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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 甘油含量检测试剂盒（微量法）(CheKine™ Micro Glycerol Content Assay Kit) 是一款基于比色法的微量检测工具，可在 505 nm 波长下对动植物组织、细胞、血清（浆）或其他液体样本中的甘油含量进行快速、定量分析。
背景信息
甘油是甘油三酯水解代谢的关键中间产物，其含量变化可直观反映细胞或组织中甘油三酯的分解水平。CheKine™ 甘油含量检测试剂盒（微量法）利用甘油激酶、甘油磷酸氧化酶及过氧化氢酶级联反应：甘油在 ATP 存在下被磷酸化为 3-磷酸甘油，随后氧化生成过氧化氢；过氧化氢与生色底物在过氧化氢酶作用下转化为苯醌亚胺，产物在 505 nm 处产生特征吸收峰。通过测定吸光度即可计算样本中甘油浓度，检测范围为 31.25–2,000 nmol/mL，灵敏度达 31.25 nmol/mL。
细胞代谢研究、脂质代谢通路分析、甘油三酯水解活性评价、药物或营养干预对甘油水平的影响评估。
| 中文名称 | 甘油含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Glycerol Content Assay Kit |
| 产品货号 | KTB2201 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 样本类型 | 动植物组织、细胞、血清（浆）或其他液体 |
| 试剂盒组分 | • Reagent I •Reagent Ⅱ •Reagent Ⅲ •Standard |
| 检测范围 | 31.25-2,000 nmol/mL |
| 灵敏度 | 31.25 nmol/mL |
| 分子 | 甘油 |
| 检测指标 | 甘油 |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | -20℃，避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
Working Reagent I：临用前配制；48 T加入 7 mL Reagent III，96 T加入 14 mL Reagent III，充分溶解待用。用不完的试剂-20℃避光分装保存 1个月，避免反复冻融。
Working Reagent II：临用前配制；48 T 加入 7 mL Reagent III，96 T加入 14 mL Reagent III，充分溶解待用。4℃避光保存可稳定 1个月。
Working Reagent：临用前配制；将Working ReagentⅠ和Working Reagent II 按照 1: 1的比例混合均匀，现配现用。
Reagent III：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。
Standard：即用型；2 µmol/mL甘油标准品；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。使用 2 µmol/mL甘油标准品，按照下表所示，进一步稀释成标准品：
| 序号 | Standard体积（μL） | 去离子水体积（μL） | 浓度（nmol/mL） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 200 μL of 2 µmol/mL Standard | 0 | 2,000 |
| Std.2 | 100 μL of Std.1 (2,000 nmol/mL) | 100 | 1,000 |
| Std.3 | 100 μL of Std.2 (1,000 nmol/mL) | 100 | 500 |
| Std.4 | 100 μL of Std.3 (500 nmol/mL) | 100 | 250 |
| Std.5 | 100 μL of Std.4 (250 nmol/mL) | 100 | 125 |
| Std.6 | 100 μL of Std.5 (125 nmol/mL) | 100 | 62.5 |
| Std.7 | 100 μL of Std.6 (62.5 nmol/mL) | 100 | 31.25 |
| Blank | 0 | 100 | 0 |
注意：每次实验都要做一次标准品检测，制作标曲；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4小时内使用。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1个月。
注意：如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。因异丙醇会导致蛋白变性，样本需另行用去离子水按照步骤提取。
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 505 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在 96孔板或微量玻璃比色皿中操作）：
| 试剂 | 空白孔（μL） | 标准孔（μL） | 对照孔（μL） | 测定孔（μL） |
|---|---|---|---|---|
| 样本 | 0 | 0 | 0 | 20 |
| 异丙醇 | 0 | 0 | 20 | 0 |
| Standard | 0 | 20 | 0 | 0 |
| 去离子水 | 20 | 0 | 0 | 0 |
| Working Reagent | 200 | 200 | 200 | 200 |
3. 立即混匀，记录 505 nm处吸光值 A1，37°C 孵育 10 min。迅速取出记录 10 min时的吸光度 A2，计算ΔA=A2-A1。空白孔记为 A空白，标准孔记为 A标准，测定孔记为 A测定。计算ΔΔA测定=ΔA测定-ΔA对照，ΔΔA标准=ΔA标准-ΔA空白。
注意：对照孔、空白管和标准管只需做 1-2次。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔΔA测定小于 0.004可适当加大样本量。如果ΔΔA测定大于 1,000 nmol/mL的ΔΔA标准，样本可用异丙醇进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
1. 标准曲线的绘制：以标准溶液浓度为 x轴，ΔΔA标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔΔA测定带入方程得到 x (nmol/mL)。
2. 甘油含量的计算：
V样：加入反应体系中样本体积，0.005 mL；V样总：加入异丙醇体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；n：细胞数量，以 106计。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
请等待最新文献信息更新。
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