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Caspase 3/7和DAPI凋亡双染试剂盒

Caspase 3/7 and DAPI Apoptosis Double Staining Kit

产品货号
KTA3028

产品特点:

  • 一步法双染:单管反应即可同步检测Caspase 3/7活性与核完整性,减少样本消耗与操作误差
  • 光谱兼容:绿色(FITC通道)与蓝色(DAPI通道)荧光完全分离,适配主流流式细胞仪与荧光显微镜
  • 高特异性:DEVD底物仅被活化的Caspase 3/7切割,DAPI仅标记膜破损细胞,降低假阳性
  • 即用型组分:包含Caspase 3/7 Green与DAPI,无需额外配制,开盖即可使用
  • 稳定保存:-20 °C避光保存有效期12个月,冰袋运输保障活性
  • 选择规格

    20T
    ¥598
    现货(次日发货)
    100T
    ¥2198
    现货(次日发货)
    🎉 限时优惠

    买2送1活动进行中!购买任意2个规格产品,免费赠送100μL装一支。

    活动截止时间:2024年1月31日

    产品概述

    亚科因生物推出的Caspase 3/7和DAPI凋亡双染试剂盒(Caspase 3/7 and DAPI Apoptosis Double Staining Kit,货号:KTA3028)是一款专为细胞凋亡与坏死状态同步评估设计的核心细胞分析工具。通过一次染色即可在单细胞水平同时捕获Caspase 3/7活性核完整性信息,帮助研究者快速区分早期凋亡、晚期凋亡及坏死细胞。

    Caspase 3/7是细胞凋亡执行阶段的关键效应蛋白酶,其活性升高被视为凋亡启动的重要标志。本试剂盒中的Caspase 3/7 Green以DEVD序列偶联高亲和力DNA荧光染料,本身无荧光且带负电荷,无法与DNA结合;当细胞进入凋亡程序,活化的Caspase 3/7会切割底物,释放出可穿透核膜的绿色荧光染料(Ex/Em 488 nm/525 nm,FITC通道检测),从而标记凋亡细胞。

    与此同时,DAPI作为经典的蓝色核染料,仅在细胞膜完整性丧失的晚期凋亡或坏死细胞中进入胞核,与双链DNA结合后产生蓝色荧光(Ex/Em 358 nm/461 nm)。两种染料光谱分离良好,可在同一视野下实现凋亡活性核损伤双通道共定位

    应用领域

    适用于贴壁或悬浮细胞的凋亡机制研究、药物毒性评价、肿瘤治疗响应监测及细胞质量控制等场景,可广泛应用于肿瘤学、免疫学、神经科学及药物开发等细胞水平实验。

    Caspase 3/7和DAPI凋亡双染试剂盒

    产品参数

    中文名称 Caspase 3/7和DAPI凋亡双染试剂盒
    英文名称 Caspase 3/7 and DAPI Apoptosis Double Staining Kit
    产品货号 KTA3028
    样本类型 细胞
    试剂盒组分 • Caspase 3/7 Green
    • DAPI
    保存建议 建议收到货后避光保存于-20°C,有效期为12个月。
    运输条件 冰袋运输(蓝冰)
    警告 本文列出的产品仅供研究使用,不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用,不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为,我们不承担任何责任。

    使用说明

    自备仪器与试剂

    自备资源类型 资源名称 备注
    仪器 流式细胞仪/荧光显微镜 流式中 DAPI需要 405激光器激发检测
    耗材 24孔细胞板 荧光显微镜检测
    试剂 磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4) 清洗和染色
    其他 离心机、移液枪

    试剂盒组分

    试剂盒组分 规格 储存要求
    Caspase 3/7 Green 20 µL (20 T)
    100 µL (100 T)
    -20℃,避光保存
    DAPI 50 µL (20 T)
    250 µL (100 T)
    -20℃,避光保存

    注意事项

     本产品仅供科学研究使用,不适用于临床诊断。

    实验流程

    试剂准备

    试剂名称 试剂准备 注意事项
    Caspase 3/7 Green 即用型 避光保存;稀释后不可保存
    DAPI 即用型 避光保存;稀释后不可保存

    实验步骤

    实验设计

    选择合适的方法诱导细胞凋亡,同时设置无诱导的对照组。流式检测时非常推荐做阳性单染管及阴性对照,检测时调整合适电压,对后期分群非常有帮助。

    1. 流式细胞仪分析

    1. 收集细胞,4℃,300 g离心 5 min收集 1-5×105细胞,用冰预冷的 PBS洗涤 2次。
    2. 注意:贴壁细胞使用胰酶消化后离心收集细胞,如果消化时间过长,易造成细胞膜结构损伤而出现细胞坏死的假阳性,所以需控制胰酶消化时间(推荐使用温和消化液)。

    3. 用 500 µL PBS重悬细胞。
    4. 每 500 µL细胞悬液中加入 1 µL Caspase 3/7 Green染色液和 1 µL DAPI,轻柔混匀。
    5. 注意:DAPI的用量可以根据检测仪器进行调整,同时非常推荐做阳性单染管。

    6. 室温避光孵育 20-30 min。
    7. 孵育结束后置于冰上。染色后 30 min内用流式细胞仪检测。

    2. 荧光显微镜分析

    A. 对于悬浮细胞:

    1. 按照步骤流式细胞分析步骤制样。
    2. 将染色好的细胞悬浮置于玻片上,用盖玻片盖住细胞。尽快使用适当的滤镜通过荧光显微镜分析细胞。

    B. 对于贴壁细胞,按照以下操作步骤(以 24孔板为例):

    1. 细胞接种于爬片或腔室载玻片上,培养细胞。
    2. 通过所需方法诱导细胞凋亡,同时设置无诱导的对照组。
    3. 除去培养基,用 PBS 洗涤细胞 2次。
    4. 准备工作液:每 200 µL PBS添加 1 µL Caspase 3/7 Green和 0.5 µL DAPI,轻柔混匀。
    5. 在每孔中加入 200 µL配好的工作液,室温避光孵育 30 min。
    6. 使用合适的滤光片在荧光显微镜下分析细胞。

    注意:荧光显微镜拍照时绿色荧光容易猝灭,推荐染色时染料浓度较高按 1:200稀释,另拍照时先用白光找到视野后再用荧光立即拍照保存。

    常见问题

    暂无相关常见问题。如有疑问,请联系我们的技术支持团队。

    文献引用

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