人白介素-5 ELISA定量试剂盒-EliKine™

Name: 人白介素-5 ELISA定量试剂盒-EliKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTE6016
Price: 1598 CNY
Availability: InStock

EliKine™ Human IL-5 ELISA Kit

产品货号

KTE6016

产品特点：

高灵敏度：检测下限可达 4 pg/mL，可准确捕捉低丰度 IL-5

宽线性范围：7.8 pg/mL – 500 pg/mL，覆盖生理与病理浓度区间

高特异性：对人源 IL-5 类似物无明显交叉反应，背景干扰极低

经典夹心法：预包被抗体微孔板 + 生物素-亲和素放大系统，信号稳定

多样本兼容：适用于细胞培养上清、血清、血浆及其他生物液体

选择规格

48 T

¥1598

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96 T

¥2558

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

EliKine™ 人白介素-5 ELISA定量试剂盒 (EliKine™ Human IL-5 ELISA Kit, 货号 KTE6016) 是一款基于经典双抗体夹心法的高灵敏度酶联免疫检测工具，可在细胞培养上清、血清、血浆及其他生物液体中对人源 IL-5 进行精准定量。

白细胞介素-5 (IL-5) 属于 Th2 细胞因子家族，由 115 个氨基酸组成的同源二聚体糖蛋白，主要由 Th2 细胞与肥大细胞分泌。IL-5 通过与其特异性受体结合，可刺激 B 细胞增殖并促进免疫球蛋白分泌，同时也是活化嗜酸性粒细胞的关键因子。临床与基础研究中，IL-5 水平升高与变应性鼻炎、哮喘等多种变态反应性疾病密切相关；在气道及循环组织中检测到显著升高的 IL-5，而痰液中嗜酸性粒细胞数量则相应减少。因此，准确测定 IL-5 含量对于 Th2 型免疫应答机制研究及变态疾病监测具有重要意义。

应用领域

该试剂盒广泛应用于细胞水平研究，包括 Th2 细胞极化机制、B 细胞活化与抗体分泌、嗜酸性粒细胞募集与活化等基础免疫学研究；同时可用于变态反应、哮喘、过敏性鼻炎等疾病模型中 IL-5 表达水平的定量分析，以及药物干预后 IL-5 动态变化的监测。

产品参数

中文名称	人白介素-5 ELISA定量试剂盒-EliKine™
英文名称	EliKine™ Human IL-5 ELISA Kit
产品货号	KTE6016
反应性	人
检测类型	ELISA
检测方法	夹心法
样本类型	细胞培养上清#血清#血浆#其它生物液体
试剂盒组分	• 人源 IL-5 抗体预包被微孔板 • 人源 IL-5蛋白标准品 • 人源 IL-5检测抗体 • EliKine™ Streptavidin-HRP • 标准品稀释液 • 实验缓冲液 • HRP底物 • 反应终止液 • 洗涤缓冲液 • 封板膜.
检测范围	7.8 pg/mL-500 pg/mL
灵敏度	4 pg/mL
基因ID	3567
蛋白质ID	P05113
蛋白序列链接	http://www.uniprot.org/uniprot/P05113
检测指标	IL-5
注意事项	• 试剂盒的试剂不能与其它批号的试剂或超出有效期的试剂混合使用。 • 试剂应按瓶上标签说明储存，使用前室温平衡30 分钟。 • 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。 • 实验中未用的板条立即放回包装中，密闭封口，4℃保存。 • 充分混匀对反应结果尤为重要，推荐使用低速频率振荡器或者每10分钟手动摇匀。 • 对于样品和标准品，建议做双孔或者三孔检测（复孔）。.
保存建议	请将未开封使用的试剂盒保存于2-8℃；启用后的试剂盒，请参考说明书保存各个组分。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

酶标仪（能测 450 nm处的吸光度）
多通道移液器或自动洗板机
恒温箱、低温离心机
可调节式移液枪及枪头
去离子水

酶标仪（能测 450 nm处的吸光度）

多通道移液器或自动洗板机

恒温箱、低温离心机

可调节式移液枪及枪头

去离子水

试剂准备

1×Sample Diluent：使用前，平衡到室温，用去离子水按 1：5的比例稀释 Sample Diluent (5×)得到 1×Sample Diluent，轻轻混合以避免起泡。4℃保存，此溶液可稳定保存 30天。 1×Sample Diluent用于稀释标准品、血清及血浆样品。

1×Sample Diluent：

1×Assay Buffer：使用前，平衡到室温，用去离子水按 1：5的比例稀释 Assay Buffer (5×)得到 1×Assay buffer，轻轻混合以避免起泡。4℃保存，此溶液可稳定保存 30天。1×Assay buffer用于稀释 Human IL-5 Detect Antibody (100×)和 Streptavidin-HRP (100×)。

1×Assay Buffer：

Human IL-5 Standard: 加入 1 mL 1×Sample Diluent复溶 Human IL-5 Standard得到 500 pg/mL标准品。在进行稀释之前，将标准品至少放置 15 min并轻轻晃动。

Human IL-5 Standard:

