谷草转氨酶（AST）活性检测试剂盒怎么选？赖氏法与速率法、样本与量程的选购要点
选购谷草转氨酶（AST/GOT）活性检测试剂盒，光看产品名称和货号还不够。
实际做实验时，经常遇到这样的问题：试剂盒买回来了，才发现酶标仪不支持所需波长；血清测出来超出量程，需要重新稀释；样本数量太多，一块96孔板放不下；或者实验做完才发现，自己的结果和文献中的数据不能直接比较。
这些问题大多可以在选购前避免。
本文从检测方法、样本类型、检测范围、仪器要求和结果计算几个方面，介绍AST活性检测试剂盒的选择方法，并以CheKine™ 天门冬氨酸氨基转移酶（谷草转氨酶/AST/GOT）活性检测试剂盒（赖氏法，货号KTB1420）为例，说明具体的选购注意事项。
一、先弄清楚：AST检测能说明什么？
AST（天冬氨酸氨基转移酶，旧称GOT）广泛分布于肝脏、心肌、骨骼肌、肾脏等组织。当细胞受到损伤，细胞内的AST可能释放进入血液，使血清AST活性升高。
因此，AST常被用于组织损伤相关研究，但它并不是某个器官特有的指标。
例如，在肝损伤实验中，研究人员通常会同时检测ALT（谷丙转氨酶）和AST。ALT相对更集中于肝细胞，两项指标结合分析，比单独观察AST更有参考价值。
如果研究对象是心肌或骨骼肌损伤，则需要结合实验模型及其他检测指标，判断AST变化的意义。
这也涉及试剂盒的选购。如果实验需要同时测定ALT和AST，建议提前考虑两者的检测方法、样本处理方式及结果单位，尽量保持一致，方便后续分析。
选购前还需要明确三个问题：
样本类型： 检测的是血清（浆）、组织匀浆，还是细胞裂解液？
结果归一化： 组织或细胞样本按组织质量、蛋白含量，还是细胞数量计算？
结果单位： 最终需要报告U/L、U/g、U/10⁶个细胞，还是U/g prot？
这些条件会影响后面的样本准备、试剂盒用量和数据处理。
二、检测方法怎么选：赖氏法还是速率法？
AST活性检测常见的方法有赖氏法和速率法。两者都可用于酶活性测定，但检测原理、读数方式和仪器要求不同。
1. 赖氏法：终点比色，适合常规可见光检测设备
赖氏法（Reitman-Frankel法）属于终点比色法。
AST催化底物反应一段时间后，加入显色试剂，根据最终产生的颜色变化测定吸光度，再通过标准曲线计算酶活性。
以KTB1420为例，检测波长为505 nm，使用普通透明96孔板即可完成检测。
这种方法对仪器的要求相对简单。如果实验室已有支持505 nm读数的酶标仪，一般不需要额外配置紫外动力学检测设备。
不过，赖氏法的操作步骤需要特别注意。
KTB1420每次实验都需要制作标准曲线，而且每个样本需要设置测定孔和对照孔。
两种孔的区别在于样本加入时间：
测定孔：样本参与第一阶段30 min的酶促反应。
对照孔：样本在第一阶段30 min孵育结束后才加入，不参与这段酶促反应。
计算时，通过测定孔与对照孔的吸光度差值，扣除样本自身带来的背景信号，再计算相应的酶活性。
因此，每个样本需要占用两个孔。计算试剂盒用量和96孔板容量时，必须把这一点考虑进去。
2. 速率法：连续监测反应速度
速率法采用偶联酶反应原理，通过后续反应消耗NADH，并连续监测340 nm处吸光度的下降速度，计算AST活性。
与赖氏法只读取终点吸光度不同，速率法需要记录一定时间内吸光度的变化。
这对仪器提出了更高的要求：
能够在340 nm波长下检测；
支持动力学连续读数；
通常还需要稳定的温度控制条件。
具体的读数程序及耗材要求，应以所选速率法试剂盒的说明书为准。
3. 两种方法该怎么选择？
主要看实验条件和研究需求。
如果实验室只有常规可见光酶标仪，可以优先考虑赖氏法，但要确认设备能否读取505 nm。
如果仪器支持340 nm动力学检测，则可以考虑速率法。
对于持续开展的实验项目，建议从开始就统一检测方法。不同方法的结果受到检测原理、反应条件及单位定义等因素影响，不宜直接混在一起比较。
如果暂时不能确定哪种方法更适合自己的样本，可以先做小规模预实验。
