通用型免疫荧光(IF)工具箱(抗小鼠Dylight 594)

Name: 通用型免疫荧光(IF)工具箱(抗小鼠Dylight 594)
Brand: Abbkine
SKU: KTD110
Price: 498 CNY
Availability: InStock

Universal IF Toolkit (Anti-Mouse Dylight 594)

产品货号

KTD110

产品特点：

组分齐全：通透、修复、封闭、洗涤、稀释、二抗、核染、封片一步到位，开盒即可实验

信号持久：SuperKine™ 增强型抗荧光淬灭剂与优化稀释液协同作用，有效抑制光漂白

高亮二抗：Dylight 594 标记抗体光稳定性高、信噪比优，呈现清晰红色荧光

红色通道：Dylight 594 发射峰 618 nm，与常见绿色、蓝色荧光探针兼容，便于多重标记

选择规格

100 T

¥498

现货（次日发货）

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

亚科因生物研发的通用型免疫荧光（IF）工具箱（抗小鼠Dylight 594）（Universal IF Toolkit, Anti-Mouse Dylight 594）是一套专为免疫荧光实验设计的完整解决方案，涵盖从样本通透、抗原修复、封闭、抗体孵育到封片成像的全流程试剂，并配备高亮度 Dylight 594 标记山羊抗小鼠二抗，可直接用于检测小鼠来源一抗，实现红色荧光信号的稳定输出。

免疫荧光技术（IF）基于抗原-抗体特异性结合原理，通过荧光标记抗体定位组织或细胞内目标蛋白。本工具箱提供 pH 8.0 EDTA 抗原修复液，可在温和条件下有效暴露抗原表位；随后以山羊血清封闭液降低非特异结合；再用 Dylight 594 标记的山羊抗小鼠 IgG 与一抗结合，在 594 nm 激发光下呈现明亮红色荧光；最后以 SuperKine™ 增强型抗荧光淬灭剂封片，显著延长荧光信号寿命。整套流程兼容细胞爬片、冰冻切片及石蜡切片等多种样本类型。

应用领域

适用于细胞生物学、肿瘤学、神经科学及免疫学等领域的免疫荧光（IF）检测，可在细胞爬片、组织冰冻切片或石蜡切片中定位小鼠来源一抗所识别的目标蛋白，实现单标或与其他荧光探针联用的多重成像分析。

产品参数

中文名称	通用型免疫荧光(IF)工具箱(抗小鼠Dylight 594)
英文名称	Universal IF Toolkit (Anti-Mouse Dylight 594)
产品货号	KTD110
试剂盒组分	• Immunostaining Permeabilization Buffer-100 mL • EDTA Antigen Retrieval Solution pH 8.0 (20×)-100 mL • PBS (20×)-100 mL • Goat Serum Blocking Buffer-20 mL • Antibody Wash Buffer (20×)-25 mL • Antibody Dilution Buffer-50 mL • DyLight 594, Goat Anti-Mouse IgG-100 μL • DAPI (500×)-100 μL • SuperKine™ Enhanced Antifade Mounting Medium-10 mL
注意事项	• 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。 • 该试剂盒中组分EDTA Antigen Retrieval Solution pH 8.0 (20×)，使用过程中请稀释至1×工作液使用，并注意调节PH至8.0。 • 产品经过严苛质量检测。欢迎随时与我们联系，我们致力于客户的成功和满意。
保存建议	-20℃，避光保存12个月。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

固定液（4% 多聚甲醛）
一抗，荧光显微镜，组化笔
去离子水，载玻片，湿盒

试剂准备

Immunostaining Permeabilization Buffer：即用型；4℃保存。

EDTA Antigen Retrieval Solution pH 8.0：临用前配制，用去离子水将 EDTA Antigen Retrieval Solution pH 8.0 (20×) 10× 稀释 20 倍得到 EDTA Antigen Retrieval Solution pH 8.0，4℃保存。

