大鼠胰高血糖素样肽-1 竞争法ELISA定量试剂盒-EliKine™

Name: 大鼠胰高血糖素样肽-1 竞争法ELISA定量试剂盒-EliKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTE9009
Price: 1598 CNY
Availability: InStock

EliKine™ Rat GLP-1 Competitive ELISA Kit

产品货号

KTE9009

产品特点：

竞争法设计，灵敏度高：检测下限可达 4.12 pg/mL，线性范围 12.35–1,000 pg/mL

高特异性：对 GLP-1 类似物无明显交叉反应，背景干扰低

多基质兼容：适用于血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液及细胞培养上清

完整配套：提供预包被板、冻干标准品、生物素标记检测抗体、链霉亲和素-HRP、TMB 底物及终止液等全套组分

即用型稀释液与缓冲液：5× 浓缩 Sample Diluent 与 Assay Buffer，减少实验准备时间

选择规格

48 T

¥1598

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96 T

¥2558

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

EliKine™ 大鼠胰高血糖素样肽-1 竞争法ELISA定量试剂盒 (EliKine™ Rat GLP-1 Competitive ELISA Kit, KTE9009) 是一款基于竞争法原理的高灵敏度酶联免疫检测工具，专为定量测定大鼠来源样本中的胰高血糖素样肽-1 (GLP-1) 而设计，可兼容血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液及细胞培养上清等多种生物基质。

胰高血糖素样肽-1 (GLP-1) 是由肠道 L 细胞在营养摄入后分泌的一种肽类激素，通过与胰腺 GLP-1 受体结合，增强葡萄糖诱导的胰岛素分泌并提高胰岛素表达，从而发挥多重降糖作用。EliKine™ Rat GLP-1 Competitive ELISA Kit 采用竞争法：微孔板预包被特异性抗大鼠 GLP-1 抗体，将待测抗原（样品或标准品）与生物素标记的 GLP-1 抗原共同加入孔中，两者竞争结合抗体。洗涤后，加入链霉亲和素-HRP 复合物，随后以 TMB 显色。在 450 nm 处读取的吸光度与样品中 GLP-1 浓度呈反比关系，实现准确定量。

应用领域

该试剂盒广泛应用于糖尿病与代谢综合征研究、胰岛β细胞功能评估、肠道激素信号通路分析以及药物筛选与药效学评价等方向，为科研工作者提供可靠的大鼠 GLP-1 定量数据支持。

产品参数

中文名称	大鼠胰高血糖素样肽-1 竞争法ELISA定量试剂盒-EliKine™
英文名称	EliKine™ Rat GLP-1 Competitive ELISA Kit
产品货号	KTE9009
反应性	大鼠
检测类型	ELISA
检测方法	竞争法
样本类型	血清（浆）、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清
试剂盒组分	•Rat GLP-1 Microplate •Rat GLP-1 Standard (lyophilized) •Sample Diluent (5×) •Assay Buffer (5×) •Biotin Conjugated Rat GLP-1 Detect Antibody (100×) •Streptavidin-HRP (100×) •HRP Substrate（TMB） •Stop Solution •Wash Buffer (20×) •Plate Covers
检测范围	12.35 pg/mL-1,000 pg/mL
灵敏度	4.12 pg/m
分子	Glucagon Like Peptide 1;GLP-1;GLP1
检测指标	Glucagon Like Peptide 1;GLP-1;GLP1;GLP 1
注意事项	• 试剂盒的试剂不能与其它批号的试剂或超出有效期的试剂混合使用。 • 试剂应按瓶上标签说明储存，使用前室温平衡30 分钟。 • 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。 • 实验中未用的板条立即放回包装中，密闭封口，4℃保存。 • 充分混匀对反应结果尤为重要，推荐使用低速频率振荡器或者每10分钟手动摇匀。 • 对于样品和标准品，建议做双孔或者三孔检测（复孔）。 • 如果 Sample Diluent (5×)和 Assay Buffer (5×)出现颜色变黄，少量沉淀等现象，是因为试剂中含有血清导致，离心去掉沉淀即可，不影响正常使用。
保存建议	请将未开封使用的试剂盒避光保存于2-8℃，保质期12个月；启用后的试剂盒，请参考说明书保存各个组分。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

