人肌营养不良蛋白关联糖蛋白1(DAG1)ELISA定量试剂盒(一步法)-EliKine™

Name: 人肌营养不良蛋白关联糖蛋白1(DAG1)ELISA定量试剂盒(一步法)-EliKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTE4065
Price: 1998 CNY
Availability: InStock

EliKine™ Human DAG1 ELISA Kit (One Step Method)

产品货号

KTE4065

产品特点：

一步法流程：加样-孵育-读板，操作更快捷

高灵敏度：检测下限低至0.025 ng/mL，可检测低丰度样本

宽线性范围：0.125–10 ng/mL，兼顾高、中、低浓度样本

高特异性：针对人DAG1独特表位设计，未发现与同源蛋白明显交叉反应

兼容多种样本：血清、血浆、组织裂解液、细胞上清等均可直接测定

完整组分：包含预包被板、标准品、检测抗体、TMB底物及终止液，即开即用

选择规格

48 T

¥1998

期货（3天内发货）

96 T

¥3198

期货（3天内发货）

🎉 限时优惠

买2送1活动进行中！购买任意2个规格产品，免费赠送100μL装一支。

活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

EliKine™人肌营养不良蛋白关联糖蛋白1(DAG1) ELISA定量试剂盒（一步法）是一款专为检测人源样本中DAG1（Dystroglycan 1，含α-和β-Dystroglycan亚型）而设计的一步法双抗体夹心ELISA，可在血清、血浆、组织匀浆、细胞上清及相关液体样本中实现0.125 ng/mL–10 ng/mL的宽范围定量，灵敏度低至0.025 ng/mL。

DAG1（Dystroglycan 1）是连接细胞骨架与细胞外基质的关键跨膜复合物，由α-DG与β-DG两个亚基构成，在肌营养不良、肿瘤侵袭及神经退行性疾病研究中备受关注。本试剂盒采用双抗体夹心法：预包被特异性抗人DAG1抗体捕获样本中的DAG1，随后以生物素化检测抗体与链霉亲和素-HRP形成抗体-抗原-抗体-酶复合物；加入TMB底物后，HRP催化显蓝色，终止后呈黄色，450 nm处吸光度与DAG1浓度呈正比。整个反应在一步法体系中完成，减少操作步骤，缩短实验时间。

应用领域

适用于肌营养不良机制研究、肿瘤转移与侵袭评估、神经肌肉疾病生物标志物筛查、药物靶点验证及细胞-基质相互作用分析等基础与转化医学实验。

产品参数

中文名称	人肌营养不良蛋白关联糖蛋白1(DAG1)ELISA定量试剂盒(一步法)-EliKine™
英文名称	EliKine™ Human DAG1 ELISA Kit (One Step Method)
产品货号	KTE4065
反应性	人
检测类型	ELISA
检测方法	双抗体夹心法
样本类型	血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本
试剂盒组分	•Human DAG1 Microplate •Human DAG1 Standard ( 20 ng/mL) •Standard Diluent •Human DAG1 Detect Antibody •Streptavidin-HRP •HRP Substrate A •HRP Substrate B •Stop Solution •Wash Buffer •Plate Covers
检测范围	0.125 ng/mL-10 ng/mL
灵敏度	0.025 ng/mL
分子	A3a;DAG;AGRNR;156DAG;MDDGA9;MDDGC7;MDDGC9;LGMDR16;Dystroglycan 1;156DAG;A3a;AGRNR;DAG;Alpha-Dystroglycan;Beta-Dystroglycan
检测指标	A3a;DAG;AGRNR;156DAG;MDDGA9;MDDGC7;MDDGC9;LGMDR16;Dystroglycan 1;156DAG;A3a;AGRNR;DAG;Alpha-Dystroglycan;Beta-Dystroglycan
注意事项	• 试剂盒的试剂不能与其它批号的试剂或超出有效期的试剂混合使用。 • 试剂应按瓶上标签说明储存，使用前室温平衡30 分钟。 • 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。 • 实验中未用的板条立即放回包装中，密闭封口，4℃保存。 • 充分混匀对反应结果尤为重要，推荐使用低速频率振荡器或者每10分钟手动摇匀。 • 对于样品和标准品，建议做双孔或者三孔检测（复孔）。
保存建议	请将未开封使用的试剂盒避光保存于2-8℃，保质期6个月；启用后的试剂盒，请参考说明书保存各个组分。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