PBS：临用前配制，用去离子水将 20× 稀释 20 倍得到 PBS，4℃保存。

Goat Serum Blocking Buffer：即用型；使用前平衡至室温，-20℃保存。

Antibody Wash Buffer：临用前配制；用去离子水将 20× 稀释 20 倍得到 Antibody Wash Buffer；4℃保存。

Antibody Dilution Buffer：即用型；用于稀释一抗和二抗；4℃保存。

DyLight 594, Goat Anti-Mouse IgG：山羊抗小鼠 IgG 二抗，红色 DyLight 594 荧光标记；推荐稀释比例 1:200。

1× DAPI Staining Solution：临用前配制，用 PBS 将 DAPI (500×) 稀释 500 倍得到 1× DAPI Staining Solution。

SuperKine™ Enhanced Antifade Mounting Medium：即用型；-20℃避光保存。

实验步骤

A. 对于石蜡切片

1.脱蜡至水化：依次将切片放入二甲苯Ⅰ 15 min，二甲苯Ⅱ 15 min，无水乙醇Ⅰ 5 min，无水乙醇Ⅱ 5 min，85% 酒精 5 min，75% 酒精 5 min，去离子水洗 5 min。

2.抗原修复：切片置于盛满 1× EDTA Antigen Retrieval Solution pH 8.0 的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中火 8 min，停火 8 min，转中低火 7 min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将切片置于 PBS 中在摇床上洗 3 次，每次 3 min。

注意：修复液和修复条件根据组织来确定，最佳加热时间需根据不同的样品和目的蛋白自行摸索。

3.画圈：切片稍甩干后，用组化笔在组织周围画圈（防止抗体流走）。

4.封闭：在圈内滴加一滴 Goat Serum Blocking Buffer，室温孵育 30 min。

5.一抗：轻甩 Goat Serum Blocking Buffer，在圈内滴加用 Antibody Dilution Buffer 稀释好的一抗，于湿盒内室温孵育 1 h 或 4℃孵育过夜（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）。

注意：荧光共定位检测可先孵育完第一种一抗，洗弃非特异性结合的抗体后，换另一种一抗进行第二轮孵育。

6.荧光二抗：切片置于 Antibody Wash Buffer 中，置于摇床上清洗 2 次，每次 5 min，再置于 PBS 中，摇床上清洗 1 次，5 min。切片稍甩干后，在圈内滴加 Antibody Dilution Buffer 稀释好的二抗，避光室温孵育 1 h。

注意：加荧光二抗后，后续所有操作步骤都应在暗处进行。荧光共定位检测可孵育完对应的第一种二抗，洗去非特异性结合的抗体后，换另一种对应的二抗进行第二轮孵育。

7.DAPI 复染：切片置于 Antibody Wash Buffer 中，置于摇床上清洗 2 次，每次 5 min，再置于 PBS 中，摇床上清洗 1 次，5 min。在圈内滴加 1× DAPI Staining Solution，避光孵育 5-10 min，吸弃未反应的 1× DAPI Staining Solution，PBS 洗 3 次，每次 5 min。

8.封片：用吸水纸吸干切片上的液体，用 SuperKine™ Enhanced Antifade Mounting Medium 封片，尽量避免气泡，荧光显微镜观察。

B. 对于血涂片、冰冻切片和细胞爬片

1.固定：载玻片用防脱片剂处理（Poly-L-Lysine），抗凝血经离心分层后涂片；冰冻切片室温风扇吹干；细胞爬片生长。以 24 孔板细胞爬片为例，吸尽培养液，加入 1 mL 固定液，室温固定 15-30 min，吸弃固定液，PBS 洗 3 次，每次 3 min。

注意：推荐使用 4% 多聚甲醛作为固定液，也可根据特定的一抗或样品采用有效成分为乙醇、甲醇或其它类型的固定液。

2.破膜：加入 1 mL Immunostaining Permeabilization Buffer 室温孵育 20 min，吸弃未反应的 Immunostaining Permeabilization Buffer，PBS 清洗 3 次，每次 3 min。

注意：冰冻切片也可选用含 20 μg/mL 蛋白酶 K 的 PBS 溶液，消化 15 min。

3.封闭：吸弃 PBS，加入 200 μL Goat Serum Blocking Buffer，室温孵育 30 min。

4.一抗：吸弃 Goat Serum Blocking Buffer，加入 200 μL 用 Antibody Dilution Buffer 稀释好的一抗，于湿盒内，室温孵育 1 h 或 4℃孵育过夜（湿盒内加少量水防止抗体蒸发）。

