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活动截止时间：2024年1月31日
亚科因生物研发的通用型免疫（共）沉淀（IP/Co-IP）工具箱（磁珠/抗小鼠）（Universal IP/Co-IP Toolkit, Magnetic Beads/Anti-Mouse）是一套专为小鼠源抗体设计的完整实验解决方案，可在同一管内完成细胞裂解、抗体捕获、磁珠分离、洗脱与后续WB检测，帮助研究者快速获得高纯度、低背景的免疫沉淀产物。
免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）是一种将特异性抗体固定在磁珠等固相载体上，对目标抗原进行亲和富集的小型纯化技术。通过磁场即可实现快速分离，显著缩短实验时间并降低非特异吸附。本工具箱在此基础上引入Protein A/G 磁珠，可广泛结合小鼠 IgG 各亚型；配套的非变性裂解缓冲液、蛋白酶抑制剂与即用型阴性对照 IgG，可在维持蛋白天然构象的同时最大限度减少背景干扰。独特的IPkine™ HRP 标记二抗专为消除传统 WB 中重链信号而设计，使下游检测条带更清晰，结果更可信。
应用领域：适用于小鼠源抗体介导的免疫沉淀、免疫共沉淀及后续 Western Blot 检测，可处理细胞裂解液、组织匀浆等多种样本，广泛应用于蛋白-蛋白相互作用、信号通路验证、翻译后修饰分析及蛋白表达调控研究。
| 中文名称 | 通用型免疫(共)沉淀(IP/Co-IP)工具箱(磁珠/抗小鼠) |
| 英文名称 | Universal IP/Co-IP Toolkit (Magnetic Beads/Anti-Mouse) |
| 产品货号 | KTI1010 |
| 偶联物 | 磁珠 |
| 试剂盒组分 | • Non-Denaturing Lysis Buffer-25 mL • 10×Wash Buffer-20 mL • Protein A/G Magnetic Beads-0.5 mL • Elution Buffer-2 mL • Neutralization Buffer-0.2 mL • 100×Proteinase Inhibitor Cocktail-0.2 mL • Mouse IgG (1 mg/mL)-30 μL • IPKine™ HRP, Goat Anti-Mouse IgG LCS-30 μL |
| 保存建议 | 按各组分标签提示分开存储。 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
Non-Denaturing Lysis Buffer：天然蛋白裂解液，用于IP样本的提取，即用型；4℃保存。
1×Wash Buffer：临用前配制，向10×Wash Buffer 4个体积添加去离子水，稀释成1×；4℃保存。
注意：10×Wash Buffer 4℃保存会产生沉淀，使用前可在37℃水浴中预热10 min溶解沉淀。
Protein A/G Magnetic Beads：即用型；4℃保存，避免冷冻。
Elution Buffer：即用型；用于非变性蛋白洗脱，4℃保存。
Neutralization Buffer：即用型；用于中和洗脱的非变性蛋白，4℃保存。
100×Proteinase Inhibitor Cocktail：临用前在Lysis Buffer中加入终浓度1×Proteinase Inhibitor Cocktail；-20℃保存。
Mouse IgG：即用型；用于小鼠来源抗体的阴性对照，IP-20℃保存。
IPKine™ HRP, Goat Anti-Mouse IgG LCS：HRP标记的山羊抗小鼠IgG轻链二抗，建议WB稀释比例1:1,000-1:10,000（推荐1:2,000）；-20℃保存。
(1) 10 cm培养皿中80%-90%细胞收集（贴壁细胞：单层细胞长满，吸除细胞培养液，PBS洗涤一次；悬浮细胞：离心收集5×106个细胞，PBS洗涤一次）。
(2) 0.5-1 mL Non-Denaturing Lysis Buffer加预冷的Proteinase Inhibitor Cocktail（终浓度1×）到细胞中，4℃裂解细胞5 min，期间用移液器反复吹打，然后将细胞悬浮液转移到新的离心管中。
(3) 12,000 rpm，4℃，离心10 min，收集上清，然后采用BCA法测定蛋白浓度（推荐使用Abbkine货号：KTD3001蛋白质定量试剂盒（BCA法））。
