小鼠晚期糖基化终末产物(AGEs)ELISA定量试剂盒(一步法)-EliKine™

Name: 小鼠晚期糖基化终末产物(AGEs)ELISA定量试剂盒(一步法)-EliKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTE4079
Price: 1998 CNY
Availability: InStock

EliKine™ Mouse Advanced Glycation End Products (AGEs) ELISA Kit（One Step Method）

产品货号

KTE4079

产品特点：

一步法设计：减少操作步骤，实验时间缩短30%以上

高灵敏度：检测下限低至8 pg/mL，可识别微量AGEs变化

宽线性范围：40-3200 pg/mL覆盖生理及病理浓度梯度

高特异性：对AGEs类似物无交叉反应，背景干扰极低

完整组分：含预包被板、标准品、生物素化抗体及显色系统，即开即用

选择规格

48 T

¥1998

期货（3天内发货）

96 T

¥3198

期货（3天内发货）

🎉 限时优惠

买2送1活动进行中！购买任意2个规格产品，免费赠送100μL装一支。

活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

EliKine™ 小鼠晚期糖基化终末产物（AGEs）ELISA定量试剂盒（一步法）是一款专为小鼠样本设计的双抗体夹心法酶联免疫检测工具，可在血清、血浆或其他相关生物液体中快速、精准地定量晚期糖基化终末产物（AGEs）。该试剂盒采用一步法操作流程，将传统多步孵育简化为单次加样-孵育-显色，显著缩短实验时间，同时保持高灵敏度与宽线性范围，适用于基础研究、代谢疾病模型评估及糖化应激相关机制探索。

晚期糖基化终末产物（AGEs）是蛋白质、脂质或核酸在高糖环境下经非酶促糖化及氧化反应生成的稳定复合物，其累积与糖尿病并发症、衰老及慢性炎症密切相关。EliKine™ 试剂盒通过双抗体夹心法捕获样本中的AGEs：预包被于微孔板上的高纯度小鼠AGEs抗体作为捕获抗体，与样本或标准品中的AGEs结合后，依次加入生物素化检测抗体和HRP标记链霉亲和素，形成抗体-抗原-抗体-HRP复合物。TMB底物在HRP催化下产生颜色反应，450 nm处吸光度与AGEs浓度呈正比，通过标准曲线即可准确定量。

应用领域

该试剂盒适用于糖尿病并发症机制研究、衰老相关糖化应激模型、药物干预效果评估及食品AGEs含量分析等场景，兼容细胞培养上清、组织匀浆等多种小鼠样本类型。

产品参数

中文名称	小鼠晚期糖基化终末产物(AGEs)ELISA定量试剂盒(一步法)-EliKine™
英文名称	EliKine™ Mouse Advanced Glycation End Products (AGEs) ELISA Kit（One Step Method）
产品货号	KTE4079
反应性	小鼠
种属	小鼠
检测类型	ELISA
检测方法	双抗体夹心法
样本类型	血清、血浆或其他相关生物液体
试剂盒组分	•Mouse AGEs Microplate •Mouse AGEs Standard（6400 pg/mL) •Standard Diluent •Biotinlated AGEs Antibody •Chromogen Solution A •Chromogen Solution B •Stop Solution •HRP-Conjugated Reagent •Wash Buffer •Plate Covers
检测范围	40 pg/mL-3200 pg/mL
灵敏度	8 pg/mL
分子	AGE; Advanced Glycation End Products
检测指标	AGE; Advanced Glycation End Products
注意事项	• 试剂盒的试剂不能与其它批号的试剂或超出有效期的试剂混合使用。 • 试剂应按瓶上标签说明储存，使用前室温平衡30 分钟。 • 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。 • 实验中未用的板条立即放回包装中，密闭封口，4℃保存。 • 充分混匀对反应结果尤为重要，推荐使用低速频率振荡器或者每10分钟手动摇匀。 • 对于样品和标准品，建议做双孔或者三孔检测（复孔）。
保存建议	请将未开封使用的试剂盒避光保存于2-8℃，保质期6个月；启用后的试剂盒，请参考说明书保存各个组分。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

