细胞毒性检测试剂盒(乳酸脱氢酶法)

Name: 细胞毒性检测试剂盒(乳酸脱氢酶法)
Brand: Abbkine
SKU: KTA1030
Price: 198 CNY
Availability: InStock

LDH Cytotoxicity Assay Kit

产品货号

KTA1030

产品特点：

无需裂解细胞，直接检测上清，简化实验流程

LDH 释放形成可视化颜色反应，结果直观易读

兼容 96 孔板高通量检测，适用 1×10³–1×10⁵ 个细胞/孔

试剂盒内含 LDH 阳性对照，便于建立标准曲线与质控

冰袋运输，-20 °C 避光保存，有效期 6 个月

选择规格

96 T

¥198

现货（当天发货）

480 T

¥598

现货（次日发货）

🎉 限时优惠

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活动截止时间：2024年1月31日

产品概述

亚科因生物研发的细胞毒性检测试剂盒（乳酸脱氢酶法）（LDH Cytotoxicity Assay Kit，货号：KTA1030）是一种基于乳酸脱氢酶（LDH）释放原理的比色检测体系，可快速、直观地评估细胞质膜完整性变化，从而判断化合物或环境因素诱导的细胞死亡水平。

细胞死亡或细胞毒性的经典判定依据之一是细胞质膜损伤。LDH 是一种广泛存在于所有细胞类型中的稳定胞质酶，当质膜完整性受损时，LDH 会迅速从胞内释放至上清培养基中。本试剂盒通过检测培养基中 LDH 催化乳酸生成丙酮酸并伴随 NAD⁺ 还原为 NADH 的反应，再利用 PES 介导的 MTT 显色体系，将 NADH 的生成量转化为 570 nm 处可定量的颜色变化，实现细胞毒性的快速评估。

应用领域

适用于细胞状态分析、细胞增殖/毒性研究，可用于药物筛选、环境毒理评估、生物材料相容性测试及肿瘤治疗机制探索等细胞水平实验。

产品参数

中文名称	细胞毒性检测试剂盒(乳酸脱氢酶法)
英文名称	LDH Cytotoxicity Assay Kit
产品货号	KTA1030
试剂盒组分	• 实验缓冲液 • 乳酸溶液 • MTT溶液 • PES溶液 • LDH阳性对照 • NAD+溶液 • Triton X-100 (10%)
注意事项	建议进行预实验，以确定最佳的细胞用量。
保存建议	建议收到货后避光保存于-20°C，有效期为6个月。
运输条件	冰袋运输（蓝冰）
警告	本文列出的产品仅供研究使用，不适用于人类或临床诊断。我们产品所推荐应用，不是建议使用我们的产品去违反任何专利或许可证。对于使用本产品可能发生的专利侵权或其他违规行为，我们不承担任何责任。

使用说明

自备耗材

酶标仪（能测 565 nm处的吸光度）及二氧化碳培养箱
96孔板，透明平底
平板离心机（可选）
可调节式移液枪及枪头
去离子水

试剂盒组分

组分	规格	储存条件
Assay Buffer	10 mL (96 T) / 50 mL (480 T)	4℃
Lactic Acid Solution	5 mL (96 T) / 25 mL (480 T)	4℃
MTT Solution	2 mL (96 T) / 10 mL (480 T)	-20℃，避光保存
PES Solution	120 µL (96 T) / 600 µL (480 T)	-20℃
LDH Positive Control	120 µL (96 T) / 300 µL (480 T)	-20℃
NAD+ Solution	1 mL (96 T) / 5 mL (480 T)	-20℃
Triton X-100 (10%)	10 mL	4℃

试剂准备

Assay Buffer：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
Lactic Acid Solution：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。
MTT Solution：即用型；整个实验过程中，冰上避光放置；分装保存于-20℃。
PES Solution：即用型；整个实验过程中，冰上避光放置；分装保存于-20℃。
LDH Positive Control：即用型；整个实验过程中，冰上避光放置；分装保存于-20℃。
NAD+ Solution：即用型；整个实验过程中，冰上避光放置；分装保存于-20℃。
Triton X-100（10%）：即用型；使用前，平衡到室温；4℃保存。

LDH Reaction Solution：通过混合 3.7 mL Assay Buffer，1.4 mL MTT Solution，800 µL NAD+ Solution，100 µL PES Solution，4.0 mL Lactic Acid Solution，以制备足以用于一个 96孔板的 10 mL LDH反应溶液，建议现配现用。

实验步骤

A 确定药物是否适用该试剂盒

个别药物可能会干扰反应体系，故不适用于该试剂盒，因此，我们建议执行初始预实验，以确定计划使用的目标药物是否适用于该试剂盒，如果预实验显示药物有抑制作用，联系 Abbkine技术支持。