KTB1420的样本提取液也可以用于AST速率法试剂盒KTB2303。研究人员可以选取少量代表性样本，分别使用两种方法检测，比较实际的检测表现，再确定后续实验方案。
三、样本与量程：下单前需要算清楚的几件事
选购AST试剂盒时，检测范围和样本用量尤其值得关注。
同样是检测AST，不同样本的酶活性可能相差很大。血清、肝组织和细胞裂解液，不能简单按照同一种稀释倍数处理。
1. 先看检测范围，判断是否需要稀释
KTB1420使用卡门氏单位建立标准曲线，标准曲线范围为0～190卡门氏单位。
按照产品给出的换算关系：
1卡门氏单位 = 0.482 U/L
对应的活性范围约为0～92 U/L。
不过，标准曲线的覆盖范围不等于所有样本都可以直接在该范围内测定。
根据产品说明书：
当计算得到的卡门氏单位y值超过150（约72 U/L）时，需要稀释样本后重新检测。
当y值低于3时，需要增加样本用量。
这一点对动物血清样本尤其重要。
不同动物、不同实验模型之间的AST活性可能存在明显差异。有些实验动物的血清AST基础水平就可能达到或超过上述直接测定阈值，组织损伤模型中的AST活性还可能进一步升高。
因此，准备检测动物血清时，不建议默认所有样本都可以直接上板。
比较稳妥的方式，是从对照组和模型组中选取2～3个具有代表性的样本，先进行预实验，确定合适的稀释倍数。
这样可以减少整批实验完成后因超出检测范围而重新测定的情况。
2. 血清（浆）样本：注意实际消耗量
KTB1420检测血清样本时，每孔加入5 µL样本。
由于每个样本需要设置测定孔和对照孔，因此：
每个血清样本完成一次检测，需要10 µL样本。
如果还需要做复孔，或者因为超出检测范围而重新测定，样本消耗量会继续增加。
对于小鼠等样本量有限的动物实验，这一点需要提前考虑。
特别是同一份血清还要检测ALT、AST及其他生化指标时，建议把各项目所需样本体积相加，再安排样本分装。
3. 组织样本：肝组织需要特别注意稀释
AST在肝组织中的含量较高。
根据KTB1420的使用建议，肝组织样本通常建议稀释20～60倍后检测。
其他组织的AST活性差异较大，没有统一适用的稀释倍数，建议通过预实验确定。
组织样本的前处理可按照0.1 g组织加入1 mL缓冲液的比例进行匀浆。
按这一比例估算，每次检测所需的10 µL提取液，大约对应1 mg组织。
实际实验中，除了样本量，还要注意组织取样和匀浆的均匀性，避免样本处理差异影响检测结果。
4. 细胞样本：先计算细胞数量是否充足
对于细胞样本，KTB1420的参考处理比例为：
5×10⁶个细胞加入1 mL缓冲液进行裂解。
按这一比例计算，一次检测使用10 µL裂解液，约对应5×10⁴个细胞。
如果使用原代细胞，或者实验能够获得的细胞数量较少，建议提前核算检测次数和重复数量，避免样本不足。
5. 样本保存：尽量避免溶血和反复冻融
AST活性检测优先使用新鲜样本。
如果不能及时测定，可将样本分装后置于-80℃保存，并在一个月内使用。
采集和分离血清时，还应尽量避免溶血。
红细胞中也含有AST，发生溶血可能造成血清AST检测结果偏高。因此，血清分离过程中的操作质量也会影响结果可靠性。
如果使用血浆样本，具体抗凝剂的选择建议提前咨询技术支持：400-6800-830。
四、仪器与检测通量：一块96孔板能测多少样本？
KTB1420采用微量法检测，对仪器的要求相对常规。
主要需要准备：
可读取505 nm的酶标仪，使用前需预热30 min以上；
普通透明96孔板；
37℃恒温箱；
组织匀浆器、细胞超声破碎仪；
低温离心机和制冰机等样本前处理设备。
其中，有几个实际操作问题值得提前确认。
1. 酶标仪是否支持505 nm？
如果使用单色器型酶标仪，可以直接设置505 nm检测波长。
如果使用滤光片型酶标仪，需要确认是否配有505 nm滤光片。
对于只能读取相近波长的仪器，不建议自行更改检测波长。是否可以替代，应先咨询技术支持。
2. 96孔板并不能放48个完整样本
KTB1420有96 T/48 S的产品规格，其中48 S表示48个样本的检测规格。
