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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶（α-L-Af）活性检测试剂盒（微量法）是一款专为细胞代谢研究设计的比色法试剂盒，可在微量体系内快速测定植物组织、细菌、真菌及液体样本中α-L-Af 的活性，为细胞壁多糖降解与果实成熟机制研究提供可靠数据。
背景知识扩展
α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶（α-L-Arabinofuranosidase, α-L-Af）是一类能够特异性水解非还原末端 α-L-阿拉伯呋喃糖残基的糖苷水解酶。该酶通过切断细胞壁中阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯甘露聚糖等中性糖链，促进果胶增溶与降解，从而加速细胞壁松弛与组织软化。在果实成熟过程中，α-L-Af 活性升高与阿拉伯糖含量下降密切相关，因此该酶已成为研究果实成熟软化机制的重要生化指标。CheKine™ α-L-Af 活性检测试剂盒利用对硝基酚阿拉伯呋喃糖苷为底物，α-L-Af 催化底物生成对硝基苯酚，后者在 400 nm 处具有最大吸收峰；通过监测 400 nm 吸光值升高速率，即可定量计算样本中 α-L-Af 的活性。
应用领域
本试剂盒适用于细胞代谢、植物生理、食品科学及微生物学等研究领域，可用于解析果实成熟软化、植物逆境响应、微生物细胞壁重构及工业酶制剂活性评估等实验场景。
| 中文名称 | α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(α-L-Af)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro α-L-Arabinofuranosidase (α-L-Af) Activity Assay kit |
| 产品货号 | KTB4053 |
| 检测类型 | 水土检测 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 样本类型 | 植物组织、细菌、真菌、液体 |
| 试剂盒组分 | • Extraction Buffer • Reagent I •Reagent Ⅱ •Standard |
| 分子 | α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶（α-L-Af） |
| 检测指标 | α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶（α-L-Af） |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | -20℃，避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。
Working Reagent I：临用前配制；每瓶加入 1.5 mL去离子水充分溶解待用。用不完的试剂-20℃避光分装保存 2周，避免反复冻融。
Reagent II：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。
Standard：即用型；5 μmol/mL对硝基苯酚 Standard；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。使用 5 μmol/mL对硝基苯酚 Standard，按照下表所示，进一步稀释标准品：
| 序号 | Standard体积（μL） | Extraction Buffer体积（μL） | 浓度（nmol/mL） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 100 μL of 5 μmol/mL Standard | 900 | 500 |
| Std.2 | 200 μL of Std.1 (500 μmol/mL) | 200 | 250 |
| Std.3 | 200 μL of Std.2 (250 μmol/mL) | 200 | 125 |
| Std.4 | 200 μL of Std.3 (125 μmol/mL) | 200 | 62.5 |
| Std.5 | 200 μL of Std.4 (62.5 μmol/mL) | 200 | 31.25 |
| Std.6 | 200 μL of Std.5 (31.25 μmol/mL) | 200 | 15.625 |
| Blank | 0 | 400 | 0 |
1. 植物组织：称取约 0.1 g样本，加入 1 mL Extraction Buffer，用匀浆器或研钵冰浴匀浆，15,000 g，4℃离心 10 min，取上清液待测。
2. 细菌或真菌：收集 500万细菌或真菌到离心管内，用冷 PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴超声波破碎细胞 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次），15,000 g，4℃离心 10 min，取上清液待测。
3. 液体：直接检测。
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 400 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在 96孔板或微量玻璃比色皿依次进行）：
| 试剂 | 测定孔（μL） | 对照孔（μL） | 标准孔（μL） | 空白孔（μL） |
|---|---|---|---|---|
| Working ReagentⅠ | 25 | 0 | 0 | 0 |
| 去离子水 | 0 | 25 | 25 | 25 |
| Extraction Buffer | 0 | 0 | 0 | 45 |
| Standard | 0 | 0 | 45 | 0 |
| 样本 | 45 | 45 | 0 | 0 |
迅速混匀，37℃孵育 30 min
| 试剂 | 测定孔（μL） | 对照孔（μL） | 标准孔（μL） | 空白孔（μL） |
|---|---|---|---|---|
| Reagent II | 130 | 130 | 130 | 130 |
3. 混匀，5 min内记录 400 nm处吸光值，空白孔记为 A 空白，标准孔记为 A 标准，对照孔记为 A 对照，测定孔记为 A 测定。计算ΔA 测定=A 测定-A 对照，ΔA 标准=A 标准-A 空白。
1. 标准曲线的绘制
以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA 测定代入方程得到 x (nmol/mL)。
2. α-L-Af活性的计算：
（1）按蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg组织蛋白每小时产生 1 nmol对硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
α-L-Af (U/mg 蛋白)=(V 样×x)÷(V 样×Cpr)÷T=2x÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g组织每小时产生 1 nmol对硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
α-L-Af (U/g 鲜重)=(V 样×x)÷(W×V 样÷V 样总)÷T=2x÷W
（3）按照细菌或真菌数量计算
单位的定义：每 104细菌或真菌每小时产生 1 nmol对硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
α-L-Af (U/104)=(V 样×x)÷(n×V 样÷V 样总)÷T=2x÷n
（4）按样本体积计算：
单位的定义：每 mL液体每小时产生 1 nmol对硝基苯酚定义为一个酶活力单位。
α-L-Af (U/mL)=(V 样×x)÷V 样÷T=2x
V 样：加入反应体系中样本体积，0.045 mL；V 样总：加入 Extraction Buffer体积，1 mL；T：反应时间：30 min=0.5 h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；n：细菌或真菌总数，以万计。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
请等待最新文献信息更新。
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