酶标仪（能测 450 nm处的吸光度）
多通道移液器或自动洗板机
恒温箱、低温离心机、匀浆器（如果是组织样本）
可调节式移液枪及枪头
去离子水、PBS

酶标仪（能测 450 nm处的吸光度）

多通道移液器或自动洗板机

恒温箱、低温离心机、匀浆器（如果是组织样本）

可调节式移液枪及枪头

去离子水、PBS

试剂准备

1×Sample Diluent：使用前，平衡到室温，用去离子水按 1:5的比例稀释 Sample Diluent (5×)得到 1×Sample Diluent，轻轻混合以避免起泡。4℃保存，此溶液可稳定保存 30天。1×Sample Diluent用于稀释标准品和样本。

1×Sample Diluent：

1×Assay Buffer：使用前，平衡到室温，用去离子水按 1:5的比例稀释 Assay Buffer (5×)得到 1×Assay buffer，轻轻混合以避免起泡。4℃保存，此溶液可稳定保存 30天。1×Assay buffer用于稀释 Biotin Conjugated Rat GLP-1 (100×)和 Streptavidin-HRP (100×)。

1×Assay Buffer：

Rat GLP-1 Standard: 加入 250 µL 1×Sample Diluent复溶 Rat GLP-1 Standard得到 1,000 pg/mL标准品。在进行稀释之前，将标准品至少放置 15 min并轻轻晃动。

Rat GLP-1 Standard:

1×Biotin Conjugated Rat GLP-1：稀释前充分混合。根据标准品和样品所需要的量，在干净的塑料管中用 1×Assay buffer对 Biotin Conjugated Rat GLP-1 (100×)进行 1:100稀释。1×Biotin Conjugated Rat GLP-1应在稀释后 30 min内使用。

1×Biotin Conjugated Rat GLP-1：

1×Streptavidin-HRP：稀释前充分混合。根据标准品和样品所需要的量，在干净的塑料管中用 1×Assay Buffer对 Streptavidin-HRP（100×）进行 1:100稀释。1×Streptavidin-HRP应在 30 min内使用。

1×Streptavidin-HRP：

HRP Substrate (TMB)：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

HRP Substrate (TMB)：

Stop Solution：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Stop Solution：

1×Wash Buffer: 使用前平衡到室温，Wash Buffer (20×)用去离子水进行 1:20稀释得到 1×Wash buffer。轻轻混合以避免起泡，室温保存，此溶液可稳定保存 30天。

1×Wash Buffer:

标准曲线设置

按下表所示，用 1×Sample Diluent将 1,000 pg/mL标准品稀释为 333.33、111.11、37.04、12.35和 0 pg/mL的 Rat GLP-1标准品。

序号	标准品体积	1×Sample Diluent体积 (μL)	标准品浓度（pg/mL）
Std.1	250 µL of 1,000 pg/mL	0	1,000
Std.2	80 µL of Std.1 (1,000 pg/mL)	160	333.33
Std.3	80 µL of Std.2 (333.33 pg/mL)	160	111.11
Std.4	80 µL of Std.3 (111.11 pg/mL)	160	37.04
Std.5	80 µL of Std.4 (37.04 pg/mL)	160	12.35
Std.6	0	160	0

序号	标准品体积	1×Sample Diluent体积 (μL)	标准品浓度（pg/mL）
Std.1	250 µL of 1,000 pg/mL	0	1,000
Std.2	80 µL of Std.1 (1,000 pg/mL)	160	333.33
Std.3	80 µL of Std.2 (333.33 pg/mL)	160	111.11
Std.4	80 µL of Std.3 (111.11 pg/mL)	160	37.04
Std.5	80 µL of Std.4 (37.04 pg/mL)	160	12.35
Std.6	0	160	0

