早期发现肾小管损伤：NAG 活性检测在肾病研究中的应用
——CheKine™ NAG 活性检测试剂盒（微量法）应用解读
肾病研究的一个“老痛点”：太晚才看得见
肾损伤模型大家都很熟：
- STZ 诱导糖尿病肾病
- 阿霉素 / 顺铂 / 环孢素 A 肾毒性
- 缺血再灌注、单侧输尿管结扎（UUO）……
但在实际实验里，经常会遇到几个问题：
血肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）总是“后知后觉”
建模后很长一段时间，这两个指标几乎不动，等到明显升高，往往已经是中重度肾功能损伤阶段。
模型到底“成没成”？时间点怎么选？
组织切片做一次不容易，动物数有限、时间点设置又多，很多课题组在早期判断模型是否成功时，缺乏一个敏感、量化、相对省力的指标。
药物肾毒性研究，需要“早发现、早预警”
尤其是新药筛选和安全性评价，越早看到肾小管损伤信号，越便于做剂量优化、停药时点和机制研究。
这时，NAG（N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶）活性检测往往能补上这一块。
为什么越来越多人开始关注 NAG？
NAG 是什么？
NAG 是一种溶酶体酸性水解酶，大量存在于肾近端小管上皮细胞内。正常情况下，它主要待在细胞内，进入尿液或组织匀浆的量很少。
一旦肾小管上皮细胞发生：
- 肿胀、变性、通透性改变
- 脱落、坏死
- 或受到药物 / 代谢异常 / 缺血再灌注等刺激
细胞内的 NAG 就会大量释放，导致：
肾组织、尿液、血清中的 NAG 活性显著升高。
和 Scr / BUN 比，它有几个明显特点：
更早：
在 Scr、BUN 还处于“正常波动”时，NAG 活性往往已经明显上升，尤其敏感于肾小管损伤。
更“定位”肾小管：
Scr、BUN 更多反映整体肾小球滤过功能，而 NAG 更偏向肾小管上皮细胞损伤程度。
更适合作为“模型过程指标”：
无论是建模早期筛点，还是不同剂量、不同时间点的动态评估，NAG 都可以提供一条相对平滑、连续的变化曲线。
由于这些特点，NAG 已被大量文献用于：
- 糖尿病肾病早期筛查
- 药物肾毒性评价
- 各类肾小管疾病的机制研究
- 甚至部分临床研究中作为早期肾损伤辅助指标
实验室在做 NAG 检测时常见的实际问题
很多实验室在尝试做 NAG 时，会遇到几类困难：
1. 样本类型多，前处理繁琐
- 有的课题组需要用肾组织 + 尿液 + 血清 同时看 NAG；
- 有些做毒理的，需要不同组织 + 不同时间点；
- 还有做微生物学或植物学的，需要在细菌 / 细胞 / 植物组织 中查 NAG 活性。
问题在于：
不同样本类型，如果用不同方法或不同试剂，数据很难直接横向比较，也增加了培训和操作成本。
2. 方法灵敏度不够或耗样多
- 部分经典比色法需要较大体积的样本，对小鼠、细胞实验不太友好；
- 组织样本本来就很“金贵”，切片、WB、PCR 各项指标都要，留给酶活检测的量往往有限；
- 有些自建方法灵敏度有限，低活性样本难以拉开差距。
3. 操作复杂，不适合高通量
- 多步孵育、多次换液、显色时间不统一
- 实验员压力大，批次间差异难控
- 做 10 个样本可以，做 60 个样本就“很难受”，不利于药效筛选和大样本动物实验
NAG 活性检测试剂盒如何解决这些问题？
我们在设计CheKine™ N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶（NAG）活性检测试剂盒（微量法，货号：KTB1326） 时，重点围绕三个关键词：
微量法、省样本、多样本型、操作简洁
1. 微量法设计：省样本，更适合小动物与细胞实验
- 样本用量：
- 组织：约 0.1 g 组织 + 1 mL 提取液即可
- 细胞 / 细菌：约 5×10⁶ 细胞或菌体
- 血清（浆）：可直接上样，无需额外裂解
- 反应体系为96 孔板微量法，单孔检测体积小，样本节省明显。
- 一份小鼠肾脏足够同时做：病理 + WB/RT-qPCR + NAG 活性检测，不用再为“样本不够分”发愁。
2. 一套方案，覆盖多种样本类型
说明书中已优化并给出标准化操作流程，适用：
- 组织：肾、肝、心、脑等多种动物组织
- 细胞 / 细菌：贴壁、悬浮细胞和细菌培养物
- 血清 / 血浆 / 其他生物液体