培养细胞 24 h以上，离心除去颗粒，得到细胞培养上清。
将细胞培养上清加入到 96孔细胞培养板中，200 μL/孔，设置 6个复孔。
在 3个孔中加入 20 μL目标药物，另外 3孔加入 20 μL Assay Buffer作为对照孔。
每孔各取 100 μL转移到新的 96孔检测板中。
每孔加入 100 μL LDH Reaction Solution。
将板在 37℃下孵育最多 30 min。
用酶标仪读取 565 nm处的吸光度。
评估加药孔与对照孔的吸光度，若加药孔明显小于对照孔，说明该药物不适用于该试剂盒。

B 样本测定

根据细胞的大小和生长速度确定最佳浓度，将 200 μL细胞接种到 96孔细胞培养板中，使待检测时细胞密度不超过 80-90%。
从 96孔板中吸出生长培养基。用 PBS洗涤细胞一次，然后将生长培养基替换为含 1%血清的低血清培养基，再孵育 1 h。
将 200 μL 1%低血清培养基（无细胞）添加至三个孔作为背景对照和三个孔作为 LDH阳性对照（可选做）。
通过所需方法诱导细胞毒性，向适当的孔中一式三份添加 20 μL药物。将 20 μL Assay Buffer添加到三个含有细胞的孔中作为自发释放，同时将 20 μL Assay Buffer添加到三个只含 1%低血清培养基无细胞的孔中作为背景对照。
在 37℃的 CO2培养箱中孵育平板，使其达到实验所需的的时间。
在预定的检测前的 1 h，将 20 μL 的 10% Triton X-100 溶液添加到三个含有细胞的孔中作为最大释放，将 20 μL LDH Positive Control添加到三个只含 1%低血清培养基无细胞的孔中作为阳性对照，反复吹打数次混匀，继续在 CO2培养箱中孵育。
以 400 g的速度离心 96孔组织培养板 5 min（可选做，但建议做）。
将 100 μL细胞上清液转移至新的 96孔测定板中。
向每个孔中添加 100 μL LDH Reaction Solution。
在 37℃下孵育平板最多 30 min。
用酶标仪读取 565 nm处的吸光度。
从所有孔中减去背景 A565水平。

注意：加入药物浓度应是反应体系的终浓度。每个实验的结果计算为"细胞毒性百分比"，或靶细胞中所含 LDH总量的百分比。因此，对于每个实验，必须有一组对照孔，其中使用试剂盒中提供的 10% Triton X-100溶液杀死所有靶细胞。这些就是"最大释放量"。同样，在每个实验中，必须有一组对照孔，其中未添加细胞毒性剂或细胞毒性细胞，从而导致最低的（自发的）LDH释放，就是"自发释放"细胞孔。用细胞毒剂处理的细胞将释放一定数量的 LDH，该数量介于最大释放水平和自发释放水平之间。

结果计算

以下公式计算为"细胞毒性百分比"

细胞毒性百分比 (%) =(A 样本－A 自发) / (A 最大释放－A 自发)×100

A 样本，毒性试剂处理样本在 565 nm处的吸光度；A 自发，样本在 565 nm处自发释放的吸光度；A 最大释放，样本在 565 nm处最大释放的吸光度。

注意事项

不同批次号、不同的厂家的组分不要混用；否则，可能导致结果异常。
混合或复溶组分时，避免产生气泡。
勤换吸头，避免各组分之间的交叉污染。
实验开始前，确保所有的组分及设备处于合适的温度。
保持好的实验习惯，穿戴好手套、实验服、口罩、防目镜等防护工具后再开始实验。

常见问题

Q: 不同批次的试剂盒染色液的颜色深度有差异，这是是什么原因？

A: 显色物是MTT和PES，不同批次的PES颜色有轻微差异，这是正常的现象，而且我们有做本底值排除，所以不会影响客户的实验结果。

Q: 该试剂盒是否可以检测细胞培养液？

A: 可以，检测细胞释放到培养基中的LDH。

Q: 该试剂盒的检测范围是多少呢？说明书上没有相关信息。

A: 不同毒物对细胞的毒性不同，这个试剂盒的结果就是通过测定细胞释放的LDH来估算细胞的存活百分比的，所以对不同的样本检测结果不同，检测参考范围需要客户按照说明书用对照组细胞分别进行对照处理和TritonX-100处理，分别得到0%和100%活力的吸光度值。

文献引用

NEIL1 drives the initiation of colorectal cancer through transcriptional regulation of COL17A1.

杂志名称: Cell Reports | 作者: Cao, **g-Hua, et al.

IF: 8 | 发表时间: 2024

Pharmacological Inhibition of Phosphoglycerate Kinase 1 Reduces OxiDative Stress and Restores Impaired Autophagy in Experimental Acute Pancreatitis.

杂志名称: Inflammation | 作者: Chen, Lin, et al.

IF: 4 | 发表时间: 2024

Paeoniflorin inhibits pyruvate dehydrogenase kinase 3 and promotes BDNF activity by modulating neuronal activity and TNF-α.

杂志名称: Brain Research | 作者: Anwar, Saleha, and Suhel Parvez.

IF: 2.600 | 发表时间: 2025

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