酶标仪（能测 450 nm处的吸光度）
多通道移液器或自动洗板机
恒温箱、低温离心机
可调节式移液枪及枪头
去离子水、PBS

酶标仪（能测 450 nm处的吸光度）

多通道移液器或自动洗板机

恒温箱、低温离心机

可调节式移液枪及枪头

去离子水、PBS

试剂准备

Standard Diluent：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。Standard Diluent用于稀释标准品。

Standard Diluent：

Mouse AGEs Standard: 即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Mouse AGEs Standard:

Mouse AGEs Detect Antibody：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Mouse AGEs Detect Antibody：

Streptavidin-HRP：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Streptavidin-HRP：

HRP Substrate A：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

HRP Substrate A：

HRP Substrate B：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

HRP Substrate B：

Stop Solution：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Stop Solution：

1×Wash Buffer:Wash Buffer使用前平衡到室温，48 T用去离子水将Wash Buffer稀释 20倍，96 T用去离子水将Wash Buffer稀释 30倍得到 1×Wash buffer。轻轻混合以避免起泡，室温保存，此溶液可稳定保存 30天。

1×Wash Buffer:

标准曲线设置

按下表所示，用 Standard Diluent将 6,400 pg/mL标准品稀释为 3,200、1,600、800、400、200和 0 pg/mL的Mouse AGEs标准品。

序号	标准品体积	Standard Diluent体积 (μL)	标准品浓度（pg/mL）
Std.1	150 µL of 6,400 pg/mL	150	3,200
Std.2	150 µL of Std.1 (3,200 pg/mL)	150	1,600
Std.3	150 µL of Std.2 (1,600 pg/mL)	150	800
Std.4	150 µL of Std.3 (800 pg/mL)	150	400
Std.5	150 µL of Std.4 (400 pg/mL)	150	200
Std.6	0	150	0

序号	标准品体积	Standard Diluent体积 (μL)	标准品浓度（pg/mL）
Std.1	150 µL of 6,400 pg/mL	150	3,200
Std.2	150 µL of Std.1 (3,200 pg/mL)	150	1,600
Std.3	150 µL of Std.2 (1,600 pg/mL)	150	800
Std.4	150 µL of Std.3 (800 pg/mL)	150	400
Std.5	150 µL of Std.4 (400 pg/mL)	150	200
Std.6	0	150	0

序号标准品体积Standard Diluent体积 (μL)标准品浓度（pg/mL）序号标准品体积Standard Diluent体积 (μL)标准品浓度（pg/mL）序号标准品体积Standard Diluent体积 (μL)标准品浓度（pg/mL）Std.1150 µL of 6,400 pg/mL1503,200Std.2150 µL of Std.1 (3,200 pg/mL)1501,600Std.3150 µL of Std.2 (1,600 pg/mL)150800Std.4150 µL of Std.3 (800 pg/mL)150400Std.5150 µL of Std.4 (400 pg/mL)150200Std.601500Std.1150 µL of 6,400 pg/mL1503,200Std.1150 µL of 6,400 pg/mL1503,200Std.2150 µL of Std.1 (3,200 pg/mL)1501,600Std.2150 µL of Std.1 (3,200 pg/mL)1501,600Std.3150 µL of Std.2 (1,600 pg/mL)150800Std.3150 µL of Std.2 (1,600 pg/mL)150800Std.4150 µL of Std.3 (800 pg/mL)150400Std.4150 µL of Std.3 (800 pg/mL)150400Std.5150 µL of Std.4 (400 pg/mL)150200Std.5150 µL of Std.4 (400 pg/mL)150200Std.601500Std.601500

