海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒

Name: 海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒
Brand: Abbkine
SKU: KTA8012
Price: 406 CNY
Availability: InStock

Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit

产品货号

KTA8012

产品特点：

发光强度高，信号输出稳定，适合弱表达样本

检测灵敏度高，线性范围宽，可覆盖3–4个数量级

操作便捷，仅需“裂解-加底物-读值”三步，30 min内完成检测

选择规格

100 T

¥406

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

亚科因生物研发的海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒 (Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit, 货号 KTA8012)是一种基于海肾荧光素酶催化腔肠素氧化发光的生物发光体系，用于在细胞、原生质体或植物叶片等样本中快速、灵敏地检测报告基因表达活性的试剂盒。

在氧气存在下，海肾荧光素酶（Renilla luciferase）可催化底物腔肠素（Coelenterazine）氧化为肠酰胺（Coelenteramide），同时释放瞬时蓝光信号。该反应无需激发光，背景极低，信号强度与酶量成正比。研究者通常将目的基因的启动子或3'-UTR序列克隆至Renilla luciferase上游或下游，构建报告基因质粒并转染细胞；经药物或其他处理后裂解细胞，通过测定发光值即可定量评估转录调控活性。本试剂盒采用优化的裂解与反应缓冲液，确保信号稳定、灵敏度高，且不受细胞内源荧光干扰。

应用领域

适用于细胞水平的基因转录调控研究，包括药物筛选、信号通路验证、启动子/增强子活性分析、miRNA靶基因验证及植物基因功能研究等场景。

产品参数

中文名称	海肾荧光素酶报告基因检测试剂盒
英文名称	Renilla Luciferase Reporter Gene Assay Kit
产品货号	KTA8012
样本类型	细胞、原生质体、植物叶片
试剂盒组分	• Renilla Luciferase Lysis Buffer (5×) • Renilla Luciferase Assay Buffer • Renilla Luciferase Substrate (50×)
分子	海肾荧光素酶
检测指标	海肾荧光素酶
注意事项	•推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。
保存建议	-20℃，避光保存 12 个月
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

细胞培养板、可调节式移液枪及枪头
去离子水，PBS
低温离心机、96 孔全黑酶标板或全白酶标板
发光检测仪或多功能酶标仪

试剂准备

Renilla Luciferase Lysis Buffer：临用前配制，用去离子水将 Renilla Luciferase Lysis Buffer (5×)稀释 5倍得到 Renilla Luciferase Lysis Buffer，-20℃保存。

Renilla Luciferase Solution：临用前配制，根据实际使用量，以 50:1的比例将适量的 Renilla Luciferase Assay Buffer和 Renilla Luciferase Substrate (50×) 混匀。

注意：Renilla Luciferase Solution需现配，Renilla Luciferase Substrate (50×) 溶解于无水乙醇中，使用前需瞬时离心至管底，小心量取管内溶液体积，如发现液体体积有明显减少，请加入无水乙醇补足体积后保存。

实验步骤

1. 细胞裂解：

(1)细胞：

a. 在合适的孔板上培养细胞后进行转染并用适当的方法处理细胞。

b. 将培养基移除，加 PBS轻轻洗涤细胞 2次（贴壁细胞进行此操作，悬浮细胞可直接离心收集细胞），吸弃 PBS，按如下方案加入 Lysis Buffer。

试剂	96孔板	48孔板	24孔板	12孔板	6孔板
Renilla Luciferase Lysis Buffer (μL)	100	150	200	300	500

注意：如荧光素酶的表达水平较低，可适当减少 Lysis Buffer用量，如 24孔板每孔加入 100 μL，6孔板每孔加入 200 μL。

c. 细胞置于摇床上震荡 5-10 min，充分裂解细胞。

d. 将细胞裂解产物 10,000 rpm离心 2 min，取上清用于检测。

(2)原生质体（仅供参考）：

a. 制备原生质体，并将相应的质粒转化原生质体。

b. 16-24 h后离心收集 2×10⁵原生质体，加入 200 μL的 Renilla Luciferase Lysis Buffer。

c. 室温孵育 5-10 min，充分裂解原生质体。

d. 将原生质体裂解产物 10,000 rpm离心 2 min，取上清用于检测。

(3)植物叶片（仅供参考）：

a. 将含相应质粒的农杆菌注射植物叶片。

b. 注射后 2天取约 1 cm²的叶片加入 500 μL Renilla Luciferase Lysis Buffer，匀浆器研磨后 10,000 rpm离心 2 min，取上清用于检测。

注意：细胞裂解后可立即检测荧光素酶活性，也可以冻存，需要时再进行检测，冻存样品需融解至室温再进行检测。

2. 小心吸取 20-100 µL细胞裂解上清（如果样品量足够，请加入 100 µL，如果样品量不足可以适当减少用量，但同批样品的使用量应保持一致）至检测管或 96孔全黑/全白酶标板中，将 100 µL平衡至室温的 Renilla Luciferase Solution加入检测管或酶标板中，迅速混匀后，立即于发光检测仪或多功能酶标仪中检测 Renilla Luciferase报告基因活性。

注意事项

由于温度对酶反应有影响，所以测定时，样品和试剂均需达到室温后再进行检测。
为取得最佳测定效果，在用单管的化学发光仪测定时，每个样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制一致；使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时，宜先把样品全部加好，然后统一加入 Renilla Luciferase Solution。
检测时需使用全黑色或白色的 96孔板，防止相邻孔的干扰。
海肾荧光素酶催化的生物发光的最强波长为 480 nm。