NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™

Name: NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTB3021
Price: 378 CNY
Availability: InStock

CheKine™ Micro NAD-Malate Dehydrogenase (NAD-MDH) Activity Assay Kit

产品货号

KTB3021

产品特点：

微量体系设计：仅需极少样本即可完成检测，降低实验成本。

比色法原理：通过340 nm吸光度变化直接反映NAD-MDH活性，无需复杂仪器。

组分独立包装：ReagentⅠ、Ⅱ、Ⅲ分装保存，避免交叉污染，提升批次稳定性。

兼容细胞样本：适用于培养细胞裂解液、线粒体提取物等常见细胞代谢研究模型。

选择规格

48 T/48 S

¥378

现货（次日发货）

96 T/96 S

¥569

现货（次日发货）

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

CheKine™ NAD-苹果酸脱氢酶（NAD-MDH）活性检测试剂盒（微量法）是一款基于比色法的微量检测工具，专为测定细胞或亚细胞组分中NAD-MDH活性而设计。通过监测NADH在340 nm处吸光度的变化，可在微量体系内快速评估苹果酸脱氢酶的催化效率，适用于细胞代谢研究中的高通量筛查。

背景知识

苹果酸脱氢酶（MDH，EC 1.1.1.37）广泛分布于动物、植物、微生物及培养细胞中。在线粒体内，MDH是三羧酸循环（TCA）的关键限速酶之一，催化苹果酸氧化为草酰乙酸，同时生成NADH；而在胞浆中，MDH则反向催化草酰乙酸还原为苹果酸，消耗NADH。草酰乙酸作为多条代谢途径的枢纽分子，使MDH在能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭、活性氧平衡及抗病反应等生理过程中发挥核心作用。通过检测NAD-MDH活性，可间接反映细胞内线粒体功能状态及代谢流向。

应用领域

本试剂盒专为细胞代谢研究开发，可用于：

评估肿瘤细胞或原代细胞的线粒体呼吸链功能；
研究药物或基因干预对TCA循环通量的影响；
分析氧化应激条件下苹果酸-天冬氨酸穿梭系统的活性变化。

产品参数

中文名称	NAD-苹果酸脱氢酶(NAD-MDH)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
英文名称	CheKine™ Micro NAD-Malate Dehydrogenase (NAD-MDH) Activity Assay Kit
产品货号	KTB3021
检测类型	辅酶相关
检测方法	比色法
试剂盒组分	• ReagentⅠ • ReagentⅡ • ReagentⅢ
分子	NAD-MDH
检测指标	NAD-MDH
注意事项	• 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用。
保存建议	-20℃，避光保存 6 个月。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

注意：正式检测前，建议选择 2-3 个预期差异较大的样本进行预实验。

自备耗材

酶标仪或紫外分光光度计（能测 340 nm 处的吸光度）
96 孔 UV 板或微量石英比色皿、可调节式移液枪及枪头
制冰机、低温离心机、水浴锅
匀浆器（如果是组织样本）

试剂准备

ReagentⅠ：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

ReagentⅡ：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

试剂盒组分

试剂盒组分	规格	储存条件
ReagentⅠ	48 T: 60 mL 96 T: 60×2 mL	4℃
ReagentⅡ	48 T: 12 mL 96 T: 24 mL	4℃
ReagentⅢ	48 T: Powder×1 vial 96 T: Powder×1 vial	-20℃，避光保存

Working Solution：临用前配置，将 ReagentⅡ全部倒入 ReagentⅢ中，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃避光保存一周，禁止反复冻融。

样本制备

注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1 个月。测定过程中，样本和所有试剂在冰上放置，以免变性和失活。

组织：称取约 0.1 g 样本，加入 1 mL ReagentⅠ，冰浴匀浆，8,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
细胞或细菌：收集 500 万细胞或细菌到离心管内，用冷 PBS 清洗，离心后弃上清，加入 1 mL ReagentⅠ，冰浴超声波破碎 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30 次），然后 8,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
血清（浆）样本：直接检测。

注意：如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine 货号：KTD3001 的蛋白质定量试剂盒（BCA 法）进行样本蛋白质浓度测定。

实验步骤

酶标仪或紫外分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 340 nm。紫外分光光度计用去离子水调零。
Working Solution 于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其他物种）孵育 10 min。
操作表（下述操作在 96 孔 UV 板或微量石英比色皿中操作）：

试剂	空白孔（μL）	测定孔（μL）
样本	0	5
ReagentⅠ	5	0
Working Solution	195	195

迅速混匀后，于 340 nm 检测，记录 20 s 和 1 min 20 s 的吸光值，分别记为 A1和 A2，计算 ΔA 测=(A 测1-A 测 2)-(A 空 1-A 空 2)。

注意：空白管只需要做 1-2 次。实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果 ΔA 测小于 0.005，可适当增大样本量，如果 ΔA 测大于 0.5，样本可用 ReagentⅠ进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数。因通过单位时间内吸光值的变化计算酶活，不推荐同时测多个样本。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

A. 使用 96 孔 UV 板测定的计算公式

1. 血清（浆）NAD-MDH 活力的计算

单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH (nmol/min/mL)=[ΔA 测×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷V 样本÷T=12,860×ΔA 测

2. 组织中 NAD-MDH 活力的计算

(1) 按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH (U/mg prot)=[ΔA 测×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V 样本×Cpr)÷T=12,860×ΔA 测÷Cpr

(2) 按样本鲜重计算

单位的定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH (U/g 鲜重)=[ΔA 测×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(W÷VReagentⅠ×V 样本)÷T=12,860×ΔA 测÷W

3. 按细胞或细菌密度计算

单位的定义：每 1 万个细胞或细菌每分钟消耗 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。

NAD-MDH (U/10⁴)=[ΔA 测×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V 样本÷VReagentⅠ×500)÷T=25.72×ΔA 测

V 反总：反应体系总体积，0.2 mL=2×10^-4 L；VReagentⅠ：加入 ReagentⅠ体积，1 mL；V 样本：加入样本体积，0.005 mL；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ L/mol/cm；d：96 孔 UV 板直径，0.5 cm；Cpr：蛋白浓度（mg/mL）；T：反应时间，1 min；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万；10⁹：单位换算系数，1 mol=10⁹ nmol。

B. 使用微量石英比色皿测定的计算公式

将上述计算公式中的光径 d: 0.5 cm 调整为 d: 1 cm 进行计算即可。

常见问题

Q: 该类试剂盒一般什么单位用的多？

A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。

Q: 该类试剂盒做过哪些实验材料的验证？

A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。