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Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光)

Caspase 3/7 Activity Apoptosis Assay Kit (Green Fluorescence)

产品货号
KTA3027

产品特点:

  • 细胞膜可穿透探针,无需固定或破膜,实现活细胞实时检测
  • DEVD 序列特异性高,背景低,信号清晰
  • 兼容流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光显微镜三大平台,实验设计灵活
  • 绿色荧光信号与 FITC 通道匹配,易于与现有实验体系整合
  • 提供广谱 Caspase 抑制剂 Z-VAD(OMe)-FMK,便于设置阴性对照
  • 选择规格

    50T
    ¥1198
    现货(次日发货)
    100T
    ¥2198
    现货(次日发货)
    🎉 限时优惠

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    活动截止时间:2024年1月31日

    产品概述

    亚科因生物研发的 Caspase 3/7 活性细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光) (Caspase 3/7 Activity Apoptosis Assay Kit, Green Fluorescence) 是一款专为活细胞设计的荧光底物型试剂盒,通过检测 Caspase 3/7 的活化水平,快速、直观地评估细胞凋亡进程。试剂盒采用可穿透细胞膜的 DEVD 偶联荧光探针,在 Caspase 3/7 激活后被剪切并释放高亲和力 DNA 染料,产生绿色荧光信号,适用于流式细胞仪、荧光酶标仪及荧光显微镜的多平台检测。

    Caspase 3 (又称 CPP32/Apopain) 是细胞凋亡执行阶段的关键效应蛋白酶,其活性升高标志着凋亡程序的启动。本试剂盒利用 Caspase 3/7 对底物序列 Asp-Glu-Val-Asp (DEVD) 的高度特异性,将 DEVD 偶联至一种可穿透细胞膜的 DNA 荧光染料。该探针本身无荧光且因电荷排斥不与 DNA 结合;当细胞进入凋亡,活化的 Caspase 3/7 剪切探针,释放出 DNA 染料并与其结合,产生Ex/Em 488 nm/525 nm 的强绿色荧光。荧光强度与 Caspase 3/7 活性成正比,从而实现对细胞凋亡水平的定量或半定量分析。

    应用领域

    本试剂盒适用于细胞水平的凋亡研究,可广泛应用于药物筛选、肿瘤学研究、免疫学实验、毒理学评估及细胞治疗质量控制等场景,帮助科研工作者快速判断细胞凋亡状态并优化实验条件。

    Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光)

    产品参数

    中文名称 Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒(绿色荧光)
    英文名称 Caspase 3/7 Activity Apoptosis Assay Kit (Green Fluorescence)
    产品货号 KTA3027
    样本类型 细胞
    试剂盒组分 • Caspase 3/7 Green
    • Z-VAD (OMe)-FMK
    保存建议 建议收到货后避光保存于-20°C,有效期为12个月。
    运输条件 冰袋运输(蓝冰)
    警告 本文列出的产品仅供研究使用,不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用,不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为,我们不承担任何责任。

    使用说明

    自备仪器与试剂

    自备资源类型 资源名称 备注
    仪器 流式细胞仪/荧光显微镜/荧光酶标仪 FITC通道(Ex/Em: 488nm/525 nm)
    耗材 24孔细胞板;96孔全黑板 荧光显微镜检测;荧光酶标仪检测
    试剂 磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4) 清洗和染色
    其他 离心机、移液枪

    试剂盒组分

    试剂盒组分 规格 储存要求
    Caspase 3/7 Green 50 µL (50 T)
    100 µL (100 T)
    -20℃,避光保存
    Z-VAD (OMe)-FMK 10 µL (50 T)
    20 µL (100 T)
    -20℃,避光保存

    注意事项

    本产品仅供科学研究使用,不适用于临床诊断。

    实验流程

    试剂准备

    试剂名称 试剂准备 注意事项
    Caspase 3/7 Green 即用型 避光保存;稀释后不可保存
    Z-VAD (OMe)-FMK 即用型;10mM 避光保存;稀释后不可保存

    实验步骤

    实验设计

    选择合适的方法诱导细胞凋亡,同时设置无诱导的对照组。(本试剂盒中提供一定量的抑制剂 Z-VAD(OMe)-FMK,可以根据需要在诱导的同时增加抑制剂组。尽管 Z-VAD (OMe)-FMK是一种广泛认可的 Caspase 抑制剂,但在具体实验过程中不同的凋亡诱导剂及不同细胞的凋亡, Z-VAD (OMe)-FMK 对其抑制效果不尽相同,需要研究人员根据实验目的自行摸索药物浓度和实验方法。本试剂在开发过程中用喜树碱和 Raptinal对 Hela和 Jurkat细胞诱导凋亡并加抑制剂都有明显的抑制作用。另外除了 Z-VAD (OMe)-FMK,也可选择其它的 Caspase抑制剂比如 Ac-DEVD-CHO,需要根据实验目的进行筛选。)

    A. 流式细胞仪分析

    1. 流式细胞仪分析和酶标仪检测

    1. 收集细胞,4℃,300 g离心 5min收集 1-5×105细胞,用冰预冷的 PBS洗涤 2次。
    2. 注意:贴壁细胞使用胰酶消化后离心收集细胞,如果消化时间过长,易造成细胞膜结构损伤而出现细胞坏死的假阳性,所以需控制胰酶消化时间(推荐使用温和消化液)。

    3. 用 500 µL PBS 重悬细胞。
    4. 每 500 µL细胞悬液中加入 1 µL Caspase 3/7 Green染色液,轻柔混匀。
    5. 室温避光孵育 20-30min。
    6. 孵育结束后置于冰上。染色后 30 min内用流式细胞仪(FITC 通道)检测或接种到 96孔全黑板用荧光酶标仪(Ex /Em : 488 nm /525 nm)进行检测。

    2. 荧光显微镜分析

    A. 对于悬浮细胞:

    1. 按照步骤流式细胞分析步骤制样。
    2. 将染色好的细胞悬浮置于玻片上,用盖玻片盖住细胞。尽快使用适当的滤镜通过荧光显微镜分析细胞。

    B. 对于贴壁细胞,按照以下操作步骤(以 24孔板为例):

    1. 细胞接种于爬片或腔室载玻片上,培养细胞。
    2. 通过所需方法诱导细胞凋亡,同时设置无诱导的对照组。
    3. 除去培养基,用 PBS 洗涤细胞 2次。
    4. 准备工作液:每 200 µL PBS添加 1 µL Caspase 3/7 Green,轻柔混匀。
    5. 在每孔中加入 200 µL配好的工作液,室温避光孵育 30 min。
    6. 使用合适的滤光片在荧光显微镜下分析细胞。

    注意:荧光显微镜拍照时荧光容易猝灭,推荐染色时染料浓度较高按 1:200稀释,另拍照时先用白光找到视野后再用荧光立即拍照保存。

    常见问题

    暂无相关常见问题。如有疑问,请联系我们的技术支持团队。

    文献引用

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