活性氧(ROS)含量检测试剂盒(荧光法)-CheKine™

Name: 活性氧(ROS)含量检测试剂盒(荧光法)-CheKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTB1910
Price: 398 CNY
Availability: InStock

CheKine™ Reactive Oxygen Species (ROS) Detection Fluorometric Assay Kit

产品货号

KTB1910

产品特点：

采用 10 mM 高纯度 DCFH-DA 探针，信号灵敏，背景低，兼容流式细胞仪与荧光显微镜双平台。

配备 50 mM H₂O₂ 阳性对照，便于快速建立实验体系并验证探针响应。

提供详尽操作步骤与优化建议，支持 15–60 min 灵活探针装载，适配多种细胞类型。

选择规格

50 T

¥398

现货（当天发货）

100 T

¥598

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🎉 限时优惠

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

CheKine™ 活性氧（ROS）含量检测试剂盒（荧光法）是一款基于超灵敏荧光探针 DCFH-DA 的即用型试剂盒，可在活细胞水平快速、可视化地定量活性氧（ROS）水平，广泛兼容流式细胞仪与荧光显微镜，为细胞代谢与氧化应激研究提供高效工具。

活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）是细胞有氧代谢过程中自然生成的副产物，在信号转导与稳态维持中扮演关键角色。当细胞遭遇氧化应激时，ROS 水平急剧升高，过量 ROS 会破坏脂质、蛋白质及 DNA，进而诱发心血管疾病、糖尿病、神经退行性疾病及癌症等多种病理状态。本试剂盒利用膜通透性的 DCFH-DA 探针：探针进入细胞后被酯酶水解为 DCFH，后者在 ROS 存在下被氧化生成强绿色荧光产物 DCF，其荧光强度与细胞内 ROS 含量成正比，从而实现对氧化应激水平的定量评估。

应用领域

适用于细胞水平的氧化应激研究，包括但不限于药物毒性评价、环境应激模型、衰老机制探讨及肿瘤代谢分析等细胞代谢相关实验。

产品参数

中文名称	活性氧(ROS)含量检测试剂盒(荧光法)-CheKine™
英文名称	CheKine™ Reactive Oxygen Species (ROS) Detection Fluorometric Assay Kit
产品货号	KTB1910
检测类型	氧化应激
试剂盒组分	• DCFH-DA (10 mM) •PositiveControl(50mM)
分子	ROS
检测指标	ROS
注意事项	• 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。 • 混合或复溶组分时，避免产生气泡。 • 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。 • 实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 • 阳性对照H2O2一般使用浓度为100 μM （推荐浓度50-200 μM，具体依细胞类型而定）。通常刺激后30 min-4 h可以观察到显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30 min内观察不到活性氧的升高，可延长诱导时间或适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果荧光信号过强，可缩短诱导时间或适当降低活性氧阳性对照的浓度。 • 实验过程中，如果阴性对照细胞荧光也比较强，可以按照1:2000-1:5000 稀释荧光探针DCFH-DA，使DCFH-DA的终浓度为 2-5 μM。探针装载的时间可在15-60 min 内适当进行调整，尽量缩短读片时的曝光时间，并且试验组、对照组曝光时间需保持一致。 • 活性氧阳性对照 (H2O2) 仅仅用于作为阳性对照的样品，并非所有试验组样品中都需加入活性氧阳性对照。 • 探针装载后，一定要洗净未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。 • 尽量缩短探针装载后到检测所用的时间（刺激时间除外），以减少各种可能的误差。
保存建议	收到试剂盒后，请置于-20°C避光保存，该试剂盒的有效期为12个月。试剂盒组分的储存条件，请参考下文“包装清单”。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

流式细胞仪或荧光显微镜
无血清培养基、PBS
37℃恒温二氧化碳细胞培养箱
离心管
可调式移液枪及枪头
6孔板

实验步骤

对于刺激时间较短（通常为 2 h以内）的细胞，建议先装载探针，后用活性氧阳性对照或感兴趣的药物刺激细胞；对于需要较长时间刺激（通常为 6 h以上）的细胞，建议先用活性氧阳性对照或感兴趣的药物刺激细胞，后装载探针，此处仅提供后者的实验方法，具体步骤如下：

1. 原位装载探针 (仅适用于贴壁细胞)

