彗星法DNA损伤分析试剂盒(3孔载玻片)

Name: 彗星法DNA损伤分析试剂盒(3孔载玻片)
Brand: Abbkine
SKU: KTA3040
Price: 1498 CNY
Availability: InStock

Comet Assay Kit (3-Well Slides)

产品货号

KTA3040

产品特点：

试剂齐全：一次性提供 3 孔专用彗星玻片、低熔点琼脂糖、裂解液、PI 染料等全套组分，开盒即用。

操作简便：无需传统多层琼脂糖繁琐铺胶，仅需简单混合-固化-裂解-电泳四步即可完成实验。

结果可靠：3 孔设计使样本不易脱落，电泳条带清晰，重复性高。

选择规格

15T

¥1498

现货（次日发货）

75T

¥4198

现货（次日发货）

🎉 限时优惠

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

亚科因生物研发的彗星法DNA损伤分析试剂盒（3孔载玻片） (Comet Assay Kit, 3-Well Slides) 是一套基于单细胞凝胶电泳（SCGE）原理，专为细胞水平 DNA 损伤快速评估而设计的完整检测系统。通过 3 孔专用载玻片与即用型试剂组合，可在荧光显微镜下直观呈现 DNA 断裂“彗星”图谱，帮助研究者高效评价细胞状态。

背景与原理

当细胞受到辐射、氧化应激、药物或重金属等损伤因素作用后，DNA 可能发生单链或双链断裂。本试剂盒利用单细胞凝胶电泳（SCGE）技术，将单个细胞包埋于低熔点琼脂糖中，经裂解液去除细胞膜与组蛋白后，在碱性条件下使 DNA 解旋；随后在电场作用下，断裂的 DNA 片段迁移出细胞核，形成拖尾，而完整 DNA 则保持圆形或轻微拖尾形态。最后用碘化丙啶（PI）染色，在荧光显微镜下即可观察到典型的“彗星”图像，通过尾长或尾矩即可量化 DNA 损伤程度。

应用领域

本试剂盒适用于细胞凋亡/周期研究、药物遗传毒性评价、环境毒理学及放射生物学等场景，可检测培养细胞、外周血单核细胞、组织原代细胞等多种样本的 DNA 损伤水平。

产品参数

中文名称	彗星法DNA损伤分析试剂盒(3孔载玻片)
英文名称	Comet Assay Kit (3-Well Slides)
产品货号	KTA3040
试剂盒组分	• Comet Slides (3-Well) • 10× Lysis Solution • EDTA (500 mM) • Agarose (Low Melting Point) • Propidium Iodide (PI) (50×) • 40 mM Tris-HCl (pH 7.5)
注意事项	• 不同批次号、不同厂家之间的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。 • 产品经过严苛质量检测。欢迎随时与我们联系，我们致力于客户成功和客户满意。
保存建议	从发货之日起，4℃，避光保存 6 个月
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

荧光显微镜
离心机、37℃水浴锅和沸水浴、水平电泳槽、可调节式移液枪及枪头
去离子水、NaCl粉末、NaOH颗粒、硼酸、EDTA（二钠盐）、DMSO（可选）
用于 pH调节的 10 M NaOH、70%乙醇

试剂盒组分

试剂盒组分	规格	储存条件
Comet Slides (3-Well)	5 (15 T) / 25 (75 T)	4℃
10× Lysis Solution	15 mL (15 T) / 75 mL (75 T)	4℃
EDTA (500 mM)	25 mL (15 T) / 125 mL (75 T)	4℃
Agarose (Low Melting Point)	15 mL (15 T) / 15 mL×5 (75 T)	4℃
Propidium Iodide (PI) (50×)	20 μL (15 T) / 100 μL (75 T)	4℃，避光保存
40 mM Tris-HCl (pH 7.5)	15 mL (15 T) / 75 mL (75 T)	4℃
PBS（不含Mg²⁺和 Ca²⁺，pH 7.4）	-	-

试剂准备

Comet Slides (3-Well)：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

10×Lysis Solution：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

EDTA (500 mM)：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

Agarose (Low Melting Point)：将 Agarose (Low Melting Point)瓶在 90-95℃的水浴中加热 20 min，直到 Agarose液化。将瓶子转移到 37℃水浴中 20 min保持液体状态。用不完的试剂分装后 4℃保存 6个月。Agarose颜色为黄色，是由于高温高压灭菌后导致，不会影响使用。

