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总多糖含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™

CheKine™ Micro Total Polysaccharide Content Detection Kit

产品货号
KTB1351

产品特点:

  • 样本类型覆盖全面,已验证适用于多种动植物组织
  • 微量体系设计,节省珍贵样本与试剂
  • 操作步骤精简,水提醇沉+苯酚-硫酸法一步显色,实验流程清晰
  • 选择规格

    48 T/48 S
    ¥358
    现货(次日发货)
    96 T/96 S
    ¥598
    现货(次日发货)
    🎉 限时优惠

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    活动截止时间:2024年1月31日

    产品概述

    CheKine™ 总多糖含量检测试剂盒(微量法)(Micro Total Polysaccharide Content Detection Kit) 是一款基于苯酚-硫酸显色原理的比色法试剂盒,可在微量体系内快速、稳定地测定动植物组织样本中的总多糖含量,为细胞代谢研究提供可靠数据。

    多糖是生物体内由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的高分子多聚物,广泛分布于植物、动物及微生物中,是维持生命活动正常运转的重要生物大分子。CheKine™ 总多糖含量检测试剂盒(微量法)采用经典的水提醇沉法提取总多糖,随后利用苯酚-硫酸法显色:浓硫酸使多糖水解为单糖并进一步脱水生成糠醛衍生物,再与苯酚缩合形成橙黄色化合物,在 490 nm 处具有特征吸收峰,其吸光度与总多糖浓度呈正相关,从而实现对微量样本的精确定量。

    应用领域

    该试剂盒专为细胞代谢研究设计,可广泛应用于植物生理学、动物营养学及细胞生物学等方向,用于评估细胞或组织中多糖代谢水平、碳源分配及能量储存状态。

    总多糖含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™

    产品参数

    中文名称 总多糖含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™
    英文名称 CheKine™ Micro Total Polysaccharide Content Detection Kit
    产品货号 KTB1351
    检测方法 比色法
    样本类型 动植物组织
    试剂盒组分 •Reagent I
    •Standard
    分子 总多糖
    检测指标 总多糖
    注意事项 •推荐使用新鲜样本,如果不立即进行实验,样本可在-80℃保存数周。测定时,应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时,需在4 h内完成样品解冻。
    •实验开始前,确保所有的组分及设备处于合适的温度。
    保存建议 4℃,避光保存 6 个月
    运输条件 冰袋运输(蓝冰)
    警告 本文列出的产品仅供研究使用,不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用,不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为,我们不承担任何责任。

    使用说明

    注意:正式检测前,建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。

    自备耗材

    • 酶标仪或可见光分光光度计(能测 490 nm处的吸光度)
    • 96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头、1.5 mL离心管
    • 水浴锅、离心机
    • 去离子水、无水乙醇、浓硫酸
    • 匀浆器或研钵

    试剂准备

    Reagent I:即用型;使用前,平衡到室温。4℃保存。

    Reagent II:无水乙醇。(自备)

    Reagent III:浓硫酸。(自备)

    注意:Reagent I 有毒,Reagent III 有腐蚀性,建议在通风橱进行实验。

    Standard:临用前配制;加入 1 mL去离子水溶解,配制成 10 mg/mL葡萄糖溶液备用,使用前 Standard充分震荡混匀;4℃保存2周。

    标准品制备

    使用 10 mg/mL葡萄糖标准液,按照下表所示,进一步稀释成标准品:

    序号Standard体积(μL)去离子水体积(μL)浓度(mg/mL)
    Std.115 μL 10 mg/mL Standard5850.25
    Std.2300 μL of Std.1 (0.25 mg/mL)3000.125
    Std.3300 μL of Std.2 (0.125 mg/mL)3000.0625
    Std.4300 μL of Std.3 (0.0625 mg/mL)3000.03125
    Std.5300 μL of Std.4 (0.03125 mg/mL)3000.015625
    Std.6300 μL of Std.5 (0.015625 mg/mL)3000.0078125

    注意:每次实验,请使用新配制的标准品;配制好的标准品需要在 4 h之内使用。

    样本制备

    注意:建议使用新鲜样本。如果不立即使用,可将样品在-80℃下保存一个月。测定时,应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时,需在 4 h内完成样品解冻。

    组织:样本烘干粉碎,称取约 0.05 g样本,加入 1 mL去离子水,充分匀浆。100℃水浴提取 2 h(必须盖紧盖子防止水分流失),冷却后 10,000 g离心 10 min,取上清。吸取 0.2 mL上清,慢慢加入 0.8 mL Reagent II,混匀后 4℃静置过夜,10,000 g离心 10 min,弃上清,沉淀中加入 1 mL去离子水,充分混匀溶解沉淀后待测。

    实验步骤

    1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上,调节波长到 490 nm,可见光分光光度计用去离子水调零。
    2. 操作表(下述操作在 1.5 mL离心管中操作):
    试剂标准孔(μL)测定孔(μL)
    样本0200
    Standard2000
    ReagentⅠ100100
    Reagent III500500

    3. 混匀后 90℃孵育 20 min,流水冷却,取 200 µL于 96孔板或微量玻璃比色皿,记录 490 nm处吸光值,标准孔记为 A 标准,测定孔记为 A 测定。

    注意:标准管只需做 1-2次。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果 A 测定小于 0.2可适当加大样本量。如果 A 测定大于 2,样本可用去离子水进一步稀释,计算结果乘以稀释倍数,或减少提取用样本量。

    结果计算

    注意:我们为您提供的计算公式,包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

    1. 标准曲线的绘制:以标准溶液浓度为 x轴,A 标准为 y轴,绘制标准曲线,得到标准方程,将 A 测定带入方程得到 x (mg/mL)。
    2. 总多糖含量的计算:按样本干重计算:

    总多糖(μg/g 干重)=x×V1÷V2×V3÷W×1,000=5,000x÷w

    V1:醇沉后重新溶解后的体积,1 mL;V2:进行醇沉的体积,0.2 mL;V3,提取时加入水的体积,1 mL;W:样本质量,g;1,000,换算系数,1 mg=1,000 μg。

    常见问题

    Q: 检测菌藻共生系统的胞外聚合物,怎么处理样本样本?

    A: 液体样本:取 0.2mL 样本,慢慢加入 0.8mL 无水乙醇,混匀后 4℃静置过夜,10000g 离心 10min,弃上清,沉淀中加入 1mL 水,充分混匀溶解沉淀后待测。

    Q: 该类试剂盒一般什么单位用的多?

    A: 动物研究,植物研究,微生物研究等相关单位都应用比较多。

    Q: 该类试剂盒做过哪些实验材料的验证?

    A: 生化试剂盒已充分验证,适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标,尤其是酶活性测定指标,我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒,并在试剂盒名称和代号上做了明确区分,请用户仔细核对,选择合适的试剂盒类型。如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。

    Q: 该产品线检测可使用分光光度计替代酶标仪吗?

    A: 不建议用,分光光度计每次检测的样本个数不超过4个,无法做到数据检测的同步。

    Q: 该类试剂盒使用量应如何计算?

    A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量,如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。

    Q: 该系列试剂盒可以检测蓝藻等微生物样本吗?

    A: 可以,用超声进行破碎微生物细胞,再进行细胞上清的检测,如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。

    文献引用

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