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内毒素清除试剂盒(多粘菌素B)-PurKine™

PurKine™ Endotoxin Removal Kit (Polymyxin B)

产品货号
KTP2140

产品特点:

  • 高载量:每毫升填料可结合高达2,000,000 EU的内毒素,单次清除效率≥99%
  • 高回收:蛋白回收率≥85%,纯化后内毒素残留≤0.1 EU/mL
  • 可重复:同一树脂经再生后可重复使用≥5次,性能无衰减
  • 多规格:提供树脂填料、预装柱及完整试剂盒,适配不同规模实验
  • 选择规格

    1 mL
    ¥998
    期货(2天内发货)
    1 mL×5
    ¥2478
    现货(次日发货)
    🎉 限时优惠

    买2送1活动进行中!购买任意2个规格产品,免费赠送100μL装一支。

    活动截止时间:2024年1月31日

    产品概述

    PurKine™ 内毒素清除试剂盒(多粘菌素B)是一种以多粘菌素B为配基的亲和层析体系,专为去除蛋白样品中的细菌内毒素而设计。该试剂盒通过预装柱形式,可在温和条件下快速、高效地清除重组蛋白、抗体、疫苗等生物制品中的脂多糖(LPS),为下游细胞实验、动物注射或临床前研究提供低内毒素水平的样品。

    内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁外膜的主要成分,即使极微量(pg级)也能引发强烈的免疫反应,干扰细胞实验结果或引起动物发热、休克等副作用。PurKine™ 内毒素清除试剂盒(多粘菌素B)利用多粘菌素B对脂多糖脂质A结构的高亲和力,在生理盐条件下即可特异性捕获LPS,同时保持目标蛋白的天然构象与活性。试剂盒配套的再生与平衡缓冲液可快速完成树脂再生,确保实验流程连贯、省时。

    应用领域:重组蛋白、抗体、疫苗、细胞因子等生物制品的内毒素去除;细胞培养上清、血清、腹水等复杂样品的预处理;动物体内注射或体外细胞实验前的样品纯化。

    内毒素清除试剂盒(多粘菌素B)-PurKine™

    产品参数

    中文名称 内毒素清除试剂盒(多粘菌素B)-PurKine™
    英文名称 PurKine™ Endotoxin Removal Kit (Polymyxin B)
    产品货号 KTP2140
    试剂盒组分 • PurKine™ 内毒素清除-多粘菌素B预装柱
    • 再生缓冲液(10X)
    • 平衡缓冲液(10x)
    保存建议 从发货之日起,2-8°C可稳定保存一年,不要冻结该产品。
    运输条件 冰袋运输(蓝冰)
    警告 本文列出的产品仅供研究使用,不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用,不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为,我们不承担任何责任。

    使用说明

    自备耗材

    • 0.22 μm或 0.45 μm过滤器
    • 可调节式移液枪及枪头
    • 无热源或无内毒素的去离子水
    • 各种制备试剂和缓冲溶液的玻璃器皿

    样本制备

    样品需经过离心或 0.22 μm或 0.45 μm滤膜过滤,以防止堵塞重力柱。样本 pH最好控制在 pH 7-8,因为内毒素结合至柱子的最佳 pH为 6-9。样本最好控制适当的离子强度,减少非特异性吸附,如 0.15-0.5 M的 NaCl。

    试剂准备

    所有用水,缓冲液及耗材均需无热源产品,防止在使用过程中引入内毒素。

    Equilibration Buffer:临用前用无热源水将 Equilibration Buffer (10×) 稀释 10倍得到 Equilibration Buffer,4℃保存。

    Regeneration Buffer:临用前用无热源水将 Regeneration Buffer (10×) 稀释 10倍得到 Regeneration Buffer,4℃保存。

    注意:Equilibration Buffer可依据样本性质进行改变,建议 pH 7-8,NaCl约 150-500 mM。

    实验步骤

    注意:第一次使用前和每次使用后,请将填料再生处理。实验前,将所有溶液和树脂平衡至室温。

    1. 固定重力柱。去掉顶部和底部塞子,此过程中注意避免填料中产生气泡让储存缓冲液流走。将流速控制器开到最大,靠重力作用将保护液流干。
    2. 向柱中加入 5倍柱体积的预冷的 Regeneration Buffer(不要加热,否则会变浑浊),控制流速在 0.25 mL/min,或每分钟小于10滴,Regeneration Buffer流干后再重复两次,确保整个系统中无内毒素。
    3. 再生液流干后,加入 5倍柱体积的 Equilibration Buffer,沿柱管内壁均匀加入,保证清洗柱管的内壁,调节流速为 0. 5 mL/min,流干 Equilibration Buffer,再重复两次。
    4. 平衡结束后,关闭流速控制器。将样品加入重力柱中(推荐样品体积大于 4 mL),控制流速在 0.25 mL/min,或每分钟小于10滴,最初 1.5 mL空体积不接收,使用无热源容器收集流出液。为降低样品的损失,建议样品流完后,加入 2倍柱体积的 Equilibration Buffer,再重复一次,与之前的流出液分别检测内毒素含量及样品回收率。
    5. 如果样品中的内毒素含量仍高于目标值,继续重复上述操作。

    重力柱的保存

    使用 5倍柱体积的 Equilibration Buffer 清洗重力柱。 清洗结束后,加入 1 倍柱体积的 Regeneration Buffer,2-8℃保存,避免冷冻。

    常见问题

    问题原因推荐解决方案
    内毒素去除效率低样品 pH值不在内毒素结合范围内调节样品 pH 在 7-8的范围内
    内毒素去除效率低样品与填料接触时间短降低流速,增加样品接触时间
    内毒素去除效率低去除或检测系统被内毒素污染所有实验用品均需无热源产品
    内毒素去除效率低内毒素与目的蛋白结合较强增加样品在重力柱上操作次数
    内毒素去除效率低样品被污染填料纯化过其他样品 不要用使用过的填料去除不同样品的内毒素
    样品回收率低样品非特异性吸附在填料上增加样品中 NaCl的浓度至 500 mM
    样品回收率低目的蛋白与内毒素结合,一起被去除-

    常见问题

    Q: 纯化试剂盒纯化之后出现低分子量杂带在Input样本中不存在,可能是什么原因?应如何避免?

    A: 小分子杂蛋白是在纯化过程中的靶蛋白降解产物,建议客户纯化过程低温下进行,同时样本采用新鲜样本,同时纯化过程尽量在4度进行,去除保护液和洗杂的流速可适当加快。如有疑问,请联系support@abbkine.com,进行深入探讨。

    Q: 预装柱填料中是否含内毒素?

    A: 本公司的纯化填料中含有微量内毒素,如果客户样品对内毒素有要求,建议用曲拉通将内毒素萃取出来,。

    Q: 纯化之后的样本中如果存在少量低分子量杂带,是什么原因?应如何解决?

    A: 如果低分子量条带在原液中不存在,说明是在纯化过程中,靶蛋白出现降解,建议在低温下进行。去除保护液和洗杂的流速可以快一些,但是上样和洗脱的速度尽量不加快。

    文献引用

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