1×Human IL-5 Detect Antibody：稀释前充分混合。根据标准品和样品所需要的量，在干净的塑料管中用 1×Assay buffer对 Human IL-5 Detect Antibody（100×）进行 1:100 稀释。1×Human IL-5 Detect Antibody应在 30 min内使用。

1×Human IL-5 Detect Antibody：

1×Streptavidin-HRP：稀释前充分混合。根据标准品和样品所需要的量，在干净的塑料管中用 1×Assay buffer对 Streptavidin-HRP（100×）进行 1:100稀释。1×Streptavidin-HRP应在 30 min内使用。

1×Streptavidin-HRP：

HRP Substrate（TMB）：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

HRP Substrate（TMB）：

Stop Solution：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Stop Solution：

1×Wash Buffer: 使用前平衡到室温，用去离子水进行 1:20稀释得到 1×Wash buffer。轻轻混合以避免起泡，室温保存，此溶液可稳定保存 30天。

1×Wash Buffer:

标准曲线设置

按下表所示，用 1×Sample Diluent将 500 pg/mL标准品稀释为 500、 250、125、62.5、31.25、15.63、7.8、0 pg/mL的 Human IL-5标准品。

序号	标准品体积	1×Sample Diluent体积 (μL)	标准品浓度（pg/mL）
Std.1	1,000 µL of 500 pg/mL	0	500
Std.2	500 µL of Std.1（500 pg/mL）	500	250
Std.3	500 µL of Std.2（250 pg/mL）	500	125
Std.4	500 µL of Std.3（125 pg/mL）	500	62.5
Std.5	500 µL of Std.4（62.5 pg/mL）	500	31.25
Std.6	500 µL of Std.5（31.25 pg/mL）	500	15.63
Std.7	500 µL of Std.6（15.63 pg/mL）	500	7.8
Std.8	0	500	0

序号	标准品体积	1×Sample Diluent体积 (μL)	标准品浓度（pg/mL）
Std.1	1,000 µL of 500 pg/mL	0	500
Std.2	500 µL of Std.1（500 pg/mL）	500	250
Std.3	500 µL of Std.2（250 pg/mL）	500	125
Std.4	500 µL of Std.3（125 pg/mL）	500	62.5
Std.5	500 µL of Std.4（62.5 pg/mL）	500	31.25
Std.6	500 µL of Std.5（31.25 pg/mL）	500	15.63
Std.7	500 µL of Std.6（15.63 pg/mL）	500	7.8
Std.8	0	500	0

序号标准品体积1×Sample Diluent体积 (μL)标准品浓度（pg/mL）序号标准品体积1×Sample Diluent体积 (μL)标准品浓度（pg/mL）序号标准品体积1×Sample Diluent体积 (μL)标准品浓度（pg/mL）Std.11,000 µL of 500 pg/mL0500Std.2500 µL of Std.1（500 pg/mL）500250Std.3500 µL of Std.2（250 pg/mL）500125Std.4500 µL of Std.3（125 pg/mL）50062.5Std.5500 µL of Std.4（62.5 pg/mL）50031.25Std.6500 µL of Std.5（31.25 pg/mL）50015.63Std.7500 µL of Std.6（15.63 pg/mL）5007.8Std.805000Std.11,000 µL of 500 pg/mL0500Std.11,000 µL of 500 pg/mL0500Std.2500 µL of Std.1（500 pg/mL）500250Std.2500 µL of Std.1（500 pg/mL）500250Std.3500 µL of Std.2（250 pg/mL）500125Std.3500 µL of Std.2（250 pg/mL）500125Std.4500 µL of Std.3（125 pg/mL）50062.5Std.4500 µL of Std.3（125 pg/mL）50062.5Std.5500 µL of Std.4（62.5 pg/mL）50031.25Std.5500 µL of Std.4（62.5 pg/mL）50031.25Std.6500 µL of Std.5（31.25 pg/mL）50015.63Std.6500 µL of Std.5（31.25 pg/mL）50015.63Std.7500 µL of Std.6（15.63 pg/mL）5007.8Std.7500 µL of Std.6（15.63 pg/mL）5007.8Std.805000Std.805000

注意：每次实验都需要新配制标准品。

样本制备

细胞培养上清：离心除去颗粒，立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。
血清：使用血清分离管，让样品在室温下凝结 30 min，然后 1,000 g 离心 15 min。取上层血清立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。
血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后 30 min内 1,000 g离心 15 min。立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

细胞培养上清：离心除去颗粒，立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

细胞培养上清：

血清：使用血清分离管，让样品在室温下凝结 30 min，然后 1,000 g 离心 15 min。取上层血清立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

血清：

血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后 30 min内 1,000 g离心 15 min。立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