序号标准品体积1×Sample Diluent体积 (μL)标准品浓度（pg/mL）序号标准品体积1×Sample Diluent体积 (μL)标准品浓度（pg/mL）序号标准品体积1×Sample Diluent体积 (μL)标准品浓度（pg/mL）Std.1250 µL of 1,000 pg/mL01,000Std.280 µL of Std.1 (1,000 pg/mL)160333.33Std.380 µL of Std.2 (333.33 pg/mL)160111.11Std.480 µL of Std.3 (111.11 pg/mL)16037.04Std.580 µL of Std.4 (37.04 pg/mL)16012.35Std.601600Std.1250 µL of 1,000 pg/mL01,000Std.1250 µL of 1,000 pg/mL01,000Std.280 µL of Std.1 (1,000 pg/mL)160333.33Std.280 µL of Std.1 (1,000 pg/mL)160333.33Std.380 µL of Std.2 (333.33 pg/mL)160111.11Std.380 µL of Std.2 (333.33 pg/mL)160111.11Std.480 µL of Std.3 (111.11 pg/mL)16037.04Std.480 µL of Std.3 (111.11 pg/mL)16037.04Std.580 µL of Std.4 (37.04 pg/mL)16012.35Std.580 µL of Std.4 (37.04 pg/mL)16012.35Std.601600Std.601600

注意：每次实验都需要新配制标准品。

注意：

样本制备

1. 细胞培养上清：离心除去颗粒，立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

1. 细胞培养上清：

2. 血清：使用血清分离管，让样品在室温下凝结 30 min，然后 1,000 g离心 15 min。取上层血清立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

2. 血清：

3. 血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后 30 min内 1,000 g离心 15 min。立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

3. 血浆：

4. 组织匀浆：用预冷的 PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的 PBS(一般按 1:9的重量体积比，比如 0.1 g的组织样品对应 0.9 mL的 PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在 PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声 2 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 12次）破碎。最后将匀浆液于 4℃，10,000 g离心 10 min，取上清检测。

4. 组织匀浆：

5. 细胞提取液：贴壁细胞用冷的 PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1,000 g离心 5 min后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的 PBS洗涤 3次。每 106个细胞中加入 150-200 μL PBS重悬(推荐在 PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少 PBS的体积)并通过超声 2 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 12次）使细胞破碎。将提取液于 4℃，10,000 g离心 10 min，取上清检测。

5. 细胞提取液：

注意：不要使用严重溶血或脂血的标本。如果样品要在 24 h内使用，则可以将其储存在 2至 8℃，避免反复冻融。测定前，应将冷冻样品缓慢升至室温并轻轻混合。

注意：

实验步骤

从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。
除去每孔中的液体并洗涤，重复该过程总共洗涤 3次。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 250 μL 1×Wash buffer进行洗涤。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1×Wash buffer。
每孔加入 50 μL 稀释的标准品或样品，建议所有标准品和样品做复孔。然后每孔加入 50 μL 稀释的 1×Biotin Conjugated Rat GLP-1，保证连续加样，不要间断，加样过程在 15 min内完成。NSB孔（非特异结合孔）加 50 μL 1×Sample Diluent和 50 μL 1×Assay Buffer，给酶标板覆膜，在 37℃孵育 1 h。
重复步骤 2中的洗涤 5次。
每孔加入 100 μL稀释的 1×Streptavidin-HRP。给酶标板覆膜，在 37℃孵育 1 h。
重复步骤 2中的洗涤 5次。
每孔加入 90 μL HRP Substrate (TMB)。给酶标板覆膜，并在 37℃避光孵育 3-5 min。该反应较快，肉眼观察标曲 S5和 S6孔有明显蓝色时，即可终止。
每孔加入 50 μL Stop Solution，Stop Solution应按照与 TMB 相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。
在 30 min内，测定每孔 450 nm处的吸光值。

从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。

除去每孔中的液体并洗涤，重复该过程总共洗涤 3次。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 250 μL 1×Wash buffer进行洗涤。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1×Wash buffer。

每孔加入 50 μL 稀释的标准品或样品，建议所有标准品和样品做复孔。然后每孔加入 50 μL 稀释的 1×Biotin Conjugated Rat GLP-1，保证连续加样，不要间断，加样过程在 15 min内完成。NSB孔（非特异结合孔）加 50 μL 1×Sample Diluent和 50 μL 1×Assay Buffer，给酶标板覆膜，在 37℃孵育 1 h。