Propidium Iodide (PI) (50×)：临用前配制，用 PBS稀释 50倍，浓度为 1×PI染料，现用现配，4℃避光保存。

40 mM Tris-HCl (pH 7.5)：临用前配制，用 PBS稀释 100倍，浓度为 0.4 mM Tris-HCl (pH 7.5)，4℃保存。

1×裂解缓冲液

制备 100 mL 1×裂解缓冲液，配方如下：

试剂	用量
NaCl	14.6 g
EDTA (500 mM)	20 mL
10×Lysis Solution	10 mL
DMSO	10 mL（含血红素样品可选）
去离子水	添加到 90 mL

充分混匀，用 10 M NaOH调 pH至 10，然后用去离子水定容到 100 mL。使用前冷却 4℃至少 20 min。

注意：现配现用；对于含血红素样品，如血细胞和组织，可以加入终浓度为 10%的 DMSO，使用前放在 4℃至少 20 min。1×裂解缓冲液在室温下会看起来浑浊，但在 4℃时会变清澈，pH值也会保持 10 左右。

碱性解旋溶液(Alkaline Solution)

制备 100 mL 碱性解旋溶液，配方如下：

试剂	用量
NaOH	1.2 g
EDTA (500 mM)	0.2 mL
去离子水	定容到 100 mL

注意：充分混匀。现配现用，使用前冷却 4℃至少 20 min。

电泳液的选择

根据所需的运行条件和检测灵敏度选择合适的电泳溶液。TBE优选用于细胞凋亡的分析，并且能够使用尾长而不是尾矩进行数据分析。TBE电泳可检测单链和双链 DNA断裂，并可能检测到一些 AP位点。碱性电泳更敏感，可以检测到较少量的 DNA损伤。碱性电泳可检测单链和双链 DNA断裂，大多数 AP位点和碱不稳定 DNA加合物。

1. TBE电泳液（TBE Electrophoresis Solution）

试剂	用量
Tris Base	10.8 g
硼酸	5.5 g
EDTA（二钠盐）	0.93 g
去离子水	定容到 1 L

注意：充分混匀。现配现用，使用前冷却 4℃至少 20 min。Tris Base即碱性 Tris。

2. 碱性电泳液 (Alkaline Electrophoresis Solution) (300 mM NaOH, 1 mM EDTA, pH>13)

试剂	用量
NaOH	12 g
EDTA (500 mM)	2 mL
去离子水	定容到 1 L

注意：充分混匀。现配现用，使用前冷却 4℃至少 20 min。

实验步骤

A. 制样

1. 在进行实验前，制备 1×裂解缓冲液、碱性解旋溶液和电泳液（见试剂制备），在 4℃冷却所有溶液。

2. 将 Agarose (Low Melting Point)在 90-95℃的水浴中孵育 20 min液化，转移到 37℃的水浴中冷却保存 20 min。

3. Comet Slide提前放置在 37℃环境中，每孔 100 μL Agarose加到 Comet Slide上完全覆盖，以创建基底层，水平转移至 4℃环境冷却 15 min。

4. 准备细胞样本，如下所示：

悬浮细胞：1,000 g离心 5 min，去掉上清液。预冷的 PBS清洗 1次，离心去掉上清液。PBS重悬细胞并计数，收集 1-5×10⁵个细胞重悬于 1 mL PBS中。
贴壁细胞：用细胞刮轻轻地从培养皿中取出细胞，将细胞悬液转移到离心管中，1,000 g离心 5 min，去掉上清液。预冷的 PBS清洗 1次，离心去掉上清液。PBS重悬细胞并计数，收集 1-5×10⁵个细胞重悬 1 mL PBS中。
组织：使用解剖剪刀，将一小块组织切成一小片，加入 1-2 mL冰冷的 PBS，其中含有 20 mM的 EDTA，静置 5 min，然后将上清液转移到离心管中。1,000 g离心 5 min，去掉上清液，PBS重悬细胞并计数，收集 1-5×10⁵个细胞重悬 1 mL PBS中。

5. 将细胞样品与 Agarose以 1:10的比例混合，立即取 75 μL混合液转移到 Agarose基底层的上面完全覆盖，而不干扰基底层。

6. Comet Slide保持水平，4℃避光 15 min。

7. 将 Comet Slide转移到装有预冷的 1×裂解缓冲液（约 25 mL/Comet Slide）的容器中，4℃避光裂解 30-60 min。

8. 吸出 1×裂解缓冲液，用预冷的碱性解旋溶液（约 25 mL/Comet Slide）替换，4℃避光解旋 30 min。

注意：1.正式实验前，需做预实验，确定最佳铺胶的细胞数量和裂解时间。2.对于多个样品，将细胞样品与 Agarose混合液保持在 37℃以避免凝胶化。3.为避免紫外线对细胞样品造成损害，请在低/暗光条件下进行测定。