血浆：

注意：不要使用严重溶血或脂血的标本。如果样品要在 24 h内使用，则可以将其储存在 2至 8℃，避免反复冻融。测定前，应将冷冻样品缓慢升至室温并轻轻混合。

实验步骤

从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。
每孔加入 100 μL稀释的标准品或样品。建议所有标准品和样品做复孔。给酶标板覆膜，在室温下孵育 2 h。
除去每孔中的液体并洗涤，重复该过程总共洗涤三次。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 250 μL 1×Wash buffer进行洗涤，然后静置 1-2 min。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1×Wash buffer。
每孔加入 100 μL 1×Human IL-5 Detect Antibody。给酶标板覆膜，在室温下孵育 1 h。
重复步骤 3中的洗涤。
每孔加入 100 μL 1×Streptavidin-HRP。给酶标板覆膜，在室温下孵育 30 min，注意避光。
按照步骤 3重复洗涤过程 5次。
每孔加入 100 μL HRP Substrate（TMB）。给酶标板覆膜，并在室温下避光孵育 15 min。
每孔加入 50 μL Stop Solution，Stop Solution应按照与 TMB 相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。
在 30 min内，测定每孔 450 nm处的吸光值。

从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。

每孔加入 100 μL稀释的标准品或样品。建议所有标准品和样品做复孔。给酶标板覆膜，在室温下孵育 2 h。

除去每孔中的液体并洗涤，重复该过程总共洗涤三次。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 250 μL 1×Wash buffer进行洗涤，然后静置 1-2 min。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1×Wash buffer。

每孔加入 100 μL 1×Human IL-5 Detect Antibody。给酶标板覆膜，在室温下孵育 1 h。

重复步骤 3中的洗涤。

每孔加入 100 μL 1×Streptavidin-HRP。给酶标板覆膜，在室温下孵育 30 min，注意避光。

按照步骤 3重复洗涤过程 5次。

每孔加入 100 μL HRP Substrate（TMB）。给酶标板覆膜，并在室温下避光孵育 15 min。

每孔加入 50 μL Stop Solution，Stop Solution应按照与 TMB 相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。

在 30 min内，测定每孔 450 nm处的吸光值。

结果计算

计算每个标准品和样品的复孔平均 OD值，并减去零浓度（Std.8）平均 OD值。
标准曲线的绘制：以标准品浓度为 x轴，各标准品的平均吸光度为 y轴，绘制标准曲线。可以使用作图软件来创建标准曲线。

计算每个标准品和样品的复孔平均 OD值，并减去零浓度（Std.8）平均 OD值。

标准曲线的绘制：以标准品浓度为 x轴，各标准品的平均吸光度为 y轴，绘制标准曲线。可以使用作图软件来创建标准曲线。

注意：如果样品被稀释，从标准曲线读取的浓度必须乘以稀释系数。

常见问题

Q: 普通大分子蛋白ELISA检测的原理是什么？

A: 双抗体夹心法是检测大分子抗原最常用的方法。双抗夹心法ELISA是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检样本中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体— 抗原—固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量；

Q: 试剂盒检测一个样品孔，一般用多少样本量？

A: 稀释好的液体样本100 μL，细胞样本1-2×106个cells，组织样本1 g左右。

Q: 为什么我们的ELISA试剂盒的最大吸收波长是450nm？

A: 因为TMB显色染料经过硫酸终止之后在450nm处有最大吸收峰，所以用酶标仪检测450nm处的OD值。

Q: 开封之后，未用完的ELISA酶标板的保存方法和保存时间？

A: 开封的酶标板应密封后在-20度保存，能保存一个月。

Q: ELISA实验制作标曲，X轴和Y轴弄反了，是否对结果有影响？

A: 无影响，只是计算的时候需注意，样本的OD值应代入计算式的X值中。

Q: 样本前处理：血加在抗凝管里后,离心出来的是血清还是血浆？

A: 血浆。

Q: 该系列试剂盒能否满足客户间断性采样的要求？

A: 可以满足，连续取的样本如果1周内检测，需保存于4℃；如1个月内检测，按一次使用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融；如6个月内检测，分装保存于-80℃，避免反复冻融。

Q: ELISA试验的标准曲线和测定的重复性差，这是由什么原因造成的？

A: 1. 加样本及试剂量不准，孔间不一致----重复测定时保持与上次操作条件一致； 2. 加样过快，孔间发生污染----加样不能过快； 3. 加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区----加样时枪头不要贴壁； 4. 不同批号试剂盒中组分混用----不同批号试剂盒中组分不可混用； 5. 温育时间、洗板、显色时间不一致----操作时间保持一致； 6. 试剂/样品没有混匀----充分混匀样品和试剂。

Q: 该类试剂盒的指标如何查找？

A: 建议在Abbkine官网搜索“KET”，客户可以了解到相关指标。如有疑问，请联系support@abbkine.com进行详细咨询。

Q: 该类试剂盒的标准品稀释液中偶见沉淀，应如何处理？

A: 为了避免基质效应，ELISA 试剂盒针对不同的样本都会配备不同的稀释液。一些稀释液，特别是血清稀释液的配方中，会含有一些动物蛋白成分（比如 BSA）和溶解度较低的盐。这些成分在低温或是稀释液微量蒸发的情况下，会出现结晶或浑浊的现象。在试剂盒开发的过程中，我们研发人员开展的大量验证实验表明，稀释液的沉淀不会影响试剂的使用性能。

文献引用

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