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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 谷丙转氨酶（ALT/GPT）活性检测试剂盒（微量法）是一款基于比色法的微量酶活检测工具，专为快速、定量测定生物样本中谷丙转氨酶活性而设计，适用于动物组织、植物组织、血清、细胞及细菌等多种样本类型。
ALT/GPT 广泛分布于动物、植物、微生物及培养细胞中，催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的可逆氨基转移反应，是氨基酸代谢网络中的关键限速酶之一。血清 ALT 活性升高通常提示肝细胞膜通透性改变或细胞坏死，因此被视为肝脏损伤的敏感生化标志物；同时，ALT 在心肌细胞中含量最高，其活性变化亦可作为心肌梗塞、心肌炎等心血管疾病的辅助诊断指标。本试剂盒通过丙氨酸与α-酮戊二酸在ALT作用下生成丙酮酸与谷氨酸，再利用后续显色反应测定丙酮酸含量，从而间接反映ALT活性，整个反应在微量体系内完成，节省样本与试剂。
应用领域：细胞代谢研究、肝脏损伤模型评估、植物逆境生理研究、微生物发酵过程监控、药物毒性筛选等。
| 中文名称 | 谷丙转氨酶(ALT/GPT)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Alanine Aminotransferase (ALT/GPT) Activity Assay Kit |
| 产品货号 | KTB1410 |
| 检测类型 | 氨基酸代谢 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 试剂盒组分 | • Extraction Buffer • Reagent I • Reagent II • Reagent III • Standard |
| 分子 | ALT/GPT |
| 检测指标 | ALT/GPT |
| 注意事项 | • 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用。 • 样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，匀浆液避免反复冻融。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | 收到货后，请参阅说明书中各个组件的存储条件，自发货之日起，按照推荐的保存条件，有效期为6个月。 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
| 试剂盒组分 | 规格（96 T） | 储存条件 |
|---|---|---|
| Extraction Buffer | 60 mL×2 | -20℃ |
| ReagentⅠ | 5 mL | -20℃ |
| ReagentⅡ | 4 mL | -20℃，避光保存 |
| ReagentⅢ | 30 mL | -20℃ |
| Standard | 1 mL | -20℃ |
Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；-20℃保存。
ReagentⅠ：即用型；使用前，平衡到室温；-20℃保存。
ReagentⅡ：即用型；使用前，平衡到室温；-20℃避光保存。
ReagentⅢ：即用型；使用前，平衡到室温；-20℃保存。
Standard：即用型；使用前，平衡到室温；-20℃保存。
按下表混合 Standard和 ReagentⅠ，得到相应浓度的标准孔。
| Standard（μL） | ReagentⅠ（μL） | Standard浓度（μmol/mL） |
|---|---|---|
| 22.5 | 7.5 | 1.5 |
| 15 | 15 | 1 |
| 12 | 18 | 0.8 |
| 6 | 24 | 0.4 |
| 3 | 27 | 0.2 |
| 1.5 | 28.5 | 0.1 |
| 0.75 | 29.25 | 0.05 |
| 0 | 30 | 0 |
注意：每次实验，请使用新配制的标准品；配制好的标准品需要在 4 h之内使用。
注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1个月。
注意：如需样本蛋白浓度测定，推荐使用 Abbkine BCA法蛋白质定量试剂盒，货号为 KTD3001。该试剂盒提取的样本也可以适用于 KTB1420（谷草转氨酶）的测定。
| 试剂 | 测定孔（μL） | 对照孔（μL） | 标准孔（μL） |
|---|---|---|---|
| 样本 | 5 | 0 | 0 |
| ReagentⅠ | 25 | 25 | 0 |
| 不同浓度 Std. | 0 | 0 | 30 |
混匀后，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）预热 30 min
| 试剂 | 测定孔（μL） | 对照孔（μL） | 标准孔（μL） |
|---|---|---|---|
| ReagentⅡ | 25 | 25 | 25 |
| 样本 | 0 | 5 | 0 |
混匀后，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）准确反应 20 min
| 试剂 | 测定孔（μL） | 对照孔（μL） | 标准孔（μL） |
|---|---|---|---|
| ReagentⅢ | 240 | 240 | 240 |
混匀，室温静置 10 min，在 505 nm波长处测定各孔的 OD值，记为 OD 测定、OD 对照、OD 标准, 计算ΔOD 测定=OD 测定-OD 对照、ΔOD 标准=OD 标准-OD 空白。
注意：1. 每个样本均需要做对照孔。0 µmol/mL标准孔为空白孔。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。2. 如果ΔOD 测大于浓度为 1.5 μmol/mL标准品的ΔOD 标，则需要用 Extraction Buffer稀释样本后，重新检测。如果样本的ΔOD测低于0.05 μmol/mL标准品的ΔOD 标，可提高样本量。
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
标准曲线的绘制：
以标准液浓度为 y轴，ΔOD 标准为 x轴，绘制标准曲线。将ΔOD 测定带入方程计算出 y (µmol/mL)。
单位定义：每小时每 mL血清（浆）样品催化产生 1 µmol丙酮酸的量为一个 GPT活力单位。
GPT(U/mL)=y×(V 样本+VReagentⅠ)÷V 样本÷T=12y
单位定义：每小时每 mg组织蛋白催化产生 1 µmol丙酮酸的量为一个 GPT活力单位。
GPT(U/mg prot)=y×(V 样本+VReagentⅠ)÷(Cpr × V 样本)÷T=12y÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
单位定义：每小时每 g鲜重样品催化产生 1 µmol丙酮酸的量为一个 GPT活力单位。
GPT(U/g 鲜重)=y×(V 样本+VReagentⅠ)÷(W×V 样本÷V 样总)÷T=12y÷W
单位定义：每小时每 104个细菌或细胞催化产生 1 µmol丙酮酸的量为一个 GPT活力单位。
GPT(U/104 )=y×(V 样本+VReagentⅠ)÷(500÷V 样本÷V 样总)÷T=0.024y
V 样本：样本体积，0.005 mL；VReagentⅠ：加入 RegentⅠ体积，0.025 mL；V 样总：Extraction Buffer体积，1 mL；W：样本鲜重，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；T：反应时间，0.5 h；500：细菌或细胞总数量，500万个。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
杂志名称: Journal of nanobiotechnology | 作者: Cui, Chenyang, et al.
IF: 12.600 | 发表时间: 2025
杂志名称: European Journal of Pharmacology | 作者: Wu, Min, et al.
IF: 4 | 发表时间: 2024
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