大鼠肿瘤坏死因子-α ELISA定量试剂盒-EliKine™

Name: 大鼠肿瘤坏死因子-α ELISA定量试剂盒-EliKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTE9007
Price: 1598 CNY
Availability: InStock

EliKine™ Rat TNF-α ELISA Kit

产品货号

KTE9007

产品特点：

夹心法设计，灵敏度高，检测下限低至 16 pg/mL

线性范围宽：31.25–2000 pg/mL，适配不同表达丰度的样本

大鼠源抗体配对，特异性强，与类似物无明显交叉反应

组分齐全，包含预包被板、标准品、检测抗体、HRP 底物及终止液，即拆即用

兼容细胞培养上清、血清、血浆等多种生物液体，实验方案灵活

选择规格

48 T

¥1598

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96 T

¥2558

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

EliKine™ 大鼠肿瘤坏死因子-α ELISA定量试剂盒 (EliKine™ Rat TNF-α ELISA Kit, KTE9007) 是一款基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测试剂盒，专为定量测定大鼠来源样本中的 TNF-α 蛋白而设计，适用于细胞培养上清、血清、血浆及其他生物液体。

TNF-α（Tumor necrosis factor-α，肿瘤坏死因子-α）又称恶质素，由活化的巨噬细胞、T 细胞、B 细胞、NK 细胞、星形胶质细胞、内皮细胞、平滑肌细胞及部分肿瘤细胞分泌，是机体抵御感染和抑制肿瘤生长的关键细胞因子。其表达水平与败血性休克、恶病质及多种自身免疫性疾病密切相关。本试剂盒利用预包被的大鼠源 TNF-α 捕获抗体与生物素化检测抗体形成“夹心”，经 Streptavidin-HRP 放大信号，通过显色反应在 450 nm 处读取吸光度，实现目标蛋白的精准定量。

应用领域： 免疫炎症机制研究、药物筛选与药效评价、败血症及自身免疫病模型评估、细胞因子风暴监测、肿瘤微环境分析等基础与转化医学研究。

产品参数

中文名称	大鼠肿瘤坏死因子-α ELISA定量试剂盒-EliKine™
英文名称	EliKine™ Rat TNF-α ELISA Kit
产品货号	KTE9007
反应性	大鼠
检测类型	ELISA
检测方法	夹心法
样本类型	细胞培养上清#血清#血浆#其它生物液体
试剂盒组分	• 大鼠源 TNF-α 抗体预包被微孔板 • 大鼠源 TNF-α蛋白标准品 • 大鼠源 TNF-α检测抗体 • EliKine™ Streptavidin-HRP • 标准品稀释液 • 实验缓冲液 • HRP底物 • 反应终止液 • 洗涤缓冲液 • 封板膜.
检测范围	31.25 pg/mL- 2000 pg/mL
灵敏度	16 pg/ml
基因ID	24835
蛋白质ID	P16599
蛋白序列链接	http://www.uniprot.org/uniprot/P16599
检测指标	TNF-α
注意事项	• 试剂盒的试剂不能与其它批号的试剂或超出有效期的试剂混合使用。 • 试剂应按瓶上标签说明储存，使用前室温平衡30 分钟。 • 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。 • 实验中未用的板条立即放回包装中，密闭封口，4℃保存。 • 充分混匀对反应结果尤为重要，推荐使用低速频率振荡器或者每10分钟手动摇匀。 • 对于样品和标准品，建议做双孔或者三孔检测（复孔）。.
保存建议	请将未开封使用的试剂盒保存于2-8℃；启用后的试剂盒，请参考说明书保存各个组分。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

酶标仪（能测 450 nm 处的吸光度）
多通道移液器或自动洗板机
恒温箱、低温离心机
可调节式移液枪及枪头
去离子水

试剂准备

1× Sample Diluent：使用前，平衡到室温，用去离子水按 5 Sample Diluent (5×) : 1 去离子水的比例稀释得到 1× Sample Diluent，轻轻混合以避免起泡。4℃ 保存，此溶液可稳定保存 30 天。1× Sample Diluent 用于稀释标准品，血清和血浆样品。

1× Assay Buffer：使用前，平衡到室温，用去离子水按 5 Assay Buffer (5×) : 1 去离子水的比例稀释得到 1× Assay Buffer，轻轻混合以避免起泡。4℃ 保存，此溶液可稳定保存 30 天。1× Assay Buffer 用于稀释 1× Rat TNF-α Detect Antibody (100×) 和 1× Streptavidin-HRP (100×)。

Rat TNF-α Standard：加入 1 mL 1× Sample Diluent 复溶得到 2,000 pg/mL 的 Rat TNF-α 标准品。在进行稀释之前，将标准品至少放置 15 min 并轻轻晃动。

1× Rat TNF-α Detect Antibody：稀释前充分混合。根据标准品和样品所需要的量，在干净的塑料管中用 1× Assay Buffer 对 Rat TNF-α Detect Antibody (100×) 进行 1:100 稀释。稀释后的 1× Rat TNF-α Detect Antibody 应在稀释后 30 min 内使用。

1× Streptavidin-HRP：稀释前充分混合。根据标准品和样品所需要的量，在干净的塑料管中用 1× Assay Buffer 对 Streptavidin-HRP (100×) 进行 1:100 稀释。稀释后的 1× Streptavidin-HRP 应在 30 min 内使用。

HRP Substrate TMB（）：即用型；使用前，平衡到室温；4℃ 避光保存。

Stop Solution：即用型；使用前，平衡到室温；4℃ 保存。

1× Wash Buffer：Wash Buffer (20×) 使用前平衡到室温，用去离子水进行 1:20 稀释得到 1× Wash Buffer。轻轻混合以避免起泡，室温保存，此溶液可稳定保存 30 天。

