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活动截止时间：2024年1月31日
CheKine™ 脂质过氧化物（LPO）含量检测试剂盒（微量法）是一款专为细胞代谢研究设计的比色法试剂盒，可在微量体系内快速测定动植物组织、细胞、血清（浆）或其他液体样本中脂质过氧化物的含量，为氧化应激与细胞损伤机制研究提供可靠数据。
背景信息
脂质过氧化物（Lipid hydroperoxide，LPO）是不饱和脂肪酸链经自由基或活性氧攻击后形成的过氧化物。在病理或应激状态下，脂质过氧化反应增强，LPO 含量随之升高，进而破坏细胞膜结构与功能，并与机体免疫失衡及衰老进程密切相关。CheKine™ 脂质过氧化物（LPO）含量检测试剂盒（微量法）利用经典 TBA 法原理：在酸性条件下加热，LPO 裂解产生丙二醛（MDA）；MDA 与硫代巴比妥酸（TBA）缩合生成棕红色三甲川（3,5,5-三甲基恶唑-2,4-二酮），该产物在 532 nm 处具有特征吸收峰，通过比色即可定量样本中 LPO 水平。
应用领域
本试剂盒主要用于细胞代谢研究中的氧化应激评估，广泛适用于肿瘤细胞、免疫细胞、干细胞及原代培养细胞的脂质过氧化水平测定，亦可扩展至药物筛选、抗衰老研究及食品抗氧化性能评价等方向。
| 中文名称 | 脂质过氧化物(LPO)含量检测试剂盒(微量法)-CheKine™ |
| 英文名称 | CheKine™ Micro Lipid Peroxidation (LPO) Concent Assay Kit |
| 产品货号 | KTB1051 |
| 检测方法 | 比色法 |
| 试剂盒组分 | •Extraction Buffer I •Extraction Buffer Ⅱ •Reagent I •Reagent Ⅱ •Standard |
| 分子 | B-AI |
| 检测指标 | B-AI |
| 注意事项 | •推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。 •实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。 |
| 保存建议 | 4℃，避光保存 6 个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输（蓝冰） |
| 警告 | 本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。 |
注意：正式检测前，建议选择 2-3个预期差异较大的样本进行预实验。
Extraction BufferⅠ：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。
Extraction Buffer II：即用型；4℃保存。
Reagent I：即用型；使用前，平衡到室温。4℃保存。
Working Reagent II：临用前配制；每瓶加入 12 mL去离子水充分溶解待用。4℃避光保存可稳定 1个月。
注意：Reagent II 较难溶，可以在 70℃加热并剧烈振荡以促进溶解，或者通过超声处理以促进溶解。每次用前需检查是否有粉剂析出。如果用高温助溶 Reagent II，需要待其冷却至室温后再使用。Reagent II 有毒，建议在通风橱进行实验。
Standard：即用型；4.05 mmol/mL 1,1,3,3-四乙氧基丙烷（TEP）；使用前，平衡到室温。4℃避光保存。
15 µmol/mL Standard：2 µL 4.05 mmol/mL Standard用 538 µL无水乙醇稀释得 15 µmol/mL Standard；使用 15 µmol/mL Standard，按照下表所示，进一步稀释成标准品：
| 序号 | Standard体积（μL） | 无水乙醇体积（μL） | 浓度（nmol/mL） |
|---|---|---|---|
| Std.1 | 4 μL of 15 µmol/mL Standard | 746 | 80 |
| Std.2 | 100 μL of Std.1 (80 nmol/mL) | 100 | 40 |
| Std.3 | 100 μL of Std.2 (40 nmol/mL) | 100 | 20 |
| Std.4 | 100 μL of Std.3 (20 nmol/mL) | 100 | 10 |
| Std.5 | 100 μL of Std.4 (10 nmol/mL) | 100 | 5 |
| Std.6 | 100 μL of Std.5 (5 nmol/mL) | 100 | 2.5 |
| Std.7 | 100 μL of Std.6 (2.5 nmol/mL) | 100 | 1.25 |
| Std.8 | 100 μL of Std.7 (1.25 nmol/mL) | 100 | 0.625 |
注意：每次实验，请使用新配制的标准品；配制好的标准品需要在 4 h之内使用。
注意：建议使用新鲜样本。如果不立即使用，可将样品在-80℃下保存一个月。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在 4 h内完成样品解冻。
注意：如需测定蛋白浓度，推荐使用 Abbkine货号：KTD3001的蛋白质定量试剂盒（BCA法）进行样本蛋白质浓度测定。
1. 酶标仪或可见光分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 535 nm和 600 nm，可见光分光光度计用去离子水调零。
2. 操作表（下述操作在 1.5 mL EP管中操作）：
| 试剂 | 空白孔（μL） | 标准孔（μL） | 测定孔（μL） | 对照孔（μL） |
|---|---|---|---|---|
| 样本 | 0 | 0 | 100 | 0 |
| Standard | 0 | 100 | 0 | 0 |
| 去离子水 | 0 | 0 | 0 | 100 |
| 无水乙醇 | 100 | 0 | 0 | 0 |
| ReagentⅠ | 300 | 300 | 300 | 300 |
| Working Reagent II | 100 | 100 | 100 | 100 |
3. 充分混匀，95℃水浴 80 min（盖紧，防止水分散失），自然冷却至室温，8,000 g，室温离心 10 min，取 200 μL至 96孔板或微量玻璃比色皿中，记录 535 nm和 600 nm处吸光值，空白孔记为 A 空白，标准孔记为 A 标准，测定孔记为 A 测定，对照孔记为 A 对照。计算ΔA 测定=(A535 测定-A535 对照)-(A600 测定-A600 对照)，ΔA 标准=(A535 标准-A535 空白)-(A600 标准-A600 空白)。
注意：（1）对照管、空白管和标准管只需做 1-2次。实验之前建议选择 2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA 测定小于 0.004可适当加大样本量。如果ΔA 测定大于 1.5，样本可用对应的 Extraction Buffer进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。（2）95℃水浴反应中，务必避免液体溅出，时刻注意安全。使用普通扣盖 EP管可以用封口膜缠口后，使用针头在盖子上扎一小孔防止爆盖，更推荐使用带有螺旋口的 EP管（也需缠膜），若使用金属浴加热也可用重物压紧管盖。
注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。
1. 标准曲线的绘制
以标准溶液浓度为 x轴，ΔA 标准为 y轴，绘制标准曲线，得到标准方程，将ΔA 测定带入方程得到 x (nmol/mL)。
2. LPO含量的计算：
V 样：加入反应体系中样本体积，0.1 mL；V1：加入 Extraction BufferⅠ体积，1 mL；V2：加入 Extraction Buffer II 体积，0.4 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；n：细胞总数，以万计。
A: 动物研究，植物研究，微生物研究等相关单位都应用比较多。
A: 生化试剂盒已充分验证，适合于植物、动物和微生物等多种物种。 对于在植物、动物和微生物等不同材料之间确实存在很大差异的指标，尤其是酶活性测定指标，我们分别研发和生产了针对同一指标的不同类型试剂盒，并在试剂盒名称和代号上做了明确区分，请用户仔细核对，选择合适的试剂盒类型。如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 不建议用，分光光度计每次检测的样本个数不超过4个，无法做到数据检测的同步。
A: 检测孔的数量=样本个数+标准品数×重复次数+预留补测数量，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
A: 可以，用超声进行破碎微生物细胞，再进行细胞上清的检测，如有疑问，请联系support@abbkine.com，进行深入探讨。
请等待最新文献信息更新。
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