酶标仪（能测 450 nm处的吸光度）
多通道移液器或自动洗板机
恒温箱、低温离心机
可调节式移液枪及枪头
去离子水、PBS

酶标仪（能测 450 nm处的吸光度）

多通道移液器或自动洗板机

恒温箱、低温离心机

可调节式移液枪及枪头

去离子水、PBS

试剂准备

Standard Diluent：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。Standard Diluent用于稀释标准品。

Standard Diluent：

Human DAG1 Standard: 即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Human DAG1 Standard:

Human DAG1 Detect Antibody：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Human DAG1 Detect Antibody：

Streptavidin-HRP：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Streptavidin-HRP：

HRP Substrate A：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

HRP Substrate A：

HRP Substrate B：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

HRP Substrate B：

Stop Solution：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Stop Solution：

1×Wash Buffer:Wash Buffer使用前平衡到室温，48 T用去离子水将Wash Buffer稀释 20倍，96 T用去离子水将Wash Buffer稀释 30倍得到 1×Wash buffer。轻轻混合以避免起泡，室温保存，此溶液可稳定保存 30天。

1×Wash Buffer:

标准曲线设置

按下表所示，用 Standard Diluent将 20 ng/mL标准品稀释为 10、5、2.5、1.25、0.625和 0 ng/mL的 Human DAG1标准品。

序号	标准品体积	Standard Diluent体积 (μL)	标准品浓度（ng/mL）
Std.1	150 µL of 20 ng/mL	150	10
Std.2	150 µL of Std.1 (10 ng/mL)	150	5
Std.3	150 µL of Std.2 (5 ng/mL)	150	2.5
Std.4	150 µL of Std.3 (2.5 ng/mL)	150	1.25
Std.5	150 µL of Std.4 (1.25 ng/mL)	150	0.625
Std.6	0	150	0

序号	标准品体积	Standard Diluent体积 (μL)	标准品浓度（ng/mL）
Std.1	150 µL of 20 ng/mL	150	10
Std.2	150 µL of Std.1 (10 ng/mL)	150	5
Std.3	150 µL of Std.2 (5 ng/mL)	150	2.5
Std.4	150 µL of Std.3 (2.5 ng/mL)	150	1.25
Std.5	150 µL of Std.4 (1.25 ng/mL)	150	0.625
Std.6	0	150	0

序号标准品体积Standard Diluent体积 (μL)标准品浓度（ng/mL）序号标准品体积Standard Diluent体积 (μL)标准品浓度（ng/mL）序号标准品体积Standard Diluent体积 (μL)标准品浓度（ng/mL）Std.1150 µL of 20 ng/mL15010Std.2150 µL of Std.1 (10 ng/mL)1505Std.3150 µL of Std.2 (5 ng/mL)1502.5Std.4150 µL of Std.3 (2.5 ng/mL)1501.25Std.5150 µL of Std.4 (1.25 ng/mL)1500.625Std.601500Std.1150 µL of 20 ng/mL15010Std.1150 µL of 20 ng/mL15010Std.2150 µL of Std.1 (10 ng/mL)1505Std.2150 µL of Std.1 (10 ng/mL)1505Std.3150 µL of Std.2 (5 ng/mL)1502.5Std.3150 µL of Std.2 (5 ng/mL)1502.5Std.4150 µL of Std.3 (2.5 ng/mL)1501.25Std.4150 µL of Std.3 (2.5 ng/mL)1501.25Std.5150 µL of Std.4 (1.25 ng/mL)1500.625Std.5150 µL of Std.4 (1.25 ng/mL)1500.625Std.601500Std.601500

