人促卵泡激素 ELISA定量试剂盒-EliKine™

自备耗材

• 酶标仪（能测 450 nm处的吸光度）
• 多通道移液器或自动洗板机
• 恒温箱、低温离心机
• 可调节式移液枪及枪头
• 去离子水

试剂准备

注意：提前 20 min从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。如果浓缩试剂有结晶析出，轻轻加热直至完全溶解。

1×Wash buffer:用去离子水 1：20稀释Wash buffer( 20×)得到 1×Wash buffer，4℃保存。

样本制备

1. 血清：使用血清分离管，让样品在室温下凝结 30 min，然后 1,000 g 离心 15 min。 取上层血清立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。
2. 血浆：使用 EDTA、肝素或柠檬酸盐作为抗凝剂收集血浆。 在收集后 30 min内 1,000 g离心 15 min。立即测定或分装-20℃保存，避免反复冻融。

注意：不要使用严重溶血或脂血的标本。样品应分装-20℃保存，避免人 FSH失活。如果样品要在 24 h内使用，则可以将其储存在2至 8℃。 避免反复冻融。测定前，应将冷冻样品缓慢升至室温并轻轻混合。

实验步骤

1. 从板框上取下多余的板条，将它们放回装有干燥剂包的铝箔袋中，然后重新密封。
2. 每孔加入 50 μL Human FSH Standard或样品。建议所有标准品和样品做复孔。设置一个不加任何溶液空白孔。
3. 每孔加入 50 μL FITC Conjugated Human FSH Antibody（空白孔不加）。混匀，保证步骤 2、3连续加样，不要间断。加样过程在 15 min内完成。给酶标板覆膜，37℃孵育 1 h。
4. 除去每孔中的液体并洗涤，重复该过程总共洗涤三次。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 250 μL 1×Wash buffer进行洗涤，然后静置 10 s。完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1×Wash buffer。
5. 每孔加入 100 μL Human FSH Detect Antibody（空白孔不加），混匀，给酶标板覆膜，37℃孵育 0.5 h。
6. 除去每孔中的液体并洗涤，重复该过程总共洗涤三次。使用多通道移液器或自动清洗机每孔加入 250 μL 1×Wash buffer进行洗涤，然后静置 10 s。完全去除液体对于获得良好性能至关重要。最后一次洗涤后，倒置酶标板并用干净的纸巾吸干以除去任何剩余的 1×Wash buffer。
7. 每孔加入 50 μL HRP substrate A和 50 μL HRP substrate B，混匀，给酶标板覆膜，37℃避光孵育 15 min，远离气流和其他温度波动。
8. 每孔加入 50 μL Stop Solution，Stop Solution应按照与 HRP substrate相同的顺序加到板中。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色为绿色或颜色变化不均匀，请轻轻敲击板以确保彻底混合。
9. 30 min内测定每孔 450 nm处的吸光值（OD）。

结果计算

1. 计算每个标准品和样品的复孔平均 OD值并减去 0浓度标准品（Std1）平均 OD值。
2. 标准曲线的绘制：以各标准品的平均 OD值为 x轴，标准溶液浓度为 y轴，绘制标准曲线。可以使用计算机软件来创建标准曲线。