注意：荧光共定位检测可孵育完第一种一抗，洗弃非特异性结合的抗体后，换另一种一抗进行第二轮孵育。

5.荧光二抗：吸弃一抗，加入 1mL Antibody Wash Buffer，置于摇床上清洗 3 次，每次 5 min，再加入 1 mL PBS，置于摇床上清洗 1 次，5 min。吸弃 PBS，加入 200 μL 用 Antibody Dilution Buffer 稀释好的二抗，避光室温孵育 1 h。

注意：加荧光二抗起，后续所有操作步骤都应在较暗处进行。荧光共定位检测可孵育完对应的第一种二抗，洗去非特异性结合的抗体后，换下一种对应的二抗进行第二轮孵育。

6.DAPI 复染：吸弃二抗，加入 1 mL Antibody Wash Buffer 在摇床上洗 2 次，每次 5 min，再加入 1 mL PBS 在摇床上洗 1 次，5 min。吸弃 PBS，加入 500 μL DAPI Staining Solution 避光孵育 5-10 min，吸弃 DAPI Staining Solution，PBS 洗 3 次，每次 5 min。

7.封片：滴一滴 SuperKine™ Enhanced Antifade Mounting Medium 于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片液，尽量避免气泡，荧光显微镜观察。

C. 对于非贴壁细胞

1.收集细胞：300 g 离心 5 min，收集细胞，吸弃上清后轻轻弹散细胞。

2.固定：加入 0.5 mL 固定液，轻柔悬浮细胞，室温固定 15-30 min，300 g 离心 5 min，吸弃固定液，PBS 清洗 3 次，每次 3 min。

3.破膜：加入 0.5 mL Immunostaining Permeabilization Buffer，轻柔悬浮细胞，室温孵育 20 min，300 g 离心 5 min，吸弃 Immunostaining Permeabilization Buffer，PBS 清洗 3 次，每次 5 min。

4.封闭：300 g 离心 5 min，吸弃 PBS，用 100 μL Goat Serum Blocking Buffer 悬浮细胞，室温封闭 30 min。

5.一抗：300 g 离心 5 min，吸弃 Goat Serum Blocking Buffer，用 Antibody Dilution Buffer 稀释好的一抗重悬细胞，室温孵育 1 h 或 4℃孵育过夜（推荐使用垂直混匀仪）。

注意：荧光共定位检测可孵育完第一种一抗，洗弃非特异性结合的抗体后，换另一种一抗进行第二轮孵育。

6.二抗：300 g 离心 5 min，吸弃一抗，加入 0.5 mL Antibody Wash Buffer，清洗 3 次，每次 5 min，再加入 0.5 mL PBS，清洗 1 次，5 min。300 g 离心 5 min，吸弃 PBS，加入 100 μL Antibody Dilution Buffer 稀释好的二抗重悬细胞，避光室温孵育 1 h。

注意：加荧光二抗起，后续所有操作步骤都应在较暗处进行。荧光共定位检测可孵育完对应的第一种二抗，洗去非特异性结合的抗体后，换另一种二抗进行第二轮孵育。

7.DAPI 复染：300 g 离心 5 min，吸弃二抗，加入 0.5 mL Antibody Wash Buffer，清洗 2 次，每次 5 min，再加入 0.5 mL PBS，清洗 1 次，5 min。300 g 离心 5 min，吸弃 PBS，加入 200 μL 1× DAPI Staining Solution 重悬细胞，避光孵育 5-10 min，离心吸弃 1× DAPI Staining Solution，PBS 洗 3 次，每次 5 min。

8.封片：300 g 离心 5 min，吸弃大部分 PBS，保留约 50 μL 液体，轻柔悬浮细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞均匀分布，稍晾干后，滴一滴 SuperKine™ Enhanced Antifade Mounting Medium 封片，尽量避免气泡，荧光显微镜观察。