顺乌头酸酶(ACO)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™

Name: 顺乌头酸酶(ACO)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
Brand: Abbkine
SKU: KTB1290
Price: 678 CNY
Availability: InStock

CheKine™ Micro Aconitase (ACO) Activity Assay Kit

产品货号

KTB1290

产品特点：

兼容血清、血浆、动植物组织、细胞及多种生物体液，满足不同样本类型需求

微量法设计，仅需96孔UV微孔板即可高通量检测，节省样本与试剂

提供完整组分（Extraction Buffer及ReagentⅠ-Ⅵ）与详细操作指南，简化实验流程

配套样品制备与结果计算方法，确保数据可追溯性与重复性

选择规格

48 T/48 S

¥678

现货（次日发货）

96 T/96 S

¥898

现货（次日发货）

🎉 限时优惠

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

亚科因生物研发的CheKine™ 顺乌头酸酶(ACO)活性检测试剂盒（微量法）是一款基于比色法的微量酶活测定工具，可在96孔UV微孔板内快速检测生物样本中顺乌头酸酶(ACO)的催化活性，为研究细胞三羧酸循环(TCA cycle)代谢通量提供可靠数据。

顺乌头酸酶(aconitase)位于线粒体基质，是三羧酸循环的关键限速酶之一，负责将柠檬酸通过脱水-加水反应转化为更易氧化的异柠檬酸，从而推动后续氧化脱羧步骤。该酶活性直接反映细胞有氧呼吸效率，是细胞能量代谢、氧化应激及铁硫簇稳态研究的重要指标。本试剂盒利用酶促反应生成的产物在特定波长下的吸光度变化，实现ACO活性的定量分析。

应用领域

适用于细胞代谢研究、线粒体功能评估、肿瘤代谢重编程、植物逆境生理及药物筛选等方向，特别推荐用于检测细胞模型中TCA循环通量变化。

产品参数

中文名称	顺乌头酸酶(ACO)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™
英文名称	CheKine™ Micro Aconitase (ACO) Activity Assay Kit
产品货号	KTB1290
检测类型	三羧酸循环
检测方法	比色法
试剂盒组分	• Extraction Buffer •ReagentⅠ •ReagentⅡ •ReagentⅢ •ReagentⅣ •ReagentV •ReagenVI
分子	ACO
检测指标	ACO
注意事项	• 需用96孔UV微孔板。 • 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用。 • 样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，匀浆液避免反复冻融。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。
保存建议	建议收到货后避光保存于-20°C，有效期为6个月。请参考说明书中各个组分的最佳保存条件进行储存。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

酶标仪或紫外分光光度计（能测 340 nm处的吸光度）
96孔 UV板或微量石英比色皿、可调节式移液枪及枪头
制冰机、低温离心机、水浴锅
去离子水
匀浆器（如果是组织样本）

试剂盒组分

试剂盒组分	规格	储存条件
Extraction Buffer	60 mL (48 T) 60×2 mL (96 T)	4℃
ReagentⅠ	12 mL (48 T) 24 mL (96 T)	4℃
ReagentⅡ	0.75 mL (48 T) 1.5 mL (96 T)	-20℃，避光保存
ReagentⅢ	10 mL (48 T) 20 mL (96 T)	4℃
ReagentⅣ	Powder×1 vial (48 T) Powder×1 vial (96 T)	-20℃，避光保存
ReagentV	Powder×1 vial (48 T) Powder×1 vial (96 T)	-20℃，避光保存
ReagenⅥ	Powder×1 vial (48 T) Powder×1 vial (96 T)	-20℃，避光保存

试剂准备

Extraction Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
ReagentⅠ：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
ReagentⅡ：即用型；使用前，平衡到室温；-20℃避光保存。

注意：ReagentⅡ有毒且有刺激性气味，建议在通风橱进行实验。

ReagentⅢ：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
ReagentⅣ：临用前配制，对于 48 T，加入 2.5 mL去离子水，对于 96 T，加入 5 mL去离子水，充分混匀待用。未用完的试剂-20℃避光保存一周，避免反复冻融。
ReagentV：临用前配制，对于 48 T，加入 0.75 mL去离子水，对于 96 T，加入 1.5 mL去离子水，充分混匀待用。未用完的试剂-20℃避光保存一周，避免反复冻融。
Working ReagentⅥ：临用前配制，对于 48 T，ReagentⅥ加入 7.2 mL ReagentⅢ，对于 96 T，ReagentⅥ加入 14.4 mL ReagentⅢ，充分混匀待用。未用完的试剂-20℃避光保存一周，避免反复冻融。
Working Solution：现配现用，对于 48 T，7.2 mLWorking ReagentⅥ加入 0.6 mL去离子水、0.6 mL ReagentⅢ、0.6 mL ReagentⅣ、0.6 mL ReagentV；对于 96 T，14.4 mLWorking ReagentⅥ加入 1.2 mL去离子水、1.2 mL ReagentⅢ、1.2 mL ReagentⅣ、1.2 mL ReagentV，充分混匀待用。未用完的试剂-20℃避光保存，可保存一周。

