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Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光)
Caspase 3/7 Activity Apoptosis Assay Kit (Green Fluorescence)
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活动截止时间:2024年1月31日
                            
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亚科因生物研发的 Caspase 3/7 活性细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光) (Caspase 3/7 Activity Apoptosis Assay Kit, Green Fluorescence) 是一款专为活细胞设计的荧光底物型试剂盒,通过检测 Caspase 3/7 的活化水平,快速、直观地评估细胞凋亡进程。试剂盒采用可穿透细胞膜的 DEVD 偶联荧光探针,在 Caspase 3/7 激活后被剪切并释放高亲和力 DNA 染料,产生绿色荧光信号,适用于流式细胞仪、荧光酶标仪及荧光显微镜的多平台检测。
Caspase 3 (又称 CPP32/Apopain) 是细胞凋亡执行阶段的关键效应蛋白酶,其活性升高标志着凋亡程序的启动。本试剂盒利用 Caspase 3/7 对底物序列 Asp-Glu-Val-Asp (DEVD) 的高度特异性,将 DEVD 偶联至一种可穿透细胞膜的 DNA 荧光染料。该探针本身无荧光且因电荷排斥不与 DNA 结合;当细胞进入凋亡,活化的 Caspase 3/7 剪切探针,释放出 DNA 染料并与其结合,产生Ex/Em 488 nm/525 nm 的强绿色荧光。荧光强度与 Caspase 3/7 活性成正比,从而实现对细胞凋亡水平的定量或半定量分析。
本试剂盒适用于细胞水平的凋亡研究,可广泛应用于药物筛选、肿瘤学研究、免疫学实验、毒理学评估及细胞治疗质量控制等场景,帮助科研工作者快速判断细胞凋亡状态并优化实验条件。
                                    | 中文名称 | Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光) | 
| 英文名称 | Caspase 3/7 Activity Apoptosis Assay Kit (Green Fluorescence) | 
| 产品货号 | KTA3027 | 
| 样本类型 | 细胞 | 
| 试剂盒组分 | • Caspase 3/7 Green • Z-VAD (OMe)-FMK  | 
                                        
| 保存建议 | 建议收到货后避光保存于-20°C,有效期为12个月。 | 
| 运输条件 | 冰袋运输(蓝冰) | 
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用,不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用,不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为,我们不承担任何责任。 | 
| 自备资源类型 | 资源名称 | 备注 | 
|---|---|---|
| 仪器 | 流式细胞仪/荧光显微镜/荧光酶标仪 | FITC通道(Ex/Em: 488nm/525 nm) | 
| 耗材 | 24孔细胞板;96孔全黑板 | 荧光显微镜检测;荧光酶标仪检测 | 
| 试剂 | 磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4) | 清洗和染色 | 
| 其他 | 离心机、移液枪 | 
| 试剂盒组分 | 规格 | 储存要求 | 
|---|---|---|
| Caspase 3/7 Green | 50 µL (50 T) 100 µL (100 T)  |     -20℃,避光保存 | 
| Z-VAD (OMe)-FMK | 10 µL (50 T) 20 µL (100 T)  |     -20℃,避光保存 | 
本产品仅供科学研究使用,不适用于临床诊断。
| 试剂名称 | 试剂准备 | 注意事项 | 
|---|---|---|
| Caspase 3/7 Green | 即用型 | 避光保存;稀释后不可保存 | 
| Z-VAD (OMe)-FMK | 即用型;10mM | 避光保存;稀释后不可保存 | 
实验设计
选择合适的方法诱导细胞凋亡,同时设置无诱导的对照组。(本试剂盒中提供一定量的抑制剂 Z-VAD(OMe)-FMK,可以根据需要在诱导的同时增加抑制剂组。尽管 Z-VAD (OMe)-FMK是一种广泛认可的 Caspase 抑制剂,但在具体实验过程中不同的凋亡诱导剂及不同细胞的凋亡, Z-VAD (OMe)-FMK 对其抑制效果不尽相同,需要研究人员根据实验目的自行摸索药物浓度和实验方法。本试剂在开发过程中用喜树碱和 Raptinal对 Hela和 Jurkat细胞诱导凋亡并加抑制剂都有明显的抑制作用。另外除了 Z-VAD (OMe)-FMK,也可选择其它的 Caspase抑制剂比如 Ac-DEVD-CHO,需要根据实验目的进行筛选。)
A. 流式细胞仪分析
1. 流式细胞仪分析和酶标仪检测
注意:贴壁细胞使用胰酶消化后离心收集细胞,如果消化时间过长,易造成细胞膜结构损伤而出现细胞坏死的假阳性,所以需控制胰酶消化时间(推荐使用温和消化液)。
2. 荧光显微镜分析
A. 对于悬浮细胞:
B. 对于贴壁细胞,按照以下操作步骤(以 24孔板为例):
注意:荧光显微镜拍照时荧光容易猝灭,推荐染色时染料浓度较高按 1:200稀释,另拍照时先用白光找到视野后再用荧光立即拍照保存。
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