细胞准备：检测前一天细胞铺板，确保检测时细胞数量小于 5×10⁵个/mL。
药物诱导：去除细胞培养液，加入无血清培养基稀释的药物处理细胞，于 37℃细胞培养箱内避光孵育，实际诱导时间根据药物特性和细胞类型决定。
（选做）阳性对照：用无血清培养液稀释 Positive Control (50 mM) 到常用工作浓度 50 μM，加入细胞，37℃避光孵育 30 min-4 h。为提高活性氧水平，不同类型细胞刺激时间存在差异，例如：HeLa细胞需处理 30-60 min。
注意：（1）仅在阳性对照孔中加入，其余试验组不需要加阳性对照。（2）阳性对照推荐初始使用浓度为 50 μM（推荐浓度 50-250 μM，具体依细胞类型而定），工作液要现用现配，不要储存稀释后的溶液，阳性对照也可用不含酚红的 10% FBS完全培养基稀释。
ROS 探针准备：用无血清培养液稀释 DCFH-DA，使其终浓度为 10 μM。
ROS 探针装载：去除处理药物，用无血清培养液洗涤细胞 1-2次，加入适当体积稀释好的 DCFH-DA 工作液。需充分盖住细胞，例如：6孔板通常不少于 1 mL/孔，96孔板通常不少于 100 μL/孔，37℃细胞培养箱内避光孵育 30 min。
细胞清洗：用无血清培养液洗涤细胞 1-2次，以充分去除未进入细胞内的 DCFH-DA。

2. 收集细胞后装载探针 (适用于贴壁细胞和悬浮细胞)

细胞准备：按照标准方法培养细胞，必须保证检测用细胞状态良好。按照适当方法，清洗并收集足量的细胞。
药物诱导：将收集好的细胞悬浮于适量稀释好的药物，于 37℃细胞培养箱内避光孵育，实际诱导时间可根据药物特性和细胞类型决定。
（选做）阳性对照：用无血清培养液稀释 Positive Control (50 mM) 到常用工作浓度 50 μM，加入细胞，37℃避光孵育 30 min-4 h。为提高活性氧水平，不同类型细胞刺激时间存在差异，例如：HeLa细胞需处理 30-60 min。
注意：（1）仅在阳性对照孔中加入，其余试验组不需要加阳性对照。（2）阳性对照推荐初始使用浓度为 50 μM（推荐浓度 50-250 μM，具体依细胞类型而定），工作液要现用现配，不要储存稀释后的溶液，阳性对照也可用不含酚红的 10% FBS完全培养基稀释。
ROS 探针准备：探针装载前，用无血清培养液稀释 DCFH-DA，使其终浓度为 10 μM。
ROS 探针装载：离心收集细胞去除处理药物，并用无血清培养液洗涤细胞 1-2次，离心收集细胞，加入稀释好的探针，使其细胞密度为 1.0×10⁶-2.0×10⁷，37℃细胞培养箱内避光孵育 30 min。
注意：细胞密度需根据后续的检测体系，检测方法以及检测总量来进行调整。例如：对于流式分析，单管检测内细胞数目不少于 10⁴，也不可多于 10⁶。
细胞清洗：用无血清细胞培养液洗涤细胞 1-2次，以充分去除未进入细胞内的 DCFH-DA。

3. 荧光显微拍照

对贴壁生长细胞（步骤 1.f)，细胞清洗后，加适量的无血清细胞培养液或 PBS，在荧光显微镜下观察；对悬浮生长细胞（步骤 2.f)，取 25-50 μL细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。
荧光显微镜下，选用 FITC滤光片观察荧光，去除背景观察荧光的变化。

4. 流式细胞分析操作方法

对贴壁生长细胞（步骤 1.f)，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞（步骤 2.f)，直接收集细胞。用 0.5-1 mL PBS重悬细胞(0.5-1×10⁵/mL)；
流式细胞仪中，488 nm为激发波长，525 nm为发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。

注意事项

阳性对照推荐初始使用浓度为 50 μM（推荐浓度 50-250 μM，具体依细胞类型而定）。通常刺激后 30 min-4 h可以观察到显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后 30 min内观察不到活性氧的升高，可延长诱导时间或适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果荧光信号过强，可缩短诱导时间或适当降低活性氧阳性对照的浓度。
实验过程中，如果阴性对照细胞荧光也比较强，可以按照 1:2,000-1:5,000稀释荧光探针 DCFH-DA，使 DCFH-DA 的终浓度为 2-5 μM。探针装载的时间可在 15-60 min内适当进行调整，尽量缩短读片时的曝光时间，并且试验组、对照组曝光时间需保持一致。
Positive Control (50 mM) 仅仅用于作为阳性对照的样品，并非所有试验组样品中都需加入活性氧阳性对照。
探针装载后，一定要洗净未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
尽量缩短探针装载后到检测所用的时间（刺激时间除外），以减少各种可能的误差。

常见问题

Q: 怎么设置酶标仪

A: 选择多功能酶标仪-检测方式选择“Flourescene Intensity"-Ex/Em=488/525 nm-Gain “Manual 65”-Intreration time “20 μs"

Q: 该类试剂盒一般什么单位用的多？

A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。

Q: 该类试剂盒做过哪些实验材料的验证？

A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。