(1) 植物或动物组织样品：称取0.1-1 g组织，加入1 mL Non-Denaturing Lysis Buffer（Non-Denaturing Lysis Buffer 1体积中加入终浓度1×Proteinase Inhibitor Cocktail），液氮或匀浆器研磨。（若需要提高蛋白浓度，可以适量减少Non-Denaturing Lysis Buffer用量）。
(2) 将匀浆液转移至新的离心管中，4℃冰上裂解5 min。
(3) 12,000 rpm，4℃，离心10 min，收集上清，然后采用BCA法测定蛋白浓度（推荐使用Abbkine货号：KTD3001蛋白质定量试剂盒（BCA法））。
(1) 12,000 rpm，4℃，离心2 min，收集细菌，PBS洗涤1次。
(2) 每100-200 μL菌液加1 mL Non-Denaturing Lysis Buffer重悬细菌，冰浴超声波破碎细菌5 min（功率200 W，超声3 s，间隔20 s，重复30次）。
(3) 12,000 rpm，4℃，离心10 min，收集上清。
注意：总蛋白浓度选择在0.5-1 μg/μL范围内较为合适。通常针对目标蛋白的表达量不同，需要对总蛋白浓度进行预实验调整。免疫共沉淀（Co-IP）通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品，但也宜用新鲜的蛋白样品为佳。
(1) 取20 μL Protein A/G Magnetic Beads加入到1.5 mL离心管中，离心管置于磁分离架上，静置10 s，吸弃上清。
注意：Protein A/G Magnetic Beads使用前一定要充分重悬，即充分颠倒若干次使混合均匀。
(2) 加入1 mL 1×Wash Buffer，重悬10 s，离心管置于磁分离架上，静置10 s，吸弃上清，重复3次。
(3) 加入0.2-1 mg（0.2-1 mL）蛋白样品，4℃摇转孵育30 min。（推荐用垂直旋转混合仪，低速旋转）
(4) 离心管置于磁分离架上，静置10 s，取上清用于后续的免疫沉淀。
(1) 取20 μL Protein A/G Magnetic Beads加入到1.5 mL离心管中，离心管置于磁分离架上，静置10 s，吸弃上清。
(2) 加入1 mL 1×Wash Buffer，重悬10 s，离心管置于磁分离架上，静置10 s，吸弃上清，重复3次。
(3) 加入0.2-2 μg抗体溶液，重悬，室温下置于垂直旋转混合仪孵育30 min，离心管置于磁分离架上，静置10 s，收集上清液，沉淀用于后续Step (4)。
可选做，IgG阴性对照：加入0.2-2 μL Mouse IgG，重悬，室温下置于垂直旋转混合仪孵育30 min，离心管置于磁分离架上，静置10 s，收集上清液，沉淀用于后续Step (4)。此步可排除IgG本身和目的蛋白或其它特定生物分子的非特异性结合。
注意：Protein A/G Magnetic Beads置于垂直旋转混合仪混匀时，要保证有一定的流动性，若不流动，加入一定量的1×Wash Buffer。
(4) 加入1 mL 1×Wash Buffer，重悬10 s，离心管置于磁分离架上，静置10 s，吸弃上清，重复3次。
(5) 加入0.2-1 mg（0.2-1 mL）（去除非特异性结合蛋白的）上清蛋白样品，在室温下置于垂直旋转混合仪孵育1 h或4℃过夜。
(6) 离心管置于磁分离架上，静置10 s，收集上清液，沉淀用于后续Step (7)。
(7) 加入1 mL 1×Wash Buffer，重悬10 s，离心管置于磁分离架上，静置10 s，吸弃上清，重复3次。
(8) 洗脱
a）变性洗脱法：此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE和Western Blotting检测。向离心管中加入20-50 μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer混合均匀，95℃加热5 min，然后进行离心，800 rpm离心1 min，收集上清液，进行SDS-PAGE和Western Blotting检测分析。
b）非变性洗脱法：此方法洗脱的样品保持原有的生物活性，可用于后期功能分析。向离心管中加入20-50 μL Elution Buffer混匀，然后在室温下孵育10 min，4℃，800 rpm离心2 min，收集上清液至新的离心管中，并立即加入1/10体积的Neutralization Buffer，将洗脱组分pH调节至7.0-8.0，用于后续功能分析。
参考免疫沉淀的方法进行。
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