通用型免疫(共)沉淀(IP/Co-IP)工具箱(磁珠/抗兔)

Name: 通用型免疫(共)沉淀(IP/Co-IP)工具箱(磁珠/抗兔)
Brand: Abbkine
SKU: KTI1020
Price: 598 CNY
Availability: InStock

Universal IP/Co-IP Toolkit (Magnetic Beads/Anti-Rabbit)

产品货号

KTI1020

产品特点：

高效：Protein A/G磁珠结合容量高，非特异吸附低，节省珍贵抗体。

通用：一盒囊括IP、Co-IP及WB所需全部缓冲液，实验流程无缝衔接。

可靠：内置兔IgG阴性对照与IPkine™ HRP二抗，有效排除重链干扰，结果更可信。

足量：0.5 mL磁珠可满足多次小规模或少量样本实验需求。

选择规格

20 T

¥598

现货（当天发货）

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

通用型免疫（共）沉淀（IP/Co-IP）工具箱（磁珠/抗兔）是一款专为兔源抗体设计的磁珠型IP/Co-IP一站式试剂组合，可在非变性条件下快速完成蛋白-蛋白相互作用的捕获、富集与后续WB检测，广泛适用于细胞裂解液、组织匀浆等样本。

免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）是利用固定在磁珠上的Protein A/G与兔源抗体Fc段高效结合，从而“钓取”目标抗原及其互作蛋白的经典技术；Co-IP则在此基础上进一步保留天然复合物，揭示生理状态下的蛋白网络。本工具箱通过Protein A/G磁珠、非变性裂解缓冲液、蛋白酶抑制剂、阴性对照兔IgG及IPkine™ HRP抗兔二抗的协同组合，实现了高特异、低背景的IP/Co-IP实验流程，并可直接衔接Western Blot检测，省去繁琐缓冲液配制。

应用领域：适用于蛋白-蛋白相互作用验证、信号通路关键节点鉴定、翻译后修饰研究及药物靶点筛选等基础与转化研究场景。

产品参数

中文名称	通用型免疫(共)沉淀(IP/Co-IP)工具箱(磁珠/抗兔)
英文名称	Universal IP/Co-IP Toolkit (Magnetic Beads/Anti-Rabbit)
产品货号	KTI1020
偶联物	磁珠
试剂盒组分	• Non-Denaturing Lysis Buffer-25 mL • 10×Wash Buffer-20 mL • Protein A/G Magnetic Beads-0.5 mL • Elution Buffer-2 mL • Neutralization Buffer-0.2 mL • 100×Proteinase Inhibitor Cocktail-0.2 mL • Rabbit IgG (1 mg/mL)-30 μL • IPKine™ HRP, Mouse Anti-Rabbit IgG LCS-30 μL
保存建议	按各组分标签提示分开存储。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

磁分离架
垂直旋转混合仪
低温离心机
可调节式移液枪及枪头
去离子水
PBS 缓冲液
匀浆器（组织样本）
SDS-PAGE Loading Buffer

试剂准备

Non-Denaturing Lysis Buffer：天然蛋白裂解液，用于 IP 样本的提取，即用型；置于冰上待用；4℃保存。

1×Wash Buffer：临用前配制，向 10×Wash Buffer 中添加去离子水，稀释成 1×工作液；4℃保存。

注意：10×Wash Buffer 4℃保存会产生沉淀，使用前可在 37℃水浴中预热 10 min 溶解沉淀。

Protein A/G Magnetic Beads：即用型；4℃保存，避免冷冻。

Elution Buffer：即用型；用于非变性蛋白洗脱，4℃保存。

Neutralization Buffer：即用型；用于中和洗脱的非变性蛋白，4℃保存。

100×Proteinase Inhibitor Cocktail：临用前 Lysis Buffer 中加入终浓度 1×Proteinase Inhibitor Cocktail；-20℃保存。

Rabbit IgG：即用型；用于兔来源 IP 抗体的阴性对照，-20℃保存。

IPKine™ HRP, Mouse Anti-Rabbit IgG LCS：HRP 标记的小鼠抗兔 IgG 轻链二抗，建议 WB 稀释比例 1:1,000-1:10,000（推荐 1:2,000），-20℃保存。

实验步骤

一、免疫沉淀

A. 蛋白样品的准备

1．细胞蛋白提取：

(1) 细胞收集（贴壁细胞：10 cm 细胞培养皿中单层细胞长满 80%-90%，吸除细胞培养液，PBS 洗涤一次；悬浮细胞：离心收集 5×10⁶个细胞，PBS 洗涤一次）。
(2) 加 0.5-1 mL 预冷的 Non-Denaturing Lysis Buffer 到细胞中（Non-Denaturing Lysis Buffer 中加入终浓度 1×Proteinase Inhibitor Cocktail），4℃裂解细胞 5 min，期间用移液器反复吹打，然后将细胞悬浮液转移到新的离心管中。
(3) 12,000 rpm，4℃，离心 10 min，收集上清，然后采用 BCA 法测定蛋白浓度（推荐使用 Abbkine 货号：KTD3001 蛋白质定量试剂盒（BCA 法））。

