植物总酚(TP)含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™

注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。

自备耗材

• 酶标仪或可见分光光度计（能测 760 nm处的吸光度）
• 96孔板或微量玻璃比色皿，可调节式移液枪及枪头
• 离心机、超声破碎仪、恒温箱、水浴锅
• 去离子水、60%乙醇
• 粉碎仪（或破壁机）、40目筛

试剂准备

Assay Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Chromogen：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。

注意：Chromogen有一定的刺激性，建议在使用过程中做好个人防护。

Tannin Standard：临用前每管加入 1 mL去离子水溶解，配制成 5 mg/mL Standard备用，4℃避光保存 1周。

标准曲线设置：按下表所示用去离子水将 5 mg/mL单宁酸标准品稀释为 0.5、0.25、0.125、0.0625、0.0313、0.0156、0.0078 mg/mL的标准溶液。

注意：每次实验都要做一次标准品检测，制作标曲；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4小时内使用。

样本制备

注意：样本以新鲜为宜，若不能立刻检测，应储存在-80℃保存 1个月。

1. 植物组织：将样本烘干至恒重，粉碎，过 40目筛之后，称取约 0.1 g，加入 2.5 mL 60%乙醇，用超声提取法进行提取，超声破碎（功率 300 W，破碎 5 s，间歇 8 s，60℃，提取 30 min）。12,000 rpm，25℃，离心 10 min，取上清，用 60%乙醇定容至 2.5 mL，待测。

2. 果汁和蜂蜜等液体样本：直接测定。

提取液中含有使蛋白变性的成分，若按蛋白浓度计算时，需要重新用去离子水提取蛋白进行测定。推荐使用 Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。

实验步骤

1. 酶标仪或可见分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 760 nm，可见分光光度计用去离子水调零。

2. 样本测定（在 96孔板或微量玻璃比色皿中）：

空白孔只需做一个。

注意：实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA 测定小于 0.004可适当加大样本量。如果ΔA 测定大于 1.0，需要将样本用 60%乙醇稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

1. 标准曲线的绘制

以标准溶液浓度为 y轴，ΔA 标为 x轴，绘制标准曲线。

2. 总酚含量计算

根据标准曲线，将ΔA 测带入公式中计算样品浓度 y（mg/mL）。

(1) 按样本质量计算

总酚(mg/g 质量)=y×V 样÷(W×V 样÷V 提取)×n=y×V 提取÷W×n=2.5y÷W×n

(2) 按样本蛋白浓度计算

总酚(mg/mg prot)=y×V 样÷(Cpr×V 样)×n=y÷Cpr×n

(3) 按液体体积计算

总酚(mg/mL)=y×V 样÷V 样×n=y×n

V 样：加入的样本体积，0.01 mL；W：样本质量，g；V 提取：加入提取液体积，2.5 mL；n：稀释倍数；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。

注意：如果需要将mg/mL的单位换算为mg/g可以除以液体的密度。