重复步骤 2中的洗涤 5次。

每孔加入 100 μL稀释的 1×Streptavidin-HRP。给酶标板覆膜，在 37℃孵育 1 h。

重复步骤 2中的洗涤 5次。

每孔加入 90 μL HRP Substrate (TMB)。给酶标板覆膜，并在 37℃避光孵育 3-5 min。该反应较快，肉眼观察标曲 S5和 S6孔有明显蓝色时，即可终止。

每孔加入 50 μL Stop Solution，Stop Solution应按照与 TMB 相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。

在 30 min内，测定每孔 450 nm处的吸光值。

结果计算

计算每个标准品和样品的复孔平均 OD值，并减去 NSB孔平均 OD 值。
标准曲线的绘制：以标准品浓度为 x轴，各标准品的平均吸光度为 y轴，绘制标准曲线。可以使用作图软件来创建标准曲线。

计算每个标准品和样品的复孔平均 OD值，并减去 NSB孔平均 OD 值。

标准曲线的绘制：以标准品浓度为 x轴，各标准品的平均吸光度为 y轴，绘制标准曲线。可以使用作图软件来创建标准曲线。

注意：如果样品被稀释，从标准曲线读取的浓度必须乘以稀释系数。

注意：

常见问题

Q: 普通大分子蛋白ELISA检测的原理是什么？

A: 双抗体夹心法是检测大分子抗原最常用的方法。双抗夹心法ELISA是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检样本中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体— 抗原—固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量；

Q: 试剂盒检测一个样品孔，一般用多少样本量？

A: 稀释好的液体样本100 μL，细胞样本1-2×106个cells，组织样本1 g左右。

Q: 为什么我们的ELISA试剂盒的最大吸收波长是450nm？

A: 因为TMB显色染料经过硫酸终止之后在450nm处有最大吸收峰，所以用酶标仪检测450nm处的OD值。

Q: 开封之后，未用完的ELISA酶标板的保存方法和保存时间？

A: 开封的酶标板应密封后在-20度保存，能保存一个月。

Q: ELISA实验制作标曲，X轴和Y轴弄反了，是否对结果有影响？

A: 无影响，只是计算的时候需注意，样本的OD值应代入计算式的X值中。

Q: 样本前处理：血加在抗凝管里后,离心出来的是血清还是血浆？

A: 血浆。

Q: 该系列试剂盒能否满足客户间断性采样的要求？

A: 可以满足，连续取的样本如果1周内检测，需保存于4℃；如1个月内检测，按一次使用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融；如6个月内检测，分装保存于-80℃，避免反复冻融。

Q: ELISA试验的标准曲线和测定的重复性差，这是由什么原因造成的？

A: 1. 加样本及试剂量不准，孔间不一致----重复测定时保持与上次操作条件一致； 2. 加样过快，孔间发生污染----加样不能过快； 3. 加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区----加样时枪头不要贴壁； 4. 不同批号试剂盒中组分混用----不同批号试剂盒中组分不可混用； 5. 温育时间、洗板、显色时间不一致----操作时间保持一致； 6. 试剂/样品没有混匀----充分混匀样品和试剂。

Q: 该类试剂盒的指标如何查找？

A: 建议在Abbkine官网搜索“KET”，客户可以了解到相关指标。如有疑问，请联系support@abbkine.com进行详细咨询。

Q: 该类试剂盒的标准品稀释液中偶见沉淀，应如何处理？

A: 为了避免基质效应，ELISA 试剂盒针对不同的样本都会配备不同的稀释液。一些稀释液，特别是血清稀释液的配方中，会含有一些动物蛋白成分（比如 BSA）和溶解度较低的盐。这些成分在低温或是稀释液微量蒸发的情况下，会出现结晶或浑浊的现象。在试剂盒开发的过程中，我们研发人员开展的大量验证实验表明，稀释液的沉淀不会影响试剂的使用性能。