 坩埚

试剂准备

Extraction Buffer：自备；每个样本需要 10 mL，根据实验用量，按照 HCl：去离子水=1:1的比例按需配制，现用现配。

Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。

Working Reagent II：临用前配制；48 T试剂盒向 Reagent II 中加入 3 mL去离子水；96 T试剂盒向 Reagent II 中加入 6 mL去离子水，充分溶解待用；用不完的试剂 4℃避光保存 2周。

Reagent III：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。

Standard：即用型；1 mg/mL钛标准液；4℃避光保存。使用 1 mg/mL钛标准液，按照下表所示，进一步稀释标准品：

注意：Extraction Buffer和 Standard有一定的刺激性，建议在使用过程中做好个人防护。

注意：每次实验都要做一次标准品检测；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4小时内使用。

样本制备

注意：建议使用新鲜土壤样本。如果不立即使用，可将样品在-80℃下保存一个月。

称取约 0.1 g土样于坩埚中，加入 0.5 g ReagentⅠ，在马弗炉中 900℃熔融 20 min，趁热取出加 10 mL Extraction Buffer溶解熔块（及时盖盖防止液体飞溅），待完全溶解后转移至 15 mL离心管，于 10,000 g，25℃离心 10 min，取上清液待测。

注意：实验温度较高，谨慎操作；须趁热加入 Extraction Buffer溶解熔块，若难溶可用玻璃棒缓慢搅拌加速溶解。

实验步骤

1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 390 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。

2. 操作表（下述操作在 96孔板或微量玻璃比色皿中进行）：

3. 混匀，充分混匀，25℃静置 30 min，于 96孔板或微量玻璃比色皿中，记录 390 nm处吸光值。测定管记为 A 测定，标准管记为 A 标准，空白管记为 A 空白。计算ΔA 测定=A 测定-A 空白，ΔA 标准=A 标准-A 空白。

注意：空白孔和标准孔只需做 1-2次。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA 测定小于 0.0016 mg/mL的ΔA 标准，可适当加大样本量。如果ΔA 测定大于 0.1 mg/mL的ΔA 标准，上清液可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以简洁计算公式为最终计算公式。

1. 标准曲线的绘制

以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA 测定带入方程得到 x (mg/mL)。

2. 全钛含量的计算：

全钛含量（mg/kg）=x×V 样总÷(W÷1,000)=10,000×x÷W

V 样总：加入 Extraction Buffer体积，1 mL；W：样本质量，g；1,000：单位换算系数，1 kg=1,000 g。