注意：每次实验都需要新配制标准品。

注意：

样本制备

细胞培养上清：离心除去颗粒，立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。
血清：使用血清分离管，让样品在室温下凝结 30 min，然后 1,000 g离心 15 min。取上层血清立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。
血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后 30 min内 1,000 g离心 15 min。立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。
组织：称取 0.1 g组织，加入 0.9 mL冰预冷的 0.01M pH7.4的 PBS（可加入蛋白酶抑制剂）冰浴匀浆，收集匀浆液 4℃，10,000 g离心 10 min，取上清立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。
细胞：贴壁细胞用冷的 PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1,000 g离心 5min后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的 PBS洗涤 3次。每 10⁶个细胞中加入 150-200 μL PBS重悬（推荐在 PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少 PBS的体积）并通过冰浴超声破碎 2 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 12次）。将提取液于 4℃，10,000 g离心 10min，取上清立即测定或者分装-20℃保存，避免反复冻融。
尿液、唾液等其他液体生物样本：3,000 g离心 10min，取上清立即测定或者分装-20℃保存，避免反复冻融。

细胞培养上清：离心除去颗粒，立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

细胞培养上清：

血清：使用血清分离管，让样品在室温下凝结 30 min，然后 1,000 g离心 15 min。取上层血清立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

血清：

血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后 30 min内 1,000 g离心 15 min。立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

血浆：

组织：称取 0.1 g组织，加入 0.9 mL冰预冷的 0.01M pH7.4的 PBS（可加入蛋白酶抑制剂）冰浴匀浆，收集匀浆液 4℃，10,000 g离心 10 min，取上清立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

组织：

细胞：贴壁细胞用冷的 PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1,000 g离心 5min后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的 PBS洗涤 3次。每 10⁶个细胞中加入 150-200 μL PBS重悬（推荐在 PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少 PBS的体积）并通过冰浴超声破碎 2 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 12次）。将提取液于 4℃，10,000 g离心 10min，取上清立即测定或者分装-20℃保存，避免反复冻融。

细胞：⁶

尿液、唾液等其他液体生物样本：3,000 g离心 10min，取上清立即测定或者分装-20℃保存，避免反复冻融。

尿液、唾液等其他液体生物样本：

注意：不要使用严重溶血或脂血的标本。如果样品要在 24 h内使用，则可以将其储存在 2至 8℃，避免反复冻融。测定前，应将冷冻样品缓慢升至室温并轻轻混合。

注意：

实验步骤

从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品、Mouse AGEs Detect Antibody及 Streptavidin-HRP，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加入 40 μL样品，然后再加入 10 μL Mouse AGEs Detect Antibody。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。标准孔依次加入 50 μL不同浓度的标准品。（注意：标准品中已经预加 Mouse AGEs Detect Antibody，无需再加。）
加 HRP：每孔加入 50 μL Streptavidin-HRP，空白孔除外，给酶标板覆膜，在 37℃下孵育 30 min。
洗涤：除去每孔中的液体并洗涤。可使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 300 μL 1×Wash buffer静置浸泡 30 s，进行洗涤，重复 5次。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的1×Wash buffer。洗板完成之后，请立即使用微孔板，不要让微孔板干燥。
显色：每孔先加入 50 μL HRP Substrate A，再加入 50 μL HRP Substrate B，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 10 min。
终止反应：每孔加入 50 μL Stop Solution，Stop Solution应按照与 HRP Substrate相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。
测量：在 15 min内，测定每孔 450 nm处的吸光值。

从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。

加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品、Mouse AGEs Detect Antibody及 Streptavidin-HRP，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加入 40 μL样品，然后再加入 10 μL Mouse AGEs Detect Antibody。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。标准孔依次加入 50 μL不同浓度的标准品。（注意：标准品中已经预加 Mouse AGEs Detect Antibody，无需再加。）

加样：

加 HRP：每孔加入 50 μL Streptavidin-HRP，空白孔除外，给酶标板覆膜，在 37℃下孵育 30 min。

加 HRP：

洗涤：除去每孔中的液体并洗涤。可使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 300 μL 1×Wash buffer静置浸泡 30 s，进行洗涤，重复 5次。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的1×Wash buffer。洗板完成之后，请立即使用微孔板，不要让微孔板干燥。