注意：每次实验都需要新配制标准品。

注意：

样本制备

细胞培养上清：离心除去颗粒，立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。
血清：使用血清分离管，让样品在室温下凝结 30 min，然后 1,000 g离心 15 min。取上层血清立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。
血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后 30 min内 1,000 g离心 15 min。立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。
组织：称取 0.1 g组织，加入 0.9 mL冰预冷的 0.01M pH7.4的 PBS（可加入蛋白酶抑制剂）冰浴匀浆，收集匀浆液 4℃，10,000 g离心 10 min，取上清立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。
细胞：贴壁细胞用冷的 PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1,000 g离心 5min后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的 PBS洗涤 3次。每 10⁶个细胞中加入 150-200 μL PBS重悬（推荐在 PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少 PBS的体积）并通过冰浴超声破碎 2 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 12次）。将提取液于 4℃，10,000 g离心 10min，取上清立即测定或者分装-20℃保存，避免反复冻融。
尿液、唾液等其他液体生物样本：3,000 g离心 10min，取上清立即测定或者分装-20℃保存，避免反复冻融。

细胞培养上清：离心除去颗粒，立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

细胞培养上清：

血清：使用血清分离管，让样品在室温下凝结 30 min，然后 1,000 g离心 15 min。取上层血清立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

血清：

血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。在收集后 30 min内 1,000 g离心 15 min。立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

血浆：

组织：称取 0.1 g组织，加入 0.9 mL冰预冷的 0.01M pH7.4的 PBS（可加入蛋白酶抑制剂）冰浴匀浆，收集匀浆液 4℃，10,000 g离心 10 min，取上清立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

组织：

细胞：贴壁细胞用冷的 PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1,000 g离心 5min后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的 PBS洗涤 3次。每 10⁶个细胞中加入 150-200 μL PBS重悬（推荐在 PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少 PBS的体积）并通过冰浴超声破碎 2 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 12次）。将提取液于 4℃，10,000 g离心 10min，取上清立即测定或者分装-20℃保存，避免反复冻融。

细胞：⁶

尿液、唾液等其他液体生物样本：3,000 g离心 10min，取上清立即测定或者分装-20℃保存，避免反复冻融。

尿液、唾液等其他液体生物样本：

注意：不要使用严重溶血或脂血的标本。如果样品要在 24 h内使用，则可以将其储存在 2至 8℃，避免反复冻融。测定前，应将冷冻样品缓慢升至室温并轻轻混合。

注意：

实验步骤

从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品、Human DAG1 Detect Antibody及 Streptavidin-HRP，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加入 40 μL样品，然后再加入 10 μL Human DAG1 Detect Antibody。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。标准孔依次加入 50 μL不同浓度的标准品。（注意：标准品中已经预加 Human DAG1 Detect Antibody，无需再加。）
加 HRP：每孔加入 50 μL Streptavidin-HRP，空白孔除外，给酶标板覆膜，在 37℃下孵育 30 min。
除去每孔中的液体并洗涤。可使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 300 μL 1×Wash buffer静置浸泡 30 s，进行洗涤，重复 5次。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1×Wash buffer。洗板完成之后，请立即使用微孔板，不要让微孔板干燥。
每孔先加入 50 μL HRP Substrate A，再加入 50 μL HRP Substrate B，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 10 min。
每孔加入 50 μL Stop Solution，Stop Solution应按照与 HRP Substrate相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。
在 15 min内，测定每孔 450 nm处的吸光值。

从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。

加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品、Human DAG1 Detect Antibody及 Streptavidin-HRP，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加入 40 μL样品，然后再加入 10 μL Human DAG1 Detect Antibody。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。标准孔依次加入 50 μL不同浓度的标准品。（注意：标准品中已经预加 Human DAG1 Detect Antibody，无需再加。）

