乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒(二硝基苯肼比色法)-CheKine™

*请在实验前检查各组分的量。

*各组分在规格基础上额外提供 10%的量用于进行标准曲线制作或预实验。

自备仪器与试剂

注意事项

• 正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
• 对于组织样本及细胞样本等，可通过测定蛋白浓度来进行样本间结果均一化。推荐使用亚科因货号：KTD3001 的蛋白质定量试剂盒（BCA法）。
• 本试剂盒兼容分光光度计检测，请按照分光光度计检测要求按比例调节检测试剂配制量。如有疑问，可咨询本司技术人员（400-6800-830）。
• 建议实验者自行建立标准曲线以提高结果准确度。如未自行建立标准曲线，可参考结果展示部分的典型标准曲线公式进行结果计算。
• 生化检测试剂普遍具有刺激性、生物毒性等，为了您的安全和健康，请在实验全程做好生物安全防护，穿戴实验服、口罩、手套、头套等安全护具，在通风橱、生物安全柜中进行实验。
• 本产品仅供科学研究使用，不适用于临床诊断。

实验流程

试剂准备

试剂准备

标准品配制

按下表所示，用去离子水稀释 20 μmol/mL Standard，以去离子水作为空白。每次实验都要做一次标准品检测，制作标曲；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4小时内使用。

样本制备

注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1个月。

• 动植物组织：称取 0.1 g组织加入 1 mL Extraction Buffer将样本进行冰浴匀浆，4℃，8000 g离心 10 min，取上清置于冰上待测。
• 细胞（菌）：收集 5×10⁶个细胞或细菌，用预冷的 PBS清洗细胞或细菌，800 g离心 2 min，弃上清。加入 1 mL Extraction Buffer进行冰浴超声破碎。超声波破碎 1 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次），4℃，8000 g离心 10 min，取上清置于冰上待测。
• 血清（浆）等液体：直接检测。

05-3 实验步骤

1. 酶标仪准备：预热 30 min以上，调节波长到 450 nm。
2. 检测体系配制：在 96孔板中按照如下方式操作

混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）准确反应 15 min

混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）准确反应 15 min。每孔各取 100 µL反应液到新的 96孔板

结果计算

自动计算

为帮助您更轻松、准确地完成相关计算，我们特在官网提供了"在线计算器小工具"。您无需手动计算，只需在网页上输入数值，即可快速获得可靠结果。访问方式：官网[https://www.abbkine.cn] > 进入"技术中心"> 查找"在线计算器"工具。

手动计算

以下为您提供的推导过程计算公式和简洁计算公式，两者完全相等。

1. 数据处理

   计算ΔA 标准=A 标准-A 空白，ΔA 测定=A 测定-A 对照。

2. 标准曲线绘制

   以标准品浓度为 y轴，ΔA 标准为 x轴，绘制标准曲线。将ΔA 测定代入方程得到 y值（nmol/mL）。

3. 样本 LDH活性计算
   • 按样本质量计算

     活性单位定义：每克样本在反应体系中每分钟催化产生 1 nmol丙酮酸定义为一个酶活性单位。

     LDH (U/g)=y×V 样÷(V 样÷V 样总×W)÷T×n=0.0667y÷W×n

   • 按细胞或细菌数量计算:

     活性单位定义：每 10⁴细胞或细菌在反应体系中每分钟催化产生 1 nmol丙酮酸定义为一个酶活性单位。

     LDH (U/10⁴)=y×V 样÷(V 样÷V 样总×500)÷T×n=0.0667y÷500×n

   • 按液体体积计算

     活性单位定义：每 mL液体在反应体系中每分钟催化产生 1 nmol丙酮酸定义为一个酶活性单位。

     LDH (U/mL)=y×V 样÷V 样÷T×n=0.0667y×n

   • 按蛋白浓度数量计算

     活性单位定义：每 mg蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1 nmol丙酮酸定义为一个酶活性单位。

     LDH (U/mg prot)=y×V 样÷(V 样×Cpr)÷T×n=0.0667y÷Cpr×n

   V 样：加入反应体系中样本体积，0.01 mL；V 样总：加入 Extraction Buffer的体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，5×10⁶，以 10⁴为单位；n：样本稀释倍数；T：反应时间，15 min。