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蛋白质定量试剂盒(Bradford法)

Protein Quantification Kit (Bradford Assay)

产品货号
KTD3002

产品特点:

  • 节省时间——显色反应在 2 min 内完成,无需长时间孵育。
  • 兼容性好——可耐受 1 mM 巯基乙醇、5 mM DTT,适用于含还原剂的样本。
  • 良好的检测范围——线性区间 50–1000 µg/mL,灵敏度低至 25 µg/mL。
  • 选择规格

    500 T
    ¥119
    现货(当天发货)
    2000 T
    ¥298
    期货(2天内发货)
    5000 T
    ¥698
    期货(2天内发货)
    🎉 限时优惠

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    活动截止时间:2024年1月31日

    产品概述

    亚科因生物研发的蛋白质定量试剂盒(Bradford法) (Protein Quantification Kit, Bradford Assay) 是一种基于考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质特异性结合的比色法试剂盒,可在 595 nm 处快速、稳定地测定 50–1000 µg/mL 范围内的蛋白浓度,广泛适用于细胞裂解液、组织匀浆、发酵液等多种样本。

    Bradford 实验原理与背景

    考马斯亮蓝 G-250 在游离状态下呈红色,最大吸收峰位于 488 nm;当与蛋白质疏水区结合后迅速转为青色复合物,其最大吸收峰迁移至 595 nm。该复合物在 2 min 内达到平衡,室温 1 h 内保持稳定,吸光度与蛋白浓度呈良好线性关系。由于反应灵敏度高(比 Lowry 法高 4 倍),且不受大多数常规化学物质的干扰,Bradford 法已成为实验室微量蛋白定量的经典选择。

    应用领域

    细胞器提取与染色、蛋白表达量测定、Western blot 上样量标准化、重组蛋白纯化质控、发酵工艺优化等细胞分析相关研究。

    蛋白质定量试剂盒(Bradford法)

    产品参数

    中文名称 蛋白质定量试剂盒(Bradford法)
    英文名称 Protein Quantification Kit (Bradford Assay)
    产品货号 KTD3002
    检测方法 比色法
    试剂盒组分 • 考马斯实验试剂
    • BSA标准品
    检测范围 50-1000 ug/ml
    灵敏度 50-1000 ug/ml
    注意事项 由于高浓度洗涤剂会影响检测结果的可靠性,必须确保样品中的SDS的浓度低于0.1%,Triton X-100低于0.1%,Tween 20,60,80低于0.06%。
    保存建议 自发货之日起,在 4℃下可以稳定保存 12 个月以上,Bradford Reagent 在 4℃条件下能稳定保存,BSA Standard 在首次融化之后要分装保存于-20℃。
    运输条件 冰袋运输(蓝冰)
    警告 本文列出的产品仅供研究使用,不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用,不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为,我们不承担任何责任。

    使用说明

    实验步骤

    A. 微型板操作流程

    1. 标准液制备。将8个试管按照0到7进行标记。 最好使用和样本溶液成份相同的缓冲液将BSA标准品稀释成1 mg/mL工作液。按下表梯度稀释。
    标准管01234567
    BSA (μL)工作液051020406080100
    缓冲液 (μL)1009590806040200
    浓度 (μg/mL)0501002004006008001000
    1. 吸取20 μL标准品或样品,加入96孔板底部,每个样本两个孔。
    2. 向上述孔中加入200 μL Bradford工作液。
    3. 轻轻摇晃混匀。室温,孵育5 min。
    4. 在595 nm波长下测量OD值。样本信号可稳定保存30 min以上。

    B. 试管操作流程

    依据试管规格,按照上述方法操作,可以适当比例增加各溶液使用量。

    结果计算

    • 标准品和样品OD值减去空白OD值(零标准)。以校正后OD值和标准品浓度来绘制标准曲线。依据标准曲线计算样品蛋白质浓度。也可以根据标准曲线方程式来确定样品中蛋白质浓度。
    • 如果样品已被稀释,则必须将标准曲线计算出的浓度乘以稀释倍数。

    结果展示

    以下标准曲线仅作展示。实际曲线应该依据每次测试样本来制作。

    BSA浓度 (μg/mL)

    注意事项

    1. 勤换吸头,避免各组分之间的交叉污染;
    2. 储存试剂几个小时后会有染料共聚体形成,而染料-蛋白质共聚体形成更快。温和混匀可以完全分解染料共聚体。实验前混匀Bradford试剂,并在测量吸光度之前混匀各个试管或平板;
    3. 有些物质会严重干扰Bradford实验,包括大多数离子型和非离子型去污剂,它们会削弱颜色显影并可能导致试剂沉淀;
    4. 有些物质会轻微干扰Bradford实验,当这些物质在样品中浓度低于一定值时仅具有较小影响(可耐受)。 如EDTA,葡萄糖,DTT,2-巯基乙醇等;
    5. 分析含还原剂蛋白样本时,向标准品中加入同等还原剂,可得到较好结果;
    6. 如果使用与酶标仪关联的曲线拟合算法,相比于纯线性拟合曲线,四参数(二次曲线)或最佳拟合曲线的结果更准确。 如果手工绘制曲线,点对点绘制曲线比标准点曲线更好。

    常见问题

    Q: 该试剂盒的标曲可以做成直线吗?

    A: 该试剂盒的标曲只能拟合为曲线形态,不支持做成直线。

    Q: 该试剂盒的细胞样本用1%Triton 100进行裂解,是否可以?

    A: 考马斯亮蓝能耐受的Triton 100浓度是0.1%,建议用ripa裂解液。

    Q: 是BSA还有样品的量需要加20ul,是否可以缩小体系?

    A: 可以统一将样本和试剂用量减半。

    文献引用

    Modulatory Effect of Rosmarinic Acid on H2O2-Induced Adaptive Glycolytic Response in Dermal Fibroblasts

    杂志名称: Molecules | 作者: Charoensin, Suphachai, and Suwatsak Dansakda.

    IF: 6 | 发表时间: 2023

    Effects of programmed cell death protein 10 on fecundity in Schistosoma japonicum

    杂志名称: Parasitology Research | 作者: Y Gao, J Xu, C Tang

    IF: 2 | 发表时间: 2020

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