加 HRP：每孔加入 50 μL Streptavidin-HRP，空白孔除外，给酶标板覆膜，在 37℃下孵育 30 min。

除去每孔中的液体并洗涤。可使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 300 μL 1×Wash buffer静置浸泡 30 s，进行洗涤，重复 5次。在每个步骤中完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1×Wash buffer。洗板完成之后，请立即使用微孔板，不要让微孔板干燥。

每孔先加入 50 μL HRP Substrate A，再加入 50 μL HRP Substrate B，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 10 min。

每孔加入 50 μL Stop Solution，Stop Solution应按照与 HRP Substrate相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。

在 15 min内，测定每孔 450 nm处的吸光值。

结果计算

计算每个标准品和样品的复孔平均 OD值，并减去空白孔平均 OD值。
标准曲线的绘制：以标准品浓度为 x轴，各标准品的平均ΔOD值为 y轴，绘制标准曲线。可以使用作图软件来创建标准曲线。将样品的ΔOD值代入曲线方程式，计算得出样品的浓度。

计算每个标准品和样品的复孔平均 OD值，并减去空白孔平均 OD值。

标准曲线的绘制：以标准品浓度为 x轴，各标准品的平均ΔOD值为 y轴，绘制标准曲线。可以使用作图软件来创建标准曲线。将样品的ΔOD值代入曲线方程式，计算得出样品的浓度。

注意：如果样品被稀释，从标准曲线读取的浓度必须乘以稀释系数。

注意：

常见问题

Q: 普通大分子蛋白ELISA检测的原理是什么？

A: 双抗体夹心法是检测大分子抗原最常用的方法。双抗夹心法ELISA是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检样本中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体— 抗原—固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量；

Q: 试剂盒检测一个样品孔，一般用多少样本量？

A: 稀释好的液体样本100 μL，细胞样本1-2×106个cells，组织样本1 g左右。

Q: 为什么我们的ELISA试剂盒的最大吸收波长是450nm？

A: 因为TMB显色染料经过硫酸终止之后在450nm处有最大吸收峰，所以用酶标仪检测450nm处的OD值。

Q: 开封之后，未用完的ELISA酶标板的保存方法和保存时间？

A: 开封的酶标板应密封后在-20度保存，能保存一个月。

Q: ELISA实验制作标曲，X轴和Y轴弄反了，是否对结果有影响？

A: 无影响，只是计算的时候需注意，样本的OD值应代入计算式的X值中。

Q: 样本前处理：血加在抗凝管里后,离心出来的是血清还是血浆？

A: 血浆。

Q: 该系列试剂盒能否满足客户间断性采样的要求？

A: 可以满足，连续取的样本如果1周内检测，需保存于4℃；如1个月内检测，按一次使用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融；如6个月内检测，分装保存于-80℃，避免反复冻融。

Q: ELISA试验的标准曲线和测定的重复性差，这是由什么原因造成的？

A: 1. 加样本及试剂量不准，孔间不一致----重复测定时保持与上次操作条件一致； 2. 加样过快，孔间发生污染----加样不能过快； 3. 加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区----加样时枪头不要贴壁； 4. 不同批号试剂盒中组分混用----不同批号试剂盒中组分不可混用； 5. 温育时间、洗板、显色时间不一致----操作时间保持一致； 6. 试剂/样品没有混匀----充分混匀样品和试剂。

Q: 该类试剂盒的指标如何查找？

A: 建议在Abbkine官网搜索“KET”，客户可以了解到相关指标。如有疑问，请联系support@abbkine.com进行详细咨询。

Q: 该类试剂盒的标准品稀释液中偶见沉淀，应如何处理？

A: 为了避免基质效应，ELISA 试剂盒针对不同的样本都会配备不同的稀释液。一些稀释液，特别是血清稀释液的配方中，会含有一些动物蛋白成分（比如 BSA）和溶解度较低的盐。这些成分在低温或是稀释液微量蒸发的情况下，会出现结晶或浑浊的现象。在试剂盒开发的过程中，我们研发人员开展的大量验证实验表明，稀释液的沉淀不会影响试剂的使用性能。