2．组织蛋白提取：

(1) 植物或动物组织样品：称取 0.1 g 组织，加入 1 mL Non-Denaturing Lysis Buffer（Non-Denaturing Lysis Buffer 中加入终浓度 1 ×Proteinase Inhibitor Cocktail），液氮或匀浆器研磨。（若需要提高蛋白浓度，可以适量减少 Non-Denaturing Lysis Buffer 用量）。
(2) 将匀浆液转移至新的离心管中，4℃冰上裂解 5 min。
(3) 12,000 rpm，4℃，离心 10 min，收集上清，然后采用 BCA 法测定蛋白浓度（推荐使用 Abbkine 货号：KTD3001 蛋白质定量试剂盒（BCA 法））。

3．细菌蛋白提取：

(1) 12,000 rpm，4℃，离心 2 min 收集细菌，PBS 洗涤 1 次。
(2) 每 1 mL 菌液加 100-200 μL Non-Denaturing Lysis Buffer 重悬细菌，冰浴超声波破碎细菌 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30 次）。
(3) 12,000 rpm，4℃，离心 10 min，收集上清。

注意：总蛋白浓度选择在 0.5-1 μg/μL 范围内较为合适。通常针对目标蛋白的表达量不同，需要对总蛋白浓度进行预实验调整。免疫共沉淀(Co-IP)通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品，但也宜用新鲜的蛋白样品为佳。

B. 去除非特异性结合(可选做)：

(1) 取 20 μL 的 Protein A/G Magnetic Beads 加入到 1.5 mL 离心管中，离心管置于磁分离架上，静置 10 s，吸弃上清。

注意：Protein A/G Magnetic Beads 使用前一定要充分重悬，即充分颠倒若干次使混合均匀。

(2) 加入 1 mL 1×Wash Buffer，重悬 Protein A/G Magnetic Beads，离心管置于磁分离架上，静置 10 s，吸弃上清，重复 3 次。
(3) 加入 0.2-1 mL（0.2-1 mg）蛋白样品，4℃摇转孵育 30 min。（推荐用垂直旋转混合仪，低速旋转）
(4) 离心管置于磁分离架上，静置 10 s，取上清用于后续的免疫沉淀。

C. 免疫沉淀

(1) 取 20 μL 的 Protein A/G Magnetic Beads 加入到 1.5 mL 离心管中，离心管置于磁分离架上，静置 10 s，吸弃上清。
(2) 加入 1 mL 1×Wash Buffer，重悬 Protein A/G Magnetic Beads，离心管置于磁分离架上，静置 10 s，吸弃上清，重复 3 次。
(3) 加入 0.2-2 μg 抗体溶液，重悬 Protein A/G Magnetic Beads，室温下置于垂直旋转混合仪孵育 30 min，离心管置于磁分离架上，静置 10 s，收集上清液，沉淀用于后续 Step (4)。可选做，IgG 阴性对照：加入 0.2-2 μL Rabbit IgG，重悬 Protein A/G Magnetic Beads，室温下置于垂直旋转混合仪孵育 30 min，离心管置于磁分离架上，静置 10 s，收集上清液，沉淀用于后续 Step (4)。此步可排除 IgG 本身和目的蛋白或其它特定生物分子的非特异性结合。

注意：Protein A/G Magnetic Beads 置于垂直旋转混合仪混匀时，要保证有一定的流动性，若不流动，加入一定量的 1×Wash Buffer。

(4) 加入 1 mL 1×Wash Buffer，重悬 Protein A/G Magnetic Beads，离心管置于磁分离架上，静置 10 s，吸弃上清，重复 3 次。
(5) 加入 0.2-1 mL（0.2-1 mg）蛋白样品或上清(去除非特异性结合蛋白的上清)，在室温下置于垂直旋转混合仪孵育 1 h 或 4℃过夜。
(6) 离心管置于磁分离架上，静置 10 s，收集上清液，沉淀用于后续 Step (7)。
(7) 加入 1 mL 1×Wash Buffer，重悬 Protein A/G Magnetic Beads，离心管置于磁分离架上，静置 10 s，吸弃上清，重复 3 次。
(8) 洗脱

a）变性洗脱法：此方法洗脱的样品适用于 SDS-PAGE 和Western Blotting 检测。向离心管中加入 20-50 μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀，100℃加热 5 min，然后进行离心，800 rpm 离心 1 min，收集上清液，进行 SDS-PAGE 和Western Blotting 检测分析。
b）非变性洗脱法：此方法洗脱的样品保持原有的生物活性，可用于后期功能分析。向离心管中加入 20-50 μL Elution Buffer 混匀，然后在室温下孵育 10 min，800 rpm，4℃，离心 2 min，收集上清液至新的离心管中，并立即加入 1/10 Elution Buffer 体积的 Neutralization Buffer，将洗脱组分 pH 调节至 7.0-8.0，用于后续功能分析。

二、免疫共沉淀：

参考免疫沉淀的方法进行。

FAQ

1. 试剂盒与 KTD104 有何区别？
A: 该产品相较于 KTD104，磁珠量增加至 0.5 mL, 提供足量的磁珠组分，满足约 25 T 的实验用量；针对性提供一种抗兔的抗体轻链特异性 IP 二抗和同种属 IgG (rabbit IgG) 阴性对照，更精准的细分实验场景，提升性价比；省去变性裂解液，简化试剂盒组分，提升利用度。
2. 试剂盒 20 T 规格内 Protein A/G Magnetic Beads 组分 0.5 mL，为混悬液体积还是微珠体积？
A: 为混悬液体积。
3. 没有磁分离架是否可以使用离心的方式分离磁珠与上清液？
A: 不建议用离心方式代替磁分离，离心不能实现磁珠从上清中完全分离，有可能会发生磁珠与上清一同被吸弃，造成磁珠损失。