但实际安排一块96孔板时，还要预留标准曲线孔。
根据该产品的检测流程，每次实验需要设置：
1个空白孔；
4个标准孔；
每个样本2个孔，分别为测定孔和对照孔。
按此计算：
（96－5）÷2 = 45.5
也就是说，如果每个样本仅按一组测定孔和对照孔进行检测，一块96孔板最多可以安排45个完整样本。
如果每个样本需要做复孔，则一块板大约只能检测22个样本。
因此，在估算整批实验需要多少块板时，按实际孔位计算会比直接使用产品标注的样本数更准确。
3. 一次检测大约需要多长时间？
KTB1420的主要反应过程包括：
第一阶段孵育30 min；
第二阶段孵育20 min；
加入显色试剂后，室温静置10 min。
反应过程合计约1小时，不包括组织匀浆、细胞裂解、离心和移液等前处理时间。
如果一次需要检测大量样本，还应考虑加样顺序及各孔反应时间的一致性。
4. 小体积移液要格外注意
KTB1420的部分加样体积较小：
样本：5 µL；
标准品：2～8 µL；
Reagent Ⅰ、Reagent Ⅱ：20 µL；
Reagent Ⅲ：200 µL。
其中，标准品和样本的移液精度比较重要。
建议使用量程合适的小量程单道移液器，特别是标准品各孔的加入体积不同，应按要求逐孔准确加入。
对于20 µL和200 µL等较大体积的试剂，在样本数量较多时，可以考虑使用多通道移液器，提高操作效率。
加样时应将试剂加入孔底并充分混匀，避免试剂残留在孔壁上，影响反应和读数。
五、同时检测AST、ALT，样本提取液能不能共用？
不少研究需要在同一批组织或细胞样本中，同时检测AST、ALT等指标。
如果不同试剂盒能够共用样本提取液，就可以减少重复匀浆和样本消耗。
KTB1420制备的样本提取液，还可以用于以下产品：
| 检测项目 | 货号 | 检测方法 |
|---|---|---|
| ALT活性 | KTB1410 | 赖氏法 |
| ALT活性 | KTB2302 | 速率法 |
| AST活性 | KTB2303 | 速率法 |
如果还需要按照蛋白浓度对组织或细胞的AST活性进行归一化，可以搭配BCA法蛋白质定量试剂盒KTD3001。
这样，同一份组织或细胞样本经过一次提取后，就可以用于AST、ALT及蛋白浓度检测，减少重复前处理。
但在实验设计阶段，需要提前确定结果的归一化方式。
例如，按组织质量计算和按蛋白含量计算，最终得到的单位不同。如果计划按蛋白浓度归一化，就需要同时安排蛋白定量检测。
六、AST活性结果怎么算？能不能直接和文献比较？
1. 赖氏法需要建立标准曲线
KTB1420每次实验都需要重新制作标准曲线。
它采用的是二次多项式拟合：
y = ax² + bx + c
不是简单的线性拟合。
如果直接使用线性方程处理标准曲线，可能引入系统偏差，影响最终酶活性计算。
为方便计算，官网技术中心提供了在线计算器，可以根据吸光度数据计算检测结果。
2. 不同样本对应不同的结果单位
根据样本类型和归一化方式，KTB1420可以采用以下四种结果表达方式：
| 样本类型或归一化方式 | 结果单位 |
|---|---|
| 血清（浆），按体积计算 | U/L |
| 组织，按质量计算 | U/g |
| 细胞，按细胞数量计算 | U/10⁶个细胞 |
| 组织或细胞，按蛋白含量计算 | U/g prot |
其中，血清（浆）AST活性由卡门氏单位换算为U/L时，使用以下关系：
U/L = 卡门氏单位 × 0.482
这里还有一个容易产生疑问的地方。
卡门氏单位的定义条件为25℃，但KTB1420的标准孔和样本孔均在37℃条件下反应。
按照该产品的计算方式，标准曲线已经建立了吸光度与卡门氏单位之间的对应关系。因此，从标准曲线得到y值后，按说明书公式乘以0.482即可，不需要再额外进行温度换算。
3. 不同检测方法的结果不能直接互换
整理实验数据或查阅文献时，需要确认对方使用的检测方法、反应条件及结果单位。
赖氏法与速率法在检测原理和活性计算方式上存在差异。即使检测的是同一种酶，不同方法得到的结果也不宜直接互换。