样本制备

注意：推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存 1个月。测定过程中样本和所有试剂在冰上放置，以免变性和失活。

血清（浆）样本：直接检测。
组织和细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的提取：
1. 称取约 0.1 g组织或收集 500万个细胞，加入 1 mL Extraction Buffer和 10 μL ReagentⅡ，冰浴匀浆，600 g，4℃离心 5 min，收集上清至新的离心管中，舍弃沉淀。
2. 再次离心上清，11,000 g，4℃离心 10 min，分别得到上清和沉淀。
3. （选做）第(2)步的上清液即胞浆提取物，可用于直接测定从线粒体泄漏的 ACO。
4. 在第(2)步的沉淀中，加入 200 μL Reagent I和 2 μL ReagentⅡ混匀，用于线粒体 ACO测定。

注意：

建议实验之前选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。若样本放置时间较久或操作习惯的影响等，导致上清中含量较多，则必须检测上清。
该试剂盒的 Extraction Buffer与 KTB1270、KTB1280、KTB1240、KTB1230、KTB1250、KTB1023相同，该试剂盒提取的样本也可以适用于 KTB1270、KTB1280、KTB1240、KTB1230、KTB1250、KTB1023的测定。

实验步骤

酶标仪或紫外分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 340 nm。紫外分光光度计用去离子水调零。
Working Solution于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）孵育 10 min。
在 96孔 UV板或微量石英比色皿中加入 40 μL样本和 160 μLWorking Solution，迅速混匀后于 340 nm检测，记录 20 s和 3 min 20 s的吸光值，分别记为 A1和 A2，计算ΔA=A2-A1。

注意：若样本吸光值ΔA大于 0.5，建议用 ReagentⅠ进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数。因通过单位时间内吸光值变化计算酶活，不推荐同时测多个样本。

结果计算

注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

A. 使用 96孔 UV板测定的计算公式

1. 按血清（浆）计算

单位的定义：每毫升血清（浆）在反应体系中每分钟生成 1 nmol的 NADH定义为一个酶活力单位。

ACO活性(U/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷V 样÷T=535.90×ΔA

2. 按样本鲜重计算

单位的定义：每 g组织在反应体系中每分钟生成 1 nmol的 NADH 定义为一个酶活力单位。

ACO 上清活性(U/g 鲜重)=[ΔA 上清×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V 样÷V 提取×W)÷T=541.26×ΔA 上清÷W

ACO 沉淀活性(U/g 鲜重)=[ΔA 沉淀×V 反总 ÷(ε×d)×10⁹]÷(V 样÷V 样总×W)÷T=108.25×ΔA 沉淀÷W

总 ACO活性(U/g 鲜重)=ACO 上清活性+ACO 沉淀活性=541.26×ΔA 上清÷W+108.25×ΔA 沉淀÷W

3. 按细胞密度计算

单位的定义：每 1万个细胞在反应体系中每分钟生成 1 nmol的 NADH 定义为一个酶活力单位。

ACO活性(U/10⁴ cells)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×10⁹]÷(V 样÷V 样总×500)÷T=0.216×ΔA

参数说明：

V 反总：反应体系总体积，2×10^-4 L
ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ mol/L/cm
d：0.5 cm
V 样：加入样本体积，0.04 mL
T：反应时间，3 min
ΔA 上清：上清测定值
V 提取：加入提取液体积，1.01 mL
W：样品质量，g
ΔA 沉淀：沉淀测定值
V 样总：加入 ReagentⅠ和Ⅱ的体积，0.202 mL
500：细胞总数，500万

B. 使用微量石英比色皿测定的计算公式

将上述计算公式中的光径 d: 0.5 cm调整为 d: 1 cm进行计算即可。

常见问题

Q: 该类试剂盒一般什么单位用的多？

A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。

Q: 该类试剂盒做过哪些实验材料的验证？

A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

Q: 该产品线检测可使用分光光度计替代酶标仪吗？

A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。

Q: 该类试剂盒使用量应如何计算？

A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

Q: 该系列试剂盒可以检测蓝藻等微生物样本吗？

A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。

文献引用

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