细胞凋亡DNA Ladder抽提试剂盒(离心柱式)

Name: 细胞凋亡DNA Ladder抽提试剂盒(离心柱式)
Brand: Abbkine
SKU: KTA1101
Price: 489 CNY
Availability: InStock

Apoptosis DNA Ladder Extraction Kit With Spin Column

产品货号

KTA1101

产品特点：

离心柱式纯化，无需酚氯仿抽提，操作更简便、安全

小片段DNA回收率高，可稳定捕获180-200 bp凋亡特征条带

兼容多种样本类型，验证的样本类型齐全，满足不同实验需求

选择规格

50 T

¥489

现货（次日发货）

100 T

¥869

现货（次日发货）

🎉 限时优惠

买2送1活动进行中！购买任意2个规格产品，免费赠送100μL装一支。

活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

亚科因生物研发的细胞凋亡DNA Ladder抽提试剂盒（离心柱式）（Apoptosis DNA Ladder Extraction Kit With Spin Column，货号：KTA1101）是一套基于离心柱纯化技术的即用型系统，可快速、温和地从凋亡细胞或组织中分离180-200 bp及其倍数的DNA片段，形成典型的“DNA Ladder”，为细胞凋亡研究提供直观、可靠的分子证据。

细胞凋亡过程中，核酸内切酶被激活并特异性地切断核小体间的基因组DNA，产生180-200 bp或其整倍数的片段。这些片段在琼脂糖凝胶电泳中呈现为阶梯状条带，即“DNA Ladder”，是判定细胞凋亡的经典指标。传统酚-氯仿-乙醇法步骤繁琐且小片段易丢失，而本试剂盒采用离心柱式纯化策略：先用Lysis Buffer A/B裂解细胞并释放DNA，再经Proteinase K与RNase A去除蛋白及RNA，随后通过Spin Column选择性吸附DNA；依次使用Wash Buffer A/B去除杂质，最后用Elution Buffer洗脱得到高纯度DNA。该方法显著缩短操作时间，最大限度保留50 kb以上基因组DNA及180-200 bp小片段，适用于后续电泳、PCR或文库构建。

应用领域

细胞凋亡机制研究、药物筛选与毒性评价、肿瘤生物学、免疫学及神经退行性疾病模型分析等细胞代谢与细胞周期相关实验。

产品参数

中文名称	细胞凋亡DNA Ladder抽提试剂盒(离心柱式)
英文名称	Apoptosis DNA Ladder Extraction Kit With Spin Column
产品货号	KTA1101
试剂盒组分	•Lysis Buffer A •Lysis Buffer B •Wash Buffer A •Wash Buffer B •Elution Buffer •Spin Column •Collection Tube •RNase A •Proteinase K
注意事项	•推荐使用新鲜样本，如果不立即进行实验，样本可在-80℃保存数周。测定时，应控制解冻的温度和时间。室温环境下解冻时，需在4 h内完成样品解冻。•实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。
保存建议	按各组分标签提示分开存储，保质期 12 个月
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

可调节式移液枪及枪头、离心管
离心机、涡旋振荡器
水浴锅、凝胶电泳仪
无水乙醇、PBS
琼脂糖、TAE、Loading Buffer、DNAMarker、EB

试剂准备

Lysis Buffer A：即用型；室温保存。
Lysis Buffer B：即用型；室温保存。
Wash Buffer A：第一次使用前 50 T添加 9 mL无水乙醇，100 T添加 18 mL无水乙醇，混匀并做好标记；室温保存。
Wash Buffer B：第一次使用前 50 T添加 32 mL无水乙醇，100 T添加 64 mL无水乙醇，混匀并做好标记；室温保存。
Elution Buffer：即用型；室温保存。
RNase A：即用型；-20℃保存。
Proteinase K：即用型；-20℃保存。

实验步骤

注意：需使用 56℃或 70℃水浴，请提前作好准备。

A. 细胞样本

1. 收集约 1×10⁶个细胞，加入 200 μL PBS，轻柔混匀，使细胞重悬于 PBS中。

注意：如果使用冻存的细胞沉淀，先把细胞沉淀解冻，并轻轻弹散，然后再加入 PBS重悬细胞。

2. 加入 2 μL RNase A，轻柔涡旋混匀,室温放置 3-5 min。

3. 加入 10 μL Proteinase K，轻柔涡旋混匀。

4. 加入 200 μL Lysis Buffer B，轻柔涡旋混匀，70℃孵育 10 min。

注意：加入 Lysis Buffer B后必须立即涡旋混匀。不可把 Proteinase K直接和 Lysis Buffer B混合。

5. 加入 200 μL无水乙醇，轻柔涡旋混匀。

注意：加入乙醇后可能产生白色沉淀，属正常现象。

6. 把步骤 5中的混合物（包括可能产生的沉淀）加入到 Spin Column。12,000 rpm离心 1 min，倒弃 Collection Tube内液体。

