半胱氨酰亚砜裂解酶(CSL)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™

Name: 半胱氨酰亚砜裂解酶(CSL)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTB3013
Price: 616 CNY
Availability: InStock

CheKine™ Micro Cysteinyl Sulfoxide Lyase (CSL) Activity Assay Kit

产品货号

KTB3013

产品特点：

覆盖植物组织与液体样本，验证的样本类型齐全，实验设计更灵活

微量法体系，操作步骤精简，节省样本与试剂

显色反应直观，510 nm 比色读取，适配常规酶标仪

选择规格

48 T/48 S

¥616

现货（次日发货）

96 T/96 S

¥1139

现货（次日发货）

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

CheKine™ 半胱氨酰亚砜裂解酶（CSL）活性检测试剂盒（微量法）是一款专为细胞代谢研究设计的微量级检测工具，可在植物组织或液体样本中快速测定半胱氨酰亚砜裂解酶（Cysteinyl sulfoxide lyase, CSL）的活性，为解析葱属植物辛辣物质合成及细胞代谢通路提供可靠数据。

半胱氨酰亚砜裂解酶（CSL，又称蒜酶、蒜氨酸酶）广泛存在于大蒜、洋葱、韭菜等葱属植物液泡中。当细胞破碎时，液泡内的 CSL 与细胞质中的天然底物蒜氨酸相遇，催化裂解生成蒜素、顺/反式阿霍烯，并伴随丙酮酸和氨等副产物，这一过程是葱属植物辛辣气味的主要来源。CheKine™ 试剂盒利用微量法原理：CSL 催化 S-甲基-L-半胱氨酸亚砜生成丙酮酸，后者与 2,4-二硝基苯肼反应，在碱性条件下形成棕红色产物，于 510 nm 处产生特征吸收峰；吸光度变化与 CSL 活性成正比，从而实现对植物组织及液体样本中 CSL 活性的定量检测。

应用领域

适用于细胞代谢研究，特别是葱属植物辛辣物质生物合成机制、植物防御反应及次生代谢调控等方向，也可拓展至食品科学中风味前体物质分析。

产品参数

中文名称	半胱氨酰亚砜裂解酶(CSL)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
英文名称	CheKine™ Micro Cysteinyl Sulfoxide Lyase (CSL) Activity Assay Kit
产品货号	KTB3013
样本类型	植物组织、液体
试剂盒组分	• Extraction Buffer • Reagent I •Reagent Ⅱ •Reagent Ⅲ •Reagent IV •Reagent V •Standard
分子	半胱氨酰亚砜裂解酶（CSL）
检测指标	半胱氨酰亚砜裂解酶（CSL）
注意事项	•推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。
保存建议	-20℃，避光保存 6 个月
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。

自备耗材

酶标仪或可见光分光光度计（能测 510 nm处的吸光度）
96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头、1.5 mL离心管
恒温箱、制冰机、低温离心机
去离子水
匀浆器或研钵（如果是组织样本）

试剂准备

Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。

Working Reagent I：临用前配制；48 T加入 1 mL去离子水，96 T加入 2 mL去离子水，充分溶解待用。用不完的试剂-20℃避光分装保存 1个月，避免反复冻融。

Working Reagent II：临用前配制；48 T/96 T均加入 50 mL去离子水，充分溶解待用。用不完的试剂-20℃避光分装保存 1个月，避免反复冻融。

Reagent III：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。

Reagent IV：即用型；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。

Reagent V：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。

Standard：临用前配制；每瓶加入 1 mL去离子水，充分溶解，即 20 μmol/mL丙酮酸钠 Standard；使用前，平衡到室温。4℃避光保存 1个月。使用 20 μmol/mL丙酮酸钠 Standard，按照下表所示，进一步稀释标准品：

序号	Standard体积（μL）	去离子水体积（μL）	浓度（μmol/mL）
Std.1	100 μL of 20 μmol/mL Standard	900	2
Std.2	800 μL of Std.1 (2 μmol/mL)	200	1.6
Std.3	500 μL of Std.2 (1.6 μmol/mL)	500	0.8
Std.4	500 μL of Std.3 (0.8 μmol/mL)	500	0.4
Std.5	500 μL of Std.4 (0.4 μmol/mL)	500	0.2
Std.6	500 μL of Std.5 (0.2 μmol/mL)	500	0.1
Std.7	500 μL of Std.6 (0.1 μmol/mL)	500	0.05
Blank	0	500	0

注意：每次实验都要做一次标准品检测；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4小时内使用。

样本制备

注意：建议使用新鲜样本。如果不立即使用，可将样品在-80℃下保存一个月。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在 4 h内完成样品解冻。

1. 植物组织：称取约 0.1 g样本，加入 1 mL Extraction Buffer，用匀浆器或研钵冰浴匀浆，4℃浸提 40 min。15,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。

2. 液体：直接检测。若溶液呈现浑浊，15,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。

注意：如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。

实验步骤

1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 510 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。

2. 操作表（下述操作在 96孔板或微量玻璃比色皿进行）：

试剂	测定孔（μL）	对照孔（μL）	标准孔（μL）	空白孔（μL）
样本	20	20	0	0
Standard	0	0	20	0
去离子水	0	10	10	30
Working ReagentⅠ	10	0	0	0
Working Reagent II	10	10	10	10

混匀，37℃孵育 20 min

试剂	测定孔（μL）	对照孔（μL）	标准孔（μL）	空白孔（μL）
Reagent III	40	40	40	40
Reagent IV	20	20	20	20

混匀，25℃孵育 5 min

试剂	测定孔（μL）	对照孔（μL）	标准孔（μL）	空白孔（μL）
Reagent V	100	100	100	100

3. 混匀，25℃静置 5 min，记录 510 nm处吸光值，空白孔记为 A 空白，标准孔记为 A 标准，对照孔记为 A 对照，测定孔记为 A 测定。计算ΔA 测定=A 测定-A 对照，ΔA 标准=A 标准-A 空白。

注意：（1）空白孔和标准孔只需做 1-2次，每个测定孔均需设置一个对照孔。（2）实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。实验时大蒜鳞茎进行了 40倍稀释，韭叶进行了 2倍稀释。（3）如果ΔA 测定小于 0.01可适当加大样本量。如果ΔA 测定大于 2 μmol/mL的ΔA 标准，样本可用 Extraction Buffer进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

1. 标准曲线的绘制

以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA 测定代入方程得到 x (μmol/mL)。

2. CSL活性的计算：

（1）按蛋白浓度计算

单位的定义：37℃，每 mg组织蛋白每分钟催化产生 1 μmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

CSL (U/mg 蛋白)=(V 样×x)÷(V 样×Cpr)÷T×F=0.05x÷Cpr×F

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：37℃，每 g组织每分钟催化产生 1 μmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

CSL (U/g 鲜重)=(V 样×x)÷(W×V 样÷V 样总)÷T×F=0.05x÷W×F

（3）按样本体积计算：

单位的定义：37℃，每 mL液体每分钟催化产生 1 μmol丙酮酸定义为一个酶活力单位。

CSL (U/mL)=(V 样×x)÷V 样÷T×F=0.05x×F

V 样：加入反应体系中样本体积，0.02 mL；V 样总：加入 Extraction Buffer体积，1 mL；T：反应时间：20 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；F：样本稀释倍数。

常见问题

Q: 该类试剂盒一般什么单位用的多？

A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。

Q: 该类试剂盒做过哪些实验材料的验证？

A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。