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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 琥珀酸脱氢酶（SDH）活性检测试剂盒（微量法）是一款专为微量样本设计的比色法试剂盒，可快速测定细胞、动物/植物组织及真菌中琥珀酸脱氢酶（SDH）活性，帮助研究者精准评估三羧酸循环（TCA cycle）功能。
琥珀酸脱氢酶（SDH）是线粒体内膜上的关键膜结合酶，既是三羧酸循环的限速酶之一，也是呼吸链复合体Ⅱ的核心组分。它催化琥珀酸氧化为延胡索酸，同时将电子经FAD传递给辅酶Q，从而连接氧化磷酸化与电子传递。SDH 活性直接反映细胞能量代谢状态，广泛用于细胞代谢、线粒体功能及疾病机制研究。本试剂盒利用比色法检测SDH催化反应中底物转化所引起的吸光度变化，通过ΔA值计算酶活力。
细胞代谢研究、线粒体功能评估、能量代谢疾病模型构建、药物筛选及植物逆境生理研究等。
| 中文名称 | 琥珀酸脱氢酶(SDH)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Succinate Dehydrogenase（SDH) Activity Assay Kit |
| 产品货号 | KTB1230 |
| 检测类型 | 三羧酸循环 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 试剂盒组分 | • Extraction Buffer • Extraction BufferⅡ • ReagentⅠ • ReagentⅡ |
| 分子 | SDH |
| 检测指标 | SDH |
| 注意事项 | • 测定管的 ΔA应在0.01-0.3之间，若测定管的ΔA大于0.3，需将样本进行稀释。 • 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。 • 混合或复溶组分时，避免产生气泡。 • 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。 • 实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 • 测定过程中样本和所有试剂在冰上放置，以免变性和失活。 • 因通过单位时间内吸光值变化计算酶活，不推荐同时测多个样本。 • 推荐使用样本蛋白浓度计算酶活，若用样本质量计算，则需加测胞浆提取物酶活，上清和沉淀酶活之和方为总酶活。 • 尽量用新鲜样本提取SDH，以保证酶的活力。 • Reagent Ⅲ有少许沉淀属正常现象，如对结果有影响，请过滤。 • 如果吸光度太高，可以减少组织质量，如果吸光度太低，可以减少Extraction Buffer体积。 |
| 保存建议 | 该试剂盒的有效期为6个月；试剂盒组分的储存条件，请参考下文“包装清单”。 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
| 试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 |
|---|---|---|
| 96 T | Extraction BufferⅠ 60 mL×2 | 4℃ |
| 96 T | Extraction BufferⅡ 1.5 mL | -20℃，避光保存 |
| 96 T | ReagentⅠ Powder×1 vial | 4℃，避光保存 |
| 96 T | ReagentⅡ Powder×1 vial | -20℃，避光保存 |
Extraction BufferⅠ：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Extraction BufferⅡ：即用型；-20℃避光保存。
ReagentⅠ：临用前配制，加入 21.6 mL去离子水，未用完的试剂请 4℃避光保存 1个月。
注意：ReagentⅠ有少许沉淀属正常现象，如对结果有影响，请过滤。
ReagentⅡ：临用前配制，加入 1.2 mL去离子水，未用完的工作液请分装-20℃避光保存 1个月，避免反复冻融。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1个月。处理好的样本须当天检测。测定过程中样本和所有试剂在冰上放置，以免变性和失活。
称取约 0.1 g组织，加入 1 mL Extraction BufferⅠ和 10 μL Extraction BufferⅡ，冰浴匀浆，11,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
收集 500万细胞或细菌到离心管内，用冷 PBS清洗细胞或细菌，离心后弃上清，加入 1 mL Extraction BufferⅠ和 10 μL Extraction BufferⅡ，冰浴超声波破碎细胞或细菌 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次），然后 11,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
酶标仪或可见分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 605 nm，可见分光光度计用去离子水调零。
ReagentⅠ在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴提前预热 10 min。
在 96孔板或微量玻璃比色皿中依次加入 10 µL样本、180 µL ReagentⅠ和 10 µL ReagentⅡ，迅速混匀后于 605 nm检测，记录 20 s为 A1，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）孵育 5 min，记录 5 min 20 s的吸光值为 A2，计算ΔA=A1-A2。
注意：实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA小于 0.001可适当加大样本量或延长反应时间 10-15 min。如果ΔA大于 0.3，样本可用 Extraction BufferⅠ进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
单位的定义：在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）中，每 g组织在反应体系中每分钟催化 1 nmol 2,6-二氯靛酚定义为一个酶活力单位。
SDH (U/g 质量)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W÷V 提取×V 样本)÷T=384.76×ΔA÷W
单位的定义：在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）中，每 1万个细胞和细菌在反应体系中每分钟催化 1 nmol 2,6-二氯靛酚定义为一个酶活力单位。
SDH (U/104)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样本÷V 提取×500)÷T=0.77×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：2,6-二氯靛酚摩尔消光系数，2.1×104 L/mol/cm；d：0.5 cm；V 样本：加入样本体积，0.01 mL；V 提取：加入提取液体积，1.01 mL；T：反应时间，5 min；W：样品质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
将上述计算公式中的光径 d:0.5 cm调整为 d:1 cm进行计算即可。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
杂志名称: Phytomedicine | 作者: Sun H J, Zheng G L, Wang Z C
IF: 8 | 发表时间: 2024
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