同一套试剂盒、同一检测原理，便于在不同样本之间做趋势和相对比较，也便于多个实验项目之间共享平台。
3. 操作流程简洁，易上手、易扩展到高通量
核心流程可以概括为 4 步：
- 样本制备：按说明书配制匀浆液/裂解液，离心取上清。
- 加样反应：分设空白孔、标准孔、测定孔、对照孔，加入试剂和样本。
- 37℃ 孵育显色：固定时间孵育后加入显色终止液。
- 400 nm 读数并计算酶活。
- 全程只需一次加样孵育 + 一次终止显色，步骤简单、节奏清晰；
- 用常规酶标仪即可完成，不依赖昂贵设备；
- 对于需要做几十甚至上百个样本的项目，结合 96 孔板操作，可轻松扩展到高通量检测。
典型应用场景：这些课题都用得上 NAG 检测
1. STZ 诱导糖尿病肾病小鼠
需求场景：
糖尿病肾病早期，Scr/BUN 变化不明显，蛋白尿也可能波动较大；课题组需要更早、更稳定的损伤指标来判断模型是否成功、损伤程度如何。
使用方式：
在建模后第 4、8、12 周定期取小鼠肾皮质或尿液，用 CheKine™ NAG 试剂盒检测 NAG 活性变化，并与 Scr、BUN、尿白蛋白、肾组织病理对比。
预期效果：
NAG 活性通常在 Scr/BUN 明显升高前就出现持续升高，可作为“早期肾小管病变”量化指标，帮助判断建模成功时间点和病程分期。
2. 药物肾毒性评价（如阿霉素、顺铂等）
需求场景：
新药或联合用药安全性评价，需要监测肾毒性“信号”，尤其关注肾小管损伤。
使用方式：
设置不同剂量和不同给药周期，在多个时间点采集肾组织、尿液或血清，检测 NAG 活性。通过 NAG 动态曲线，判断损伤出现时间、剂量依赖性和可逆性。
预期效果：
能在 Scr/BUN 明显升高之前给出“早期预警”，为优化剂量、调整给药策略提供参考；也可与肝毒性指标配合，构成更完整的安全性评价体系。
3. 植物逆境胁迫下的根系 / 叶片 NAG 活性变化
NAG 不仅存在于动物中，在植物细胞的溶酶体和相关细胞器中也有活性，相当一部分课题会关注：
- 盐胁迫、干旱胁迫
- 重金属污染
- 农药处理
- 共生 / 病原微生物感染下的根系、叶片损伤和细胞壁代谢
在这些模型中，使用 CheKine™ NAG 试剂盒检测植物组织匀浆中的 NAG 活性，可以：
- 作为根系或叶片细胞损伤、代谢改变的辅助指标；
- 与抗氧化酶（SOD、CAT、POD）活性、MDA 含量等指标联合使用，更全面评估逆境胁迫效应。
用起来是什么感觉？
操作概览
以肾组织为例：
- 取肾皮质约 0.1 g，加入 1 mL 提取液，冰浴匀浆。
- 15,000 g，4℃ 离心 10 min，取上清。
- 在 96 孔板中按说明书设置：空白孔、标准孔、样本测定孔、样本对照孔。
- 加入底物与试剂，37℃ 孵育 30 min。
- 加入终止显色液，室温放置数分钟后，在 400 nm 读数。
- 根据说明书公式计算 NAG 活性（可按 mg 蛋白、g 鲜重、10⁴ 细胞数或 mL 体积计）。
实验室新人通常在一次培训 + 一次带教 后即可独立完成。
数据呈现示意
例如，在阿霉素肾损伤小鼠模型中，使用 CheKine™ 试剂盒检测肾组织 NAG 活性，可以看到：
- 对照组各时间点维持在约 5 U/g 鲜重左右，波动较小；
- 阿霉素组在给药第 3 天，NAG 活性已经升高至约 2 倍以上；
- 随时间推移，第 7 天、第 14 天 NAG 活性进一步升高，而 Scr/BUN 的改变明显滞后。
对于糖尿病肾病模型，常见现象包括：
- 血糖持续升高后不久，NAG 活性就开始上升；
- 在病理改变仍然较轻的阶段，NAG 已能反映出肾小管功能早期紊乱。
这些趋势在各类文献中有类似报道，你可以用CheKine™ NAG 试剂盒 快速实现在自己课题中复现和拓展。
适用人群与典型需求总结
科研人员：
- 建立和优化肾病模型（糖尿病肾病、药物肾毒性、急慢性肾损伤等）
- 做机制研究时需要联合 Scr/BUN、病理、炎症/纤维化指标，构建多指标体系
- 进行植物逆境胁迫、生物胁迫下细胞损伤评价
药企 / CRO：
- 早期安全性评价中的肾毒性风险预警
- 药效学和毒理学研究中，作为附加敏感指标，提高评估维度
实验平台 / 科研服务：
- 建立标准化 NAG 活性检测服务，作为肾损伤、细胞损伤和逆境胁迫项目的常规检测项目之一
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