洗涤：

显色：每孔先加入 50 μL HRP Substrate A，再加入 50 μL HRP Substrate B，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 10 min。

显色：

终止反应：每孔加入 50 μL Stop Solution，Stop Solution应按照与 HRP Substrate相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。

终止反应：

测量：在 15 min内，测定每孔 450 nm处的吸光值。

测量：

结果计算

计算每个标准品和样品的复孔平均 OD值，并减去空白孔平均 OD值。
标准曲线的绘制：以标准品浓度为 x轴，各标准品的平均ΔOD值为 y轴，绘制标准曲线。可以使用作图软件来创建标准曲线。将样品的ΔOD值代入曲线方程式，计算得出样品的浓度。

计算每个标准品和样品的复孔平均 OD值，并减去空白孔平均 OD值。

标准曲线的绘制：以标准品浓度为 x轴，各标准品的平均ΔOD值为 y轴，绘制标准曲线。可以使用作图软件来创建标准曲线。将样品的ΔOD值代入曲线方程式，计算得出样品的浓度。

注意：如果样品被稀释，从标准曲线读取的浓度必须乘以稀释系数。

注意：

常见问题

Q: 普通大分子蛋白ELISA检测的原理是什么？

A: 双抗体夹心法是检测大分子抗原最常用的方法。双抗夹心法ELISA是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检样本中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体— 抗原—固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量；

Q: 试剂盒检测一个样品孔，一般用多少样本量？

A: 稀释好的液体样本100 μL，细胞样本1-2×106个cells，组织样本1 g左右。

Q: 为什么我们的ELISA试剂盒的最大吸收波长是450nm？

A: 因为TMB显色染料经过硫酸终止之后在450nm处有最大吸收峰，所以用酶标仪检测450nm处的OD值。

Q: 开封之后，未用完的ELISA酶标板的保存方法和保存时间？

A: 开封的酶标板应密封后在-20度保存，能保存一个月。

Q: ELISA实验制作标曲，X轴和Y轴弄反了，是否对结果有影响？

A: 无影响，只是计算的时候需注意，样本的OD值应代入计算式的X值中。

Q: 样本前处理：血加在抗凝管里后,离心出来的是血清还是血浆？

A: 血浆。

Q: 该系列试剂盒能否满足客户间断性采样的要求？

A: 可以满足，连续取的样本如果1周内检测，需保存于4℃；如1个月内检测，按一次使用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融；如6个月内检测，分装保存于-80℃，避免反复冻融。

Q: ELISA试验的标准曲线和测定的重复性差，这是由什么原因造成的？

A: 1. 加样本及试剂量不准，孔间不一致----重复测定时保持与上次操作条件一致； 2. 加样过快，孔间发生污染----加样不能过快； 3. 加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区----加样时枪头不要贴壁； 4. 不同批号试剂盒中组分混用----不同批号试剂盒中组分不可混用； 5. 温育时间、洗板、显色时间不一致----操作时间保持一致； 6. 试剂/样品没有混匀----充分混匀样品和试剂。

Q: 该类试剂盒的指标如何查找？

A: 建议在Abbkine官网搜索“KET”，客户可以了解到相关指标。如有疑问，请联系support@abbkine.com进行详细咨询。

Q: 该类试剂盒的标准品稀释液中偶见沉淀，应如何处理？

A: 为了避免基质效应，ELISA 试剂盒针对不同的样本都会配备不同的稀释液。一些稀释液，特别是血清稀释液的配方中，会含有一些动物蛋白成分（比如 BSA）和溶解度较低的盐。这些成分在低温或是稀释液微量蒸发的情况下，会出现结晶或浑浊的现象。在试剂盒开发的过程中，我们研发人员开展的大量验证实验表明，稀释液的沉淀不会影响试剂的使用性能。