抗体纯化试剂盒(蛋白A/G)-PurKine™

试剂

样本制备

样品在上样前建议离心或 滤膜过滤，以防止堵塞柱子。如果样本太粘稠，可以用 稀释，注意0.22 μm/0.45 μm Binding/Wash buffer 不要超过树脂的载量。为了确保样品溶液有合适的离子强度和 值，保持在最佳结合状态，必须用pH Binding /Wash Buffer 1:1至少 稀释血清样本、腹水或细胞培养上清液。或者使用 Binding/Wash Buffer 0.22 μm 0.45 μm透析过夜。建议使用前用 或 滤膜过滤样 品溶液。

蛋白纯化流程

1. 固定重力柱，去掉上端塞和下端塞，流干保护液。
2. 2 Binding buffer 3向柱中加入 倍柱体积 。平衡树脂，流干后，再重复 次。
3. 将处理好的蛋白提取物样本（蛋白提取物与等体积的 混合制备样本）加入树脂中孵育。注意收集流穿液，可通过Binding bufferSDS-PAGE分析。

   注意：为了最大限度结合，样本可在 或室温与树脂孵育 ，注意不要超过树脂的载量。4℃ 30 min

4. 2 Wash Buffer SDS-PAGE 6向柱中加入 倍柱体积 ，去除非特异性吸附蛋白。注意收集洗杂液用于 检测分析，重复 次。
5. 5-10 Elution Buffer向柱中加入 倍柱体积的 洗脱蛋白，或直至流出物 稳定，收集洗脱液并立即用OD280 nm Neutralization Buffer中和至 （ 洗脱液体积）。pH 7.4 1/10
6. SDS-PAGE Western blotting检测和鉴定含有目标蛋白的组分。通过紫外分光光度计， 或 。

柱子保存

用 倍柱体积的 和 倍柱体积的去离子水依次清洗平衡柱，重复 次。然后加入 倍柱体积的 乙醇，重复 次。2 Binding buffer 2 2 2 20% 1 加入等体积含 乙醇的 作为贮存缓冲液， 保存，防止树脂被细菌污染。20% 1×PBS 4℃

在位清洗

一般情况下，树脂至少可以使用 次。当非特异性蛋白的增多和聚集导致流速和载量下降时，需要对树脂进行清洗。5

去除沉淀或变性的蛋白质：

用 倍柱体积的 盐酸胍溶液洗柱。最后用 倍柱体积 × （ ）洗柱。2 6 M 5 1 PBS pH7.4

去除非特异性吸附蛋白：

用 倍柱体积的 乙醇或3 70% 1% Triton X-100 5 1 PBS pH 7.4洗柱。最后用 倍柱体积 × （ ）洗柱。

常见问题