快速蛋白质定量试剂盒(BCA法)

试剂准备

Reagent A：使用前，平衡到室温。用不完的试剂-20℃分装保存 12个月，避免反复冻融。短期内 4℃保存 1个月。解冻后若出现析出属正常现象，在室温复溶至完全溶解使用。

Reagent B：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

BSA Standard (2 mg/mL)：使用前，取 100 μL BSA Standard (10 mg/mL)加 400 μL PBS稀释成 2 mg/mL。用不完的试剂-20℃分装保存，避免反复冻融。

工作液：临用前配制，Reagent A和 Reagent B按 50:1的比例混匀，根据实验用量，现配现用。

样本制备

样本溶液：根据实验需求制备样本，用 1×PBS稀释样本至浓度在 20-2,000 µg/mL范围内。如果样品不足 20 μL，需加 1×PBS补足到 20 μL，待测样本加入量可按照经验值进行估计。

实验步骤

1. 酶标仪预热 30 min以上，调节波长到 480 nm。
2. 操作表（下述操作在 96孔板中进行）：

3. 制备 20 μL标准品后，加 20 μL样本到 96孔板，每孔再加入 200 μL工作液，混匀，在室温孵育 5 min，在 480 nm波长下测量 OD值。空白孔（0 µg/mL）记为 A_空，标准孔记为 A_标，样本孔记为 A_样。计算ΔA_标=A_标-A_空，ΔA_样=A_样-A_空。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

1. 标准曲线的绘制：以ΔA_标为 y轴，标准品浓度为 x轴，绘制标准曲线 y=kx+b。
2. 样本浓度的计算：将样本的ΔA_样带入方程得到 x值（µg/mL）。

结果展示

典型标准曲线-以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验建立标准曲线。

注意事项

1. 本产品测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达 5%的 SDS，5%的 Triton X-100，5%的 Tween20、60、80。但 BCA法受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保 EDTA低于 10 mM，无二硫苏糖醇(DTT)，无β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)。
2. 建议每次测定时都做标准曲线。因为测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应会因温度升高而加快。
3. 如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景，请使用蛋白质定量试剂盒（Bradford法）（货号：KTD3002）。
4. 此试剂盒的蛋白浓度范围是 1-2,000 µg/mL。

草莓时刻：快速蛋白质定量试剂盒（BCA法）是 Abbkine精心开发的用于蛋白定量快速检测的试剂盒，极具省时与便捷的特点（室温，5 min显色），可快捷进行蛋白检测的同时，又保证结果的稳定、灵敏与可靠，是您蛋白定量实验的不二之选。扫码右侧二维码关注 Abbkine公众号，了解更多 Abbkine产品信息。

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