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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 氨基酸（AA）含量检测试剂盒（微量法）是一款基于比色法的微量检测工具，专为快速、稳定地定量血清、血浆、动植物组织、动物细胞、尿液及其他生物液体中总游离氨基酸含量而设计。该试剂盒通过特异性显色反应，将氨基酸浓度与吸光度变化直接关联，适用于常规实验室对细胞代谢状态的快速评估。
背景信息
氨基酸是细胞氮代谢的核心分子，其水平直接反映机体氮平衡及肝、肾等关键器官的功能状态。在动物模型中，尿液氨基酸谱的变化常被用作肝肾损伤的早期敏感指标；在植物研究中，氨基酸含量可揭示不同生长阶段或胁迫条件下氮素的吸收、转运与同化效率。CheKine™ 氨基酸检测试剂盒通过微量比色法，将这一关键代谢指标转化为可量化的实验数据，为细胞代谢、营养生理及病理机制研究提供可靠依据。
应用领域
细胞代谢研究｜动物细胞培养上清氨基酸消耗/分泌监测｜植物氮素营养评价｜肝肾疾病模型尿液氨基酸谱分析｜发酵过程氨基酸积累监控｜营养学与药物干预效果评估
| 中文名称 | 氨基酸(AA)含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Amino Acid (AA) Assay Kit |
| 产品货号 | KTB1460 |
| 检测类型 | 氨基酸代谢 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 试剂盒组分 | • Extraction Buffer • Assay Buffer • Substrate • Standard（10 mg 半胱氨酸） |
| 检测范围 | 0.625-40 μmol/mL |
| 灵敏度 | 0.5 μmol/mL |
| 分子 | AA |
| 检测指标 | AA |
| 注意事项 | • 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用。 • 混合或复溶组分时，避免产生气泡。 • 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。 • 实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | 4℃保存12个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
| 试剂盒组分 | 规格（96 T） | 储存条件 |
|---|---|---|
| Extraction Buffer | 100 mL | 4℃ |
| Assay Buffer | 10 mL | 4℃ |
| Substrate Powder×1 vial | - | 4℃，避光保存 |
| Standard（10 mg半胱氨酸） Powder×1 vial | - | 4℃，避光保存 |
Assay Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Working Substrate：临用前配制，加入 4 mL 95%乙醇充分溶解，未用完的已溶解的 Substrate可 4℃避光保存一周。若需长期保存，分装后-20℃避光保存 1个月，避免反复冻融。
注意：Assay Buffer和 Substrate有毒且有刺激性气味，建议在通风橱进行实验。
Standard：临用前配制，加 2.066 mL去离子水，充分溶解得到 40 μmol/mL标准品，未用完的已溶解的 Standard可 4℃避光保存一周。若需长期保存，分装后-20℃避光保存 1个月，避免反复冻融。
用去离子水将 40 μmol/mL标准品稀释至 20、10、5、2.5、1.25、0.625 µmoL/mL，如下表所示。
| 序号 | 标准品体积 | 去离子水体积（µL） | 标准品浓度 |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 200 µL of 40 μmol/mL | 0 | 40 μmol/mL |
| Std.2 | 100 µL of Std.1（40 μmol/mL） | 100 | 20 μmol/mL |
| Std.3 | 100 µL of Std.2（20 μmol/mL） | 100 | 10 μmol/mL |
| Std.4 | 100 µL of Std.3（10 μmol/mL） | 100 | 5 μmol/mL |
| Std.5 | 100 µL of Std.4（5 μmol/mL） | 100 | 2.5 μmol/mL |
| Std.6 | 100 µL of Std.5（2.5 μmol/mL） | 100 | 1.25 μmol/mL |
| Std.7 | 100 µL of Std.6（1.25 μmol/mL） | 100 | 0.625 μmol/mL |
注意：每次实验都要做一次标准品检测，制作标曲；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在 4小时内使用。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1个月。
称取约 0.1 g样本，加入 1 mL Extraction Buffer，室温下充分匀浆，转移到 1.5 mL EP管中，盖紧后（防止水分散失）置于沸水浴 15 min；自来水冷却后，10,000 rpm，室温离心 10 min，取上清液，待测。
称取约 0.1 g样本，加入 1 mL Extraction Buffer捣碎，室温超声波破碎 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次），转移到 1.5 mL EP管中，盖紧后（防止水分散失）置于沸水浴 15 min；自来水冷却后，10,000 rpm，室温离心 10 min，取上清液，待测。
收集 500万细胞或细菌到离心管内，用冷 PBS清洗细胞，离心后弃上清，加入 1 mL Extraction Buffer，室温超声波破碎 5 min（功率 20%或 200 W，超声 3 s，间隔 7 s，重复 30次），转移到 1.5 mL EP管中，盖紧后（防止水分散失）置于沸水浴 15 min；自来水冷却后，10,000 rpm，室温离心 10 min，取上清液，待测。
吸取 0.5 mL液体加入 0.5 mL Extraction Buffer，盖紧后（防止水分散失）置于沸水浴 15 min；自来水冷却后，10,000 rpm，室温离心 10 min，取上清液，待测。
注意：如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。
1. 酶标仪或可见分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 570 nm，可见分光光度计用去离子水调零。
2. 样本测定（在 EP管中依次加入下列试剂）：
| 试剂名称 | 空白管（μL） | 标准管（μL） | 测定管（μL） |
|---|---|---|---|
| 去离子水 | 10 | 0 | 0 |
| 不同浓度 Std. | 0 | 10 | 0 |
| 样本 | 0 | 0 | 10 |
| Working Substrate | 20 | 20 | 20 |
| Assay Buffer | 50 | 50 | 50 |
3. 混匀后盖紧瓶盖（防止水分散失），置于沸水浴中保温 5 min，自来水冷却 10秒钟后加入 120 μL 60%乙醇，反复颠倒 EP管数次，每管取出 150 μL加入 96孔板或微量玻璃比色皿对应的孔中，于 570 nm测定吸光值，记为 A 空白、A 标准、A 测定，计算ΔA 测定=A 测定-A 空白、ΔA 标=A 标准-A 空白（空白管只需做 1管），显色后务必在 30 min内测完。
注意：实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验，如果 A 测定大于 2.0，样本可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数。脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应在 570 nm处无吸收峰，因此，570 nm处测定结果不含这两种氨基酸的量。
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
以标准液浓度为 y轴，ΔA 标为 x轴绘制标准曲线。将ΔA 测代入标准曲线公式计算出 y (μmol/mL)。
(1) 按样本质量计算
(2) 按蛋白浓度计算
(3) 按细菌或细胞数量计算
(4) 按液体体积计算
W：样本质量，g；V 提取，加入 Extraction Buffer体积，1 mL；n：样本的稀释倍数；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；500：细菌或细胞总数，500万个；2：提取液体时的稀释倍数，(0.5 mL+0.5 mL)/0.5 mL=2。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
杂志名称: Microbiome | 作者: Wang, Jia-Lin, et al.
IF: 16 | 发表时间: 2023
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