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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 亚铁氧化酶（HP）活性检测试剂盒（微量法）（CheKine™ Micro HephaestIn (HP) Activity Assay Kit）是一款基于比色法的微量检测工具，专为定量测定细胞、组织或液体样本中亚铁氧化酶（Hephaestin, HP）活性而设计。通过监测Fe²⁺被氧化为Fe³⁺的速率，可快速评估细胞铁代谢状态。
亚铁氧化酶（HP）是铜蓝蛋白的同系物，催化亚铁离子（Fe²⁺）氧化为三价铁离子（Fe³⁺），随后Fe³⁺与转铁蛋白结合，参与细胞铁释放。本试剂盒以特定浓度的Fe²⁺为底物，在HP作用下Fe²⁺被氧化为Fe³⁺；剩余的Fe²⁺与ferrozine形成有色复合物，在560 nm处具有特征吸收峰。通过测定Fe²⁺被氧化的速率，即可反映HP活性。
本试剂盒主要用于细胞代谢研究，可广泛应用于：
| 中文名称 | 亚铁氧化酶(HP)活性检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro HephaestIn (HP) Activity Assay Kit |
| 产品货号 | KTB1141 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 试剂盒组分 | •Reagent I •Reagent Il •Reagent Ⅲ •Standard |
| 检测范围 | •测定动植物组织、血清（浆）或其他液体样本内的亚铁氧化酶（HP）活性。 • 提供了详细的样品制备和结果计算方法。 |
| 分子 | 亚铁氧化酶 |
| 检测指标 | 亚铁氧化酶（HP）是铜蓝蛋白的同系物，催化亚铁离子（Fe2+）氧化为三价铁离子（Fe3+），从而三价铁与转铁蛋白结合，参与细胞铁释放。以一定浓度的Fe2+为底物，在HP的催化作用下Fe2+被氧化为Fe3+，Fe2+与ferrozine形成有色复合物，在560nm处有特征吸收峰，可通过测定Fe2+被氧化的速率来反映HP的活性。 |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | 4℃，避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Reagent II：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Reagent III：即用型；使用前，平衡到室温；4℃避光保存。
Standard：10 μmol/mL Fe2+标准液，即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
使用 10 μmol/mL Fe2+标准液，按照下表所示，进一步稀释成标准品：
| 序号 | Standard体积 | 去离子水体积（µL） | 浓度（nmol/mL） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 40 µL 10 μmol/mL Standard | 960 | 400 |
| Std.2 | 500 µL of Std.1 (400 nmol/mL) | 500 | 200 |
| Std.3 | 500 µL of Std.2 (200 nmol/mL) | 500 | 100 |
| Std.4 | 500 µL of Std.3 (100 nmol/mL) | 500 | 50 |
| Std.5 | 500 µL of Std.4 (50 nmol/mL) | 500 | 25 |
| Std.6 | 500 µL of Std.5 (25 nmol/mL) | 500 | 12.5 |
| Std.7 | 500 µL of Std.6 (12.5 nmol/mL) | 500 | 6.25 |
| Blank | 0 | 500 | 0（空白孔） |
1. 组织样本：称取约 0.1 g组织样本，加入 1 mL去离子水，冰浴匀浆，10,000 g，4℃离心 10 min，取上清液，置冰上待测。
2. 血清（浆）等液体样本：直接测定。若液体有浑浊，则离心取上清测定。
1. 酶标仪或可见分光光度计预热 30 min，调节波长到 560 nm。可见分光光度计用去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在 96孔板或微量玻璃比色皿中进行）：
| 试剂 | 测定孔（μL） | 对照孔（μL） | 标准孔（μL） |
|---|---|---|---|
| Reagent I | 50 | 50 | 50 |
| Reagent II | 10 | 10 | 0 |
| 样本上清 | 10 | 10 | 0 |
| Standard | 0 | 0 | 10 |
| 去离子水 | 30 | 30 | 40 |
| Reagent III | 0 | 100 | 100 |
| 混匀，40℃孵育 30 min | 立即混匀检测，无需孵育 | Reagent III 100 |
3. 充分混匀，立即于 560 nm处测定吸光值，分别记为 A 测定、A 对照、A 标准、A 空白，计算ΔA 测定=A 对照-A 测定、ΔA 标准=A 标准-A 空白。
1. 标准曲线的绘制
以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA 测定带入方程得到 x (nmol/mL)。
2. HP活性的计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟氧化 1 nmol Fe2+定义为一个酶活力单位。
HP (U/mg prot)=x×V 反总÷T÷(V 样×Cpr)=0.333×x÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每 g组织每分钟氧化 1 nmol Fe2+定义为一个酶活力单位。
HP (U/g 鲜重)=x×V 反总÷T÷(W×V 样÷V 样总)=0.333×x÷W
（3）按样本体积计算：
单位的定义：每mL血清（浆）每分钟氧化 1 nmol Fe2+定义为一个酶活力单位。
HP (U/mL)=x×V 反总÷T÷V 样=0.333×x
V 反总：反应体系总体积，0.1 mL；V 样：加入反应体系中样本体积，0.01 mL；V 样总：加入去离子水体积，1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，30 min。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
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