标准曲线设置

按下表所示，用 1× Sample Diluent 将 Rat TNF-α 标准品稀释为 2,000、1,000、500、250、125、62.5、31.25、0 pg/mL 的标准品。

序号	标准品体积	1× Sample Diluent 体积 (μL)	标准品浓度（pg/mL）
Std.1	1,000 µL of 2,000 pg/mL	0	2,000
Std.2	500 µL of Std.1 (2,000 pg/mL)	500	1,000
Std.3	500 µL of Std.2 (1,000 pg/mL)	500	500
Std.4	500 µL of Std.3 (500 pg/mL)	500	250
Std.5	500 µL of Std.4 (250 pg/mL)	500	125
Std.6	500 µL of Std.5 (125 pg/mL)	500	62.5
Std.7	500 µL of Std.6 (62.5 pg/mL)	500	31.25
Std.8	0	500	0

注意：每次实验都需要新配制标准品。

样本制备

1. 细胞培养上清：离心除去颗粒，立即测定或分装 -20℃ 保存，避免反复冻融。

2. 血清：使用血清分离管，让样品在室温下凝结 30 min，然后 1,000 g 离心 15 min。取上层血清立即测定或分装 -20℃ 保存，避免反复冻融。

3. 血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后 30 min 内 1,000 g 离心 15 min。立即测定或分装 -20℃ 保存，避免反复冻融。

注意：不要使用严重溶血或脂血的标本。如果样品要在 24 h 内使用，则可以将其储存在 2-8℃，避免反复冻融。测定前，应将冷冻样品缓慢升至室温并轻轻混合。

实验步骤

1. 从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。

2. 每孔加入 100 μL 稀释的标准品或样品。建议所有标准品和样品做复孔。给酶标板覆膜，在室温下孵育 2 h。

3. 除去每孔中的液体并洗涤，重复该过程总共洗涤三次。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 250 μL 1×Wash Buffer 进行洗涤，然后静置 1-2 min。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1× Wash Buffer。

4. 每孔加入 100 μL 1× Rat TNF-α Detect Antibody。给酶标板覆膜，在室温下孵育 1 h。

5. 重复步骤 3 中的洗涤。

6. 每孔加入 100 μL 1× Streptavidin-HRP。给酶标板覆膜，在室温下孵育 30 min，注意避光。

7. 按照步骤 3 重复洗涤过程 5 次。

8. 每孔加入 100 μL HRP Substrate TMB（）。给酶标板覆膜，并在室温下避光孵育 15 min。

9. 每孔加入 50 μL Stop Solution，Stop Solution 应按照与 TMB 相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。

10. 在 30 min 内，测定每孔 450 nm 处的吸光值。

结果计算

1. 计算每个标准品和样品的复孔平均 OD 值，并减去零浓度（Std.8）平均 OD 值。

2. 标准曲线的绘制：以标准品浓度为 x 轴，各标准品的平均吸光度为 y 轴，绘制标准曲线。可以使用作图软件来创建标准曲线。

注意：如果样品被稀释，从标准曲线读取的浓度必须乘以稀释系数。

常见问题

Q: 普通大分子蛋白ELISA检测的原理是什么？

A: 双抗体夹心法是检测大分子抗原最常用的方法。双抗夹心法ELISA是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检样本中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体— 抗原—固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量；

Q: 试剂盒检测一个样品孔，一般用多少样本量？

A: 稀释好的液体样本100 μL，细胞样本1-2×106个cells，组织样本1 g左右。

Q: 为什么我们的ELISA试剂盒的最大吸收波长是450nm？

A: 因为TMB显色染料经过硫酸终止之后在450nm处有最大吸收峰，所以用酶标仪检测450nm处的OD值。

Q: 开封之后，未用完的ELISA酶标板的保存方法和保存时间？

A: 开封的酶标板应密封后在-20度保存，能保存一个月。

Q: ELISA实验制作标曲，X轴和Y轴弄反了，是否对结果有影响？

A: 无影响，只是计算的时候需注意，样本的OD值应代入计算式的X值中。

Q: 样本前处理：血加在抗凝管里后,离心出来的是血清还是血浆？

A: 血浆。

Q: 该系列试剂盒能否满足客户间断性采样的要求？

A: 可以满足，连续取的样本如果1周内检测，需保存于4℃；如1个月内检测，按一次使用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融；如6个月内检测，分装保存于-80℃，避免反复冻融。

Q: ELISA试验的标准曲线和测定的重复性差，这是由什么原因造成的？

A: 1. 加样本及试剂量不准，孔间不一致----重复测定时保持与上次操作条件一致； 2. 加样过快，孔间发生污染----加样不能过快； 3. 加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区----加样时枪头不要贴壁； 4. 不同批号试剂盒中组分混用----不同批号试剂盒中组分不可混用； 5. 温育时间、洗板、显色时间不一致----操作时间保持一致； 6. 试剂/样品没有混匀----充分混匀样品和试剂。

Q: 该类试剂盒的指标如何查找？

A: 建议在Abbkine官网搜索“KET”，客户可以了解到相关指标。如有疑问，请联系support@abbkine.com进行详细咨询。

Q: 该类试剂盒的标准品稀释液中偶见沉淀，应如何处理？

A: 为了避免基质效应，ELISA 试剂盒针对不同的样本都会配备不同的稀释液。一些稀释液，特别是血清稀释液的配方中，会含有一些动物蛋白成分（比如 BSA）和溶解度较低的盐。这些成分在低温或是稀释液微量蒸发的情况下，会出现结晶或浑浊的现象。在试剂盒开发的过程中，我们研发人员开展的大量验证实验表明，稀释液的沉淀不会影响试剂的使用性能。