如果同一个实验项目涉及多个批次，建议保持检测方法和结果单位一致。
此外，KTB1420仅供科学研究使用，不用于临床诊断。科研检测结果也不宜直接与医院生化分析仪出具的临床报告数值比较。
七、KTB1420适合哪些实验需求？
了解前面的选购条件后，可以进一步看看KTB1420的具体配置。
CheKine™ 天门冬氨酸氨基转移酶（谷草转氨酶/AST/GOT）活性检测试剂盒（赖氏法）
| 项目 | 产品信息 |
|---|---|
| 产品货号 | KTB1420 |
| 检测方法 | 赖氏法 |
| 检测波长 | 505 nm |
| 适用样本 | 动物组织、细胞、血清（浆） |
| 检测方式 | 微量法 |
| 样本加样量 | 5 µL/孔 |
| 产品规格 | 96 T（48个样本）、192 T（96个样本） |
| 保存条件 | 4℃避光 |
| 保存期限 | 24个月 |
| 运输条件 | 冰袋运输 |
在标注规格之外，产品各组分还额外提供10%的试剂量，用于标准曲线制作或预实验。
除酶标仪外，KTB1420也兼容分光光度计检测，但需要按比例调整试剂配制量。具体使用方式可以咨询技术人员。
从上述条件来看，如果实验室具备505 nm检测设备，需要测定动物组织、细胞或血清（浆）中的AST活性，并且能够接受终点比色和标准曲线操作，可以考虑KTB1420。
如果实验室更适合开展340 nm动力学检测，则可以进一步了解AST IFCC速率法试剂盒KTB2303。
KTB1420相关文献示例
以下列出部分使用KTB1420的已发表研究，供实验设计时参考。
文献1
Cui C, et al. Lactobacillus acidophilus extracellular vesicles-coated UiO-66-NH2@siRNA nanoparticles for ulcerative colitis targeted gene therapy and gut microbiota modulation.
Journal of Nanobiotechnology, 2025.
文献2
Li F, et al. Mechanistic study on nonylphenol-induced liver fibrosis via Pink1/Parkin-mediated mitophagy and lipid droplet degradation in hepatic stellate cells.
Ecotoxicology and Environmental Safety, 2025, 305: 119206.
以上仅作为试剂盒使用文献示例。具体样本处理、实验分组及检测方法，应以原始文献为准。
八、下单前，建议核对这8个问题
购买AST活性检测试剂盒前，可以按照下面的清单逐项确认。
样本是否适用？ 是动物组织、细胞还是血清（浆），是否在试剂盒支持范围内？
仪器是否匹配？ 酶标仪能不能读取505 nm？实验室是否具备37℃恒温条件？
样本是否可能超量程？ 血清AST活性是否可能超过约72 U/L的直接测定阈值？是否需要提前做稀释预实验？
样本量够不够？ 每个血清样本完成一次检测需要10 µL。如果同时检测ALT和其他指标，现有样本是否充足？
检测通量够不够？ 按每块96孔板单孔测定最多45个完整样本估算，需要准备多少块板？
是否同时检测ALT？ 如果两项都测，是否需要统一检测方法和结果单位？
是否需要蛋白定量？ 组织或细胞样本准备按质量、细胞数还是蛋白含量进行归一化？
结果如何使用？ 最终采用什么单位？是否需要与其他批次或已发表文献比较？
选购试剂盒时，先确定样本、检测范围和仪器条件，再估算样本消耗量及检测通量，可以减少后续实验中的重复操作。
如果对样本稀释倍数、检测波长、提取液兼容性或结果计算有疑问，可联系技术支持进一步确认。
技术支持电话：400-6800-830
注：本产品仅供科学研究使用，不用于临床诊断。具体实验操作及技术参数以产品随附说明书为准。
