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总多糖含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™
CheKine™ Micro Total Polysaccharide Content Detection Kit
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活动截止时间:2024年1月31日
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CheKine™ 总多糖含量检测试剂盒(微量法)(Micro Total Polysaccharide Content Detection Kit) 是一款基于苯酚-硫酸显色原理的比色法试剂盒,可在微量体系内快速、稳定地测定动植物组织样本中的总多糖含量,为细胞代谢研究提供可靠数据。
多糖是生物体内由醛糖或酮糖通过糖苷键连接而成的高分子多聚物,广泛分布于植物、动物及微生物中,是维持生命活动正常运转的重要生物大分子。CheKine™ 总多糖含量检测试剂盒(微量法)采用经典的水提醇沉法提取总多糖,随后利用苯酚-硫酸法显色:浓硫酸使多糖水解为单糖并进一步脱水生成糠醛衍生物,再与苯酚缩合形成橙黄色化合物,在 490 nm 处具有特征吸收峰,其吸光度与总多糖浓度呈正相关,从而实现对微量样本的精确定量。
该试剂盒专为细胞代谢研究设计,可广泛应用于植物生理学、动物营养学及细胞生物学等方向,用于评估细胞或组织中多糖代谢水平、碳源分配及能量储存状态。
| 中文名称 | 总多糖含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Total Polysaccharide Content Detection Kit |
| 产品货号 | KTB1351 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 样本类型 | 动植物组织 |
| 试剂盒组分 | •Reagent I •Standard |
| 分子 | 总多糖 |
| 检测指标 | 总多糖 |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本,如果不立即进行实验,样本可在-80℃保存数周。测定时,应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时,需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前,确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | 4℃,避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输(蓝冰) |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用,不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用,不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为,我们不承担任何责任。 |
注意:正式检测前,建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
Reagent I:即用型;使用前,平衡到室温。4℃保存。
Reagent II:无水乙醇。(自备)
Reagent III:浓硫酸。(自备)
注意:Reagent I 有毒,Reagent III 有腐蚀性,建议在通风橱进行实验。
Standard:临用前配制;加入 1 mL去离子水溶解,配制成 10 mg/mL葡萄糖溶液备用,使用前 Standard充分震荡混匀;4℃保存2周。
使用 10 mg/mL葡萄糖标准液,按照下表所示,进一步稀释成标准品:
| 序号 | Standard体积(μL) | 去离子水体积(μL) | 浓度(mg/mL) |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 15 μL 10 mg/mL Standard | 585 | 0.25 |
| Std.2 | 300 μL of Std.1 (0.25 mg/mL) | 300 | 0.125 |
| Std.3 | 300 μL of Std.2 (0.125 mg/mL) | 300 | 0.0625 |
| Std.4 | 300 μL of Std.3 (0.0625 mg/mL) | 300 | 0.03125 |
| Std.5 | 300 μL of Std.4 (0.03125 mg/mL) | 300 | 0.015625 |
| Std.6 | 300 μL of Std.5 (0.015625 mg/mL) | 300 | 0.0078125 |
注意:每次实验,请使用新配制的标准品;配制好的标准品需要在 4 h之内使用。
注意:建议使用新鲜样本。如果不立即使用,可将样品在-80℃下保存一个月。测定时,应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时,需在 4 h内完成样品解冻。
组织:样本烘干粉碎,称取约 0.05 g样本,加入 1 mL去离子水,充分匀浆。100℃水浴提取 2 h(必须盖紧盖子防止水分流失),冷却后 10,000 g离心 10 min,取上清。吸取 0.2 mL上清,慢慢加入 0.8 mL Reagent II,混匀后 4℃静置过夜,10,000 g离心 10 min,弃上清,沉淀中加入 1 mL去离子水,充分混匀溶解沉淀后待测。
| 试剂 | 标准孔(μL) | 测定孔(μL) |
|---|---|---|
| 样本 | 0 | 200 |
| Standard | 200 | 0 |
| ReagentⅠ | 100 | 100 |
| Reagent III | 500 | 500 |
3. 混匀后 90℃孵育 20 min,流水冷却,取 200 µL于 96孔板或微量玻璃比色皿,记录 490 nm处吸光值,标准孔记为 A 标准,测定孔记为 A 测定。
注意:标准管只需做 1-2次。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果 A 测定小于 0.2可适当加大样本量。如果 A 测定大于 2,样本可用去离子水进一步稀释,计算结果乘以稀释倍数,或减少提取用样本量。
注意:我们为您提供的计算公式,包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
总多糖(μg/g 干重)=x×V1÷V2×V3÷W×1,000=5,000x÷w
V1:醇沉后重新溶解后的体积,1 mL;V2:进行醇沉的体积,0.2 mL;V3,提取时加入水的体积,1 mL;W:样本质量,g;1,000,换算系数,1 mg=1,000 μg。
A: 液体样本:取 0.2mL 样本,慢慢加入 0.8mL 无水乙醇,混匀后 4℃静置过夜,10000g 离心 10min,弃上清,沉淀中加入 1mL 水,充分混匀溶解沉淀后待测。
A: 动物研究,植物研究,微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证,适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标,尤其是酶活性测定指标,我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒,并在试剂盒名称和代号上做了明确区分,请用户仔细核对,选择合适的试剂盒类型。如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。
A: 不建议用,分光光度计每次检测的样本个数不超过4个,无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量,如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。
A: 可以,用超声进行破碎微生物细胞,再进行细胞上清的检测,如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。
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