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活动截止时间：2024年1月31日
亚科因生物研发的 Caspase 3/7 和 PI 凋亡双染试剂盒 (Caspase 3/7 and PI Apoptosis Double Staining Kit) 是一种基于荧光底物裂解与膜通透性差异的双重标记体系，可在单管反应中同步检测细胞内 Caspase 3/7 活性与细胞膜完整性，从而快速、直观地区分早期凋亡、晚期凋亡及坏死细胞。
Caspase 3/7 是细胞凋亡执行阶段的关键效应蛋白酶，其特异性识别并切割天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酸（DEVD）序列。本试剂盒中的 Caspase 3/7 Green 为 DEVD 序列偶联的 DNA 荧光染料前体，本身无荧光且带负电荷，可自由穿透活细胞膜；当细胞进入凋亡程序，活化的 Caspase 3/7 切割底物后释放出高亲和力 DNA 染料，与核 DNA 结合后产生绿色荧光（Ex/Em ≈ 488 nm/525 nm，流式 FITC 通道检测）。
与此同时，碘化丙啶（PI） 作为膜不透性染料，仅在晚期凋亡或坏死细胞膜完整性丧失时进入细胞，与双链 DNA 结合后发出红色荧光（Ex/Em ≈ 535 nm/617 nm）。通过绿色与红色荧光信号的独立采集，可在单一样本中区分：
本试剂盒专为细胞水平凋亡研究设计，可用于：
| 中文名称 | Caspase 3/7和PI凋亡双染试剂盒 |
| 英文名称 | Caspase 3/7 and PI Apoptosis Double Staining Kit |
| 产品货号 | KTA3029 |
| 样本类型 | 细胞 |
| 试剂盒组分 | • Caspase 3/7 Green • PI |
| 保存建议 | 建议收到货后避光保存于-20°C，有效期为12个月。 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
| 自备资源类型 | 资源名称 | 备注 |
|---|---|---|
| 仪器 | 流式细胞仪/荧光显微镜 | FITC通道和 PE 通道 |
| 耗材 | 24孔细胞板 | 荧光显微镜检测 |
| 试剂 | 磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4） | 清洗和染色 |
| 其他 | 离心机、移液枪 |
| 试剂盒组分 | 规格 | 储存要求 |
|---|---|---|
| Caspase 3/7 Green | 20 µL (20 T) / 100 µL (100 T) | -20℃，避光保存 |
| PI | 40 µL (20 T) / 200 µL (100 T) | -20℃，避光保存 |
| 试剂名称 | 试剂准备 | 注意事项 |
|---|---|---|
| Caspase 3/7 Green | 即用型 | 避光保存；稀释后不可保存 |
| PI | 即用型 | 避光保存；稀释后不可保存 |
实验设计
选择合适的方法诱导细胞凋亡，同时设置无诱导的对照组。流式检测时非常推荐做阳性单染管及阴性对照，检测时调整合适电压，对后期分群非常有帮助。
1. 流式细胞仪分析
注意：贴壁细胞使用胰酶消化后离心收集细胞，如果消化时间过长，易造成细胞膜结构损伤而出现细胞坏死的假阳性，所以需控制胰酶消化时间（推荐使用温和消化液）。
注意：PI的用量可以根据实际情况进行调整，同时非常推荐做阳性单染管。
2. 荧光显微镜分析
A. 对于悬浮细胞：
B. 对于贴壁细胞，按照以下操作步骤（以 24孔板为例）：
注意：荧光显微镜拍照时绿色荧光容易猝灭，推荐染色时染料浓度较高按 1:200稀释,另拍照时先用白光找到视野后再用荧光立即拍照保存。
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