B. 电泳

注意：根据所需的运行条件和检测灵敏度选择合适的电泳溶液。

1. TBE 电泳：

(1) 吸出碱性解旋溶液，加预冷的 TBE 电泳液，浸洗 5 min，重复 2次。

(2) 小心地将 Comet Slide转移到水平电泳槽，加入适量的预冷的 TBE 电泳液到电泳槽，直到完全覆盖住 Comet Slide。

(3) 以 1 V/cm向腔室施加电压 10-15 min（例如，腔室电极之间相距 35 cm，则施加 35 V电压），电压、电流可用改变电泳液面高低来调节。

(4) 水平保持 Comet Slide，小心地将 Comet Slide从电泳室转移到装有预冷的去离子水（约 25 mL/Comet Slide）的干净容器中，浸洗 2 min，重复 3次。

(5) 吸出去离子水，加预冷的 70%乙醇（约 25 mL/Comet Slide），浸洗 5 min。

(6) 水平保持 Comet Slide，从 70%乙醇中取出 Comet Slide并风干。

(7) Agarose和 Comet Slide完全干燥后，加入 50 μL/孔配置好的 1×PI染料，室温避光染色 10 min。

(8) PBS洗 1次后使用荧光显微镜观察 Comet Slide，并拍照。

2. 碱性电泳：

(1) 小心地将 Comet Slide转移到水平电泳槽，加入适量的预冷的碱性电泳液到电泳槽，直到完全覆盖住 Comet Slide。

(2) 以 1 V/cm向腔室施加电压 15-30 min（例如，腔室电极之间相距 35 cm，则施加 35 V电压），电压、电流可用改变电泳液面高低来调节。

(3) 电泳后，将 Comet Slide水平转移到装有预冷的 0.4 mM Tris-HCl（pH 7.5）缓冲液（约 25 mL/Comet Slide）的容器中，4℃中和 3次，每次 10 min。

(4) 弃去 Tris-HCl缓冲液，加入 50 μL/孔配置好的 1×PI染料，室温避光染色 10 min。

(5) PBS洗 1次后使用荧光显微镜观察 Comet Slide，并拍照。

注意：碱性电泳后，尽快拍照，如无法及时拍照，请把 Comet Slide浸在 PBS中，在 4度保护湿润。

结果计算

通过测量细胞核的遗传物质（“彗星头部”）和产生的“尾部”之间的位移来量化 DNA损伤。尾矩和尾部 DNA%是分析彗星试验结果的两个最常见的参数。每个样品至少应分析 50-100个细胞。考虑到遗传物质的迁移以及尾部 DNA的相对数量时，尾力矩被认为是诱导 DNA损伤的合适指标。

尾部 DNA百分比(%) =尾部 DNA强度/细胞 DNA强度×100

尾矩可以使用以下方法之一进行测量：

（1）Olive尾矩=尾部 DNA百分比(%) ×尾矩长度（从头部中心到尾部中心测量，见图 1）

（2）尾部力矩=尾部 DNA百分比(%) ×尾部长度（见图 1）

彗星实验结果分析软件可通过 OpenComet、CASPlab和 Comet Assay IV（Perceptive Instruments）等进行分析。

图 1 彗星实验中的 DNA损伤。

定性方法

DNA损伤按彗星尾部 DNA百分比(%)分为 5级：

级别	DNA损伤百分比	损伤程度
0级	<5%	无损伤
1级	5-20%	轻度损伤
2级	20-40%	中度损伤
3级	40-95%	高度损伤
4级	>95%	重度损伤

示例

图 2. Jurkat细胞未经处理（左）或处理（右）用 20 μM依托泊苷处理 4 h，然后进行彗星试验（碱性电泳条件，21 V，电泳 20 min）。

数据仅供参考。

常见问题

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文献引用

Fu, Min, et al. "All-trans retinoic acid inhibits glioblastoma progression and attenuates radiation-induced brain injury." JCI insight 9.21 (2024): e179530.

杂志名称: JCI insight | 作者: Fu, Min, et al.

IF: 6 | 发表时间: 2024

Human placental extract rescues hippocampal damage associated with cognitive impairment in diabetic male rats through antioxidative, anti-inflammatory, and neuromodulatory activities.

杂志名称: Metabolic Brain Disease | 作者: Matar, Shreen, et al.

IF: 3.500 | 发表时间: 2025

Melatonin protects against defects induced by methoxychlor in porcine oocyte maturation.

杂志名称: Cell Cycle | 作者: Geng, Zhaojun, et al.

IF: 3 | 发表时间: 2024

Exploring the mechanisms of Yishen Tongluo decoction on repairing DNA damage in mouse Spermatogonia cells based on whole transcriptome sequencing.

杂志名称: American Journal of Men's Health | 作者: Wan, Wenxi, et al.

IF: 2 | 发表时间: 2024

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