注意：进行本步骤前需将 Spin Column置于 Collection Tube上。倒弃废液后回收 Collection Tube。必须把沉淀全部转移到 Spin Column内，否则会严重影响抽提效果。

7. 加入 0.5 mL Wash Buffer A（使用前先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心 1 min，倒弃 Collection Tube内液体。

8. 加入 0.6 mL Wash Buffer B（使用前先检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm离心 1 min，倒弃 Collection Tube内液体。

9. 12,000 rpm离心 2 min，去除残留的乙醇。

10. 将 Spin Column置于一新的 1.5 mL离心管上，开盖室温干燥 3-5 min，加入 50-100 μL Elution Buffer。室温放置 1-3 min。12,000 rpm离心 1-2 min。所得液体即为纯化得到的总 DNA。

注意：为提高 DNA提取量，可以将 Elution Buffer预热至 56℃再洗脱，也可将第一次洗脱所得溶液重新加入 Spin Column进行洗脱。

11. 取部分抽提得到的 DNA，1%琼脂糖凝胶电泳分析。

注意：如果细胞发生凋亡，即可观察到典型的 DNA Ladder。电泳时一定要注意换用新鲜配制的电泳液，DNA凝胶也要用新鲜配制的电泳液配制并新鲜配制后使用。电泳时为获取最佳的电泳效果使 Ladder充分分开，电泳速度宜适当慢一些，凝胶宜适当长一些，而加样孔宜更加扁平一些。选取适当较薄的梳齿，往往会获得更好的 Ladder电泳效果。

B. 动物组织样本

注意：与培养细胞相比，动物组织样本凋亡细胞出现的部位不定、规律性差，取样部位及取样量的不同，均会显著影响最终 DNA Ladder的提取效果，建议有丰富经验的用户使用本试剂盒提取组织凋亡 DNA Ladder。

1. 称取不超过 25 mg的组织（脾脏不超过 10 mg），剪切成尽可能小的碎片，加入 190 μL Lysis Buffer A。

注意：请勿使用过多的样品，过多的样品会导致抽提效果下降。较小的组织碎片会使裂解速度加快，裂解效果提高。新鲜或冻存的组织均可。

2. 加入 10 μL Proteinase K，轻柔涡旋混匀，56℃孵育直至完全裂解。

注意：在孵育期间可以偶尔取出样品 Vortex以加快裂解速度。裂解的时间因组织不同而有所不同，通常可在 1-3 h内完成。为方便起见，可以直接裂解过夜，裂解过夜对抽提效果无任何负面影响。组织完全裂解后可以呈粘稠状，但不应该呈可把 Spin Column堵住的凝胶状。如果消化过夜仍呈凝胶状，说明样品用量过多，作为补救措施，可以把整个反应体系放大一倍。也可组织样本经液氮研磨成面粉状，缩短裂解时间。

3. 加入 2 μL RNase A，轻柔涡旋混匀,室温放置 3-5 min。

4. 涡旋混匀 15 s，加入 200 μL Lysis Buffer B，涡旋混匀，70℃孵育 10 min。

注意：加入 Lysis Buffer B后需立即涡旋混匀。加入 Lysis Buffer B后可能会产生白色沉淀，但大多数情况在 70℃孵育后会溶解。即使 70℃孵育后仍有白色沉淀也不会干扰后续实验。有些组织例如肺、脾，在加入样品裂解液 B后可能会形成凝胶状物，此时需剧烈晃动或涡旋样品，以尽量破坏凝胶状物。

5. 后续步骤同 A.5-A.11细胞样本的步骤。

注意事项

温度较低时 Lysis Buffer A和 Lysis Buffer B中可能会有沉淀产生，属正常现象。如有沉淀，56℃水浴孵育溶解沉淀，混匀后使用。
本试剂盒所有操作均在室温进行，所有离心也均在室温进行。
Collection Tube在一次抽提中需多次使用，切勿中途丢弃。

常见问题

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