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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 脯氨酸（PRO）含量检测试剂盒（微量法）是一款基于比色法设计的微量检测工具，可在96孔UV微孔板中快速测定植物组织、动物组织、细胞、细菌、血清（浆）等生物样本中游离脯氨酸（Pro）的含量，为细胞代谢与逆境生理研究提供可靠数据。
脯氨酸（Pro）是一种广泛分布于动物、植物、微生物及培养细胞中的氨基酸，在干旱、盐渍、低温等逆境胁迫下，植物体内Pro含量会显著升高。Pro的积累量与植物的抗逆能力呈正相关，因此常被用作抗旱育种及逆境生理研究的生理指标。CheKine™ 试剂盒通过特异性显色反应，使Pro与显色剂在Assay Buffer I作用下生成可在特定波长下检测的有色产物，其吸光度与样本中Pro浓度成正比，从而实现0.5–80 μg/mL范围内的精确定量。
本试剂盒适用于细胞代谢研究、植物逆境生理与抗逆育种、微生物渗透调节机制探索，以及动物细胞应激反应分析等方向。
| 中文名称 | 脯氨酸(PRO)含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Proline (PRO) Assay Kit |
| 产品货号 | KTB1430 |
| 检测类型 | 氨基酸代谢 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 试剂盒组分 | • Extraction Buffer • Assay Buffer I • Chromogen • Pro标准品 |
| 检测范围 | 0.5-80 μg/mL |
| 灵敏度 | 0.5 μg/mL |
| 分子 | PRO |
| 检测指标 | PRO |
| 注意事项 | • 需用96孔UV微孔板。 • 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用。 • 勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。 • 混合或复溶组分时，避免产生气泡。 • 实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | 收到货后，请避光保存于4℃。请参阅说明书中各个组件的存储条件，自发货之日起，按照推荐的保存条件，有效期为6个月。 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
| 试剂盒组分 | 规格 | 储存条件 |
|---|---|---|
| Extraction Buffer | 60 mL (48 T) / 120 mL (96 T) | 4℃ |
| Assay Buffer | 7 mL (48 T) / 14 mL (96 T) | 4℃ |
| Chromogen | 7 mL (48 T) / 14 mL (96 T) | 4℃，避光保存 |
| PRO Standard Powder | ×1 vial (10 mg) | 4℃，避光保存 |
Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Assay Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Chromogen：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
PRO Standard：临用前，称取 1 mg的 PRO Standard，加入 0.1 mL去离子水，充分溶解，获得 10 mg/mL标准液，4℃避光保存。
剩余的试剂，置于 4℃避光条件下可保存 3天。10 mg粉末需分批称量溶解。
取 10 µL 10 mg/mL PRO Standard用 990 µL去离子水稀释至 100 µg/mL。然后按下表所示，用去离子水进一步稀释标准液：
| 序号 | 100 µg/mL标准液体积（µL） | 去离子水体积（µL） | 浓度（µg/mL） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 160 | 40 | 80 |
| Std.2 | 80 | 120 | 40 |
| Std.3 | 40 | 160 | 20 |
| Std.4 | 20 | 180 | 10 |
| Std.5 | 8 | 192 | 4 |
| Std.6 | 4 | 196 | 2 |
| Std.7 | 2 | 198 | 1 |
| Std.8 | 1 | 199 | 0.5 |
| Blank | 0 | 200 | 0 |
1. 植物或动物组织样本：称取约 0.1 g组织，加入 1 mL Extraction Buffer，冰浴匀浆；之后置沸水浴提取 10 min，10,000 g，常温离心 10 min，取上清，冷却后待测。
2. 细菌或细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清；按照每 500万细菌或细胞加入 1 mL Extraction Buffer，超声波破碎细菌或细胞 5 min（功率 20%，超声 3秒，间隔 10秒，重复 30次），之后置沸水浴振荡提取 10 min；10,000 g，常温离心 10 min，取上清，冷却后待测。
3. 血清（浆）样本：取 0.1 mL血清（浆），加 0.9 mL Extraction Buffer ，充分混匀，之后置沸水浴振荡提取 10 min，10,000 g，常温离心 10 min，取上清，冷却后待测。
1. 酶标仪或可见分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 520 nm，可见分光光度计用去离子水调零。
2. 操作表：
| 试剂 | 标准管（µL） | 空白管（µL） | 测定管（µL） |
|---|---|---|---|
| Sample | 0 | 0 | 100 |
| Different Concentration Std. | 100 | 0 | 0 |
| 去离子水 | 0 | 100 | 0 |
| Assay Buffer | 100 | 100 | 100 |
| Chromogen | 100 | 100 | 100 |
将以上溶剂按顺序加入有盖 EP管中，混匀，沸水浴 30 min（盖紧，防止水分散失），每 10 min振荡一次。冷却至室温。
| 试剂 | 标准管（µL） | 空白管（µL） | 测定管（µL） |
|---|---|---|---|
| 甲苯 | 200 | 200 | 200 |
振荡 30 s，静置片刻；吸取 100 µL上层溶液于 96孔板或微量玻璃比色皿中，于 520 nm处测定吸光值，记录吸光值 A。计算ΔA测定=A测定-A空白，ΔA标准=A标准-A空白。
1. 标准曲线的绘制：以标准溶液浓度为 y轴，ΔA标准为 x轴，绘制标准曲线。
2. 脯氨酸（PRO）含量计算：根据标准曲线，将ΔA测定带入公式，计算样品浓度 y (µg/mL)。
(1) 按样本蛋白浓度计算
PRO (µg/mg prot)=y×V反总÷(V样×Cpr)=3×y÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
PRO (µg/g 鲜重)=y×V反总÷(V样÷V样总×W)=3×y÷W
(3) 按细胞/细菌数量计算
PRO (μg/104)=y×V反总÷(500×V样÷V样总)=3×y÷500
(4) 按液体样本的体积计算
PRO (µg/mL)=y×V反总÷V样=3×y
V反总：反应体系总体积，300 µL=0.3 mL；V样：加入反应体系中上清液体积，100 μL=0.1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；V样总：提取体系体积，1 mL；W：样本鲜重，g；500：细胞/细菌数量，5×106。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
杂志名称: Oncogene | 作者: Geng, Xiaofang, et al.
IF